163157. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy polipeptid előállítására

163157 15 c) F 2 peptidfragmens: a) 16 H-Ser-Gly-Met-Gly-Phe-Gly-Pro-Glu-Thr-Pro-NH2 • HCl 18,5 g H-Ser-Aisp(NH2)-Leu-Ser-0Me. HCl-t és 18 g BOC-Cys(Bzl)-ONP-t 100 ml dimetilformamidban oldunk, az oldathoz 10 ml vizet, 3,5 ml 5 ecetsavat és 5,6 ml trietilamint adunk, 25°-on 16 óra hosszat állni hagyjuk, szárazra pároljuk, és a maradékot metanolból átkristályosítjuk. 25,1 g BOC-Cys(Bzl)-Ser-Asp(NH2)-Leu-Ser-OMe-t 20 10 kapunk. Olvadáspontja 182°; [«]D

=—17° (c=l, dimetilformamidban). Ezt a terméket enyhe melegítés közben 200 ml dimetilformamidban oldjuk, hozzáadunk 200 ml metanolt és 20 ml hidrazinhidrátot, 30°-on 16 óra hosszat állni hagy- 15 juk, dietiléter hozzáadásával az F 2 peptidfragmenst kicsapjuk, 1:1 arányú dietiléter-metanol eleggyel mossuk, és megszárítjuk. Olvadáspontja 20 224°; [a] =—13° (c=l, dimetilformamidban). 20 25 F peptidfragmens: BOC-Cys-Ser-Asp(NH2

)-1 -Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-OH 18,4 g BOC-Cys(Bzl)-Ser-Asp(NH2

)-Leu-Ser -NHNH2

-t (F 2 peptidfragmens) 150 ml dimetilformamidban oldunk, az oldatot —20°-ra hűtjük, 40 ml 2 n dioxános hidrogénklorid-oldatot, majd 15 ml terc-butilnitritet adunk hozzá. Tíz perc „. múlva —20c

-on még hozzáadunk 28 ml trietilamint és 16,2 g H-Thr-Cys(Bzl)-Val-Leu-OH-t (F 1 peptidfragmens), és 25°-on 16 óra hosszat keverjük. Ezután leszűrjük, az oldatot bepároljuk, és a maradékot n ecetsavval mossuk. BOC- 35 -Cys(Bzl)-Ser-Asp(NH2

)-Leu-Ser-Thr-Cys(Bzl)-Val-Leu-OH-t kapunk. Oladáspontja 217°; 20 [a]D

=—17° (c=l, dimetilformamidban). Az így kapott terméket 5000 ml vízmentes csepp- 40 folyós ammóniában oldjuk, keverés és ammónia forrása közben nátriumot adunk hozzá sötétkék színeződésig, majd ammóniumkloriddal elszíntelenítjük. A reakciókeveréket szárazra pároljuk, és a maradékot n ecetsavval és acetonnal mos- 4

^ ' suk. Szárítás után BOC-Cys-Ser-Asp(NH2

)-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-OH-t kapunk. Olvadás-20 pontja 248° (bomlik); [a]D

=—41° (c=l, dime-tílformamid és víz 3:1 arányú elegyében). Az így kapott nonapeptidet 5000 ml 0,01 n ammóniaoldatban oldjuk, az oldathoz addig adunk n hidrogénperoxid-oldatot, amíg nitroprusszidnátriummal már nem ad vörös száneződést, majd 55 200 ml jégecetet adunk hozzá, leszűrjük, és liofilizáljuk. így F peptidfragmenst kapunk. Olva-20 dáspontja 238° (bomlik); [«]D

=—18° (c=l, dimetilformamid és víz 3:1 arányú elegyében). ABC peptidfragmens: H-His-Arg-Phe-Ser-Gly-Met-Gly-Phe-Gly-Pro-Glu-Thr-Pro-NH2

. 3CH

3

COOH

65 6,7 g BOC-Ser-Gly-Met-Gly-OH-t (B peptidfragmens), 12 g H-Phe-Gly-Pro-Glu(OTB)-Thr-Pro-NH2

-t (A peptidfragmens) és 2,1 g N-hidroxiszukcinimidet feloldunk 50 ml dimetilformamidban és 20 ml acetonitrilben, az oldatot 0°-ra hűtjük, hozzáadunk 4,0 g diciklohexilkarbodiimidet, és 0°-on 16 óra hosszat állni hagyjuk. Az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot vízzel, dietiléterrel és etilaoetáttal mossuk, és kloroformból kikristályosítjuk. BOC-Ser-Gly-Met-Gly-Phe-Gly-Pro-Glu(OTB)-Thr-Pro-NH2

-t kapunk 121° ä 20 olvadásponttal (bomlik); [a] D = —47° (c=l, dimetilformamidban). Ezt a terméket 250 ml 8 n dioxános hidrogénklorid-oldatban oldjuk. Az oldatot 2 óra hosszat 25°-on keverjük, szárazra pároljuk, és a maradékot dietiléterrel feldolgozzuk. A cím szerinti vegyületet kapjuk 130° olvadás-20 ponttal (bomlik); [a]D

=—48° (c=l, dimetilformamidban). b) ABC peptidfragmens 9,9 g Trt-His(Trt)-Arg-Phe-NHNH

2-t (C peptidfragmens) 100 ml dimetilformamidban oldunk, az oldatot —20°-ra hűtjük, hozzáadunk 15 ml 2 n dioxános hidrogénklorid-oldatot, majd 1,16 ml terc-butilnitritet, 10 percig —20°-on keverjük, és hozzáadunk 28 ml trietilamint és 10,0 g H-Ser-Gly-Met-Gly-Phe-Gly-Pro-Glu-Thr-Pro-NH2. HCl-t, 0°-on 4 óra hosszat keverjük, leszűrjük, és szárazra pároljuk. A maradékot etilacetát és metanol 8:2 arányú elegyében oldjuk, az oldatot híg vizes ammóniával, majd vízzel semleges reakcióig mossuk, nátriumszulfáton szárítjuk, 100 ml-re koncentráljuk, és dietilétert adunk hozzá. A kivált csapadékot dimetilformamidban oldjuk, és dietiléterrel ismét kicsapjuk. Trt-His(Trt)-Arg-Phe-Ser-Gly-Met-Gly-Phe-Gly-Pro-Glu-Thr-Pro-NH2

-t kapunk 168° olvadás-20 ponttal (bomlik); [a]D

= —43° (c=l, dimetilformamidban). Ezt a terméket 500 ml 8:2 arányú ecetsav-víz elegyben oldjuk, az oldatot 20 percig 90°-on melegítjük, bepároljuk, a maradékot dietiléterrel mossuk, és nagyvákuumban káliumhidroxid forgácsok fölött megszárítjuk. Így az ABC peptidfragmenst kapjuk 180° olvadás-20 ponttal (bomlik); [a]D

=—66° (c=l, ecetsavban). DE peptidfragmens: Trt-Ser-Ala-Tyr-Try-Lys(BOC)-Asp(NH2

)-Leu-Asp(NH

2

)--Asp(NH2

)-Tyr-NHNH

2 a) Trt-Ser-Ala-Tyr-Try-Lys(BOC)-Asp(NH2

)-Leu-Asp(NH2

)-Asp(NH

2

)-Tyr-OMe 4,3 g Trt-Ser-Ala-Tyr-Try-NHNH2

-t 50 ml di-