163157. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy polipeptid előállítására

163157 17 18 metilformamidban oldunk, ehhez az oldathoz —20°-on hozzáadunk 8,2 ml 2,3 n dioxános hidrogénklorid-oldatot. Ezután —20°-on hozzácsepegtetünk 1,3 ml 1:1 arányú terc-butilnitrit-dioxán elegyet, majd hozzáadunk 3,5 ml trietilamint és 5 utána 4,5 g 200 ml dimetilformamidban oldott H-Lys(BOC)-Asp(NH2)-Leu-Asp(NH2)-Asp(NH2)-Tyr-OMe-t. A keveréket 3 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük, majd leszűrjük. A szüredéket bepároljuk, és a maradékot etilacetátban ^ szuszpendáljuk. Szűrés és etilacetáttal és vízzel való mosás után a cím szerinti vegyületet kap-20 juk. Olvadáspontja 240° (bomlik); [«]D

=—2° (c=l, dimetilformamidban). 15 b) Trt-Ser-Ala-Tyr-Try-Lys(BOC)-Asp(NH2)-Leu-Asp(NH2)-Asp(NH

2

)-Tyr-NHNH

2 6 g Trt-Ser-Ala-Tyr-Try-Lys(BOC)-Asp(NH2

)- 20 -Leu-Asp(NH2)-Asp(NH2)-Tyr-OMe-t 60 ml dimetilformamidban oldunk, hozzáadunk 6 ml hidrazinhidrátot, és 2 napig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután az oldatot bepároljuk, a maradékot vízzel eldörzsöljük, és vízzel és éterrel 25 mossuk. A DE peptidfragmenst kapjuk. Olvadás-20 pontja 244°; [a

]j\

= —9° (c=l, dimetilformamidban). ABCDE peptidiragmens: H-Ser-Ala-Tyr-Lys(BOC)-Asp(NH2

)-Leu-Asp(NH

2

)-Asp(NH

2

)-Tyr-His-Arg-Phe-Ser-Gly-Met-Gly-Phe-Gly-Pro-Glu-Thr-Pro-NH2. 2CH

3

COOH a) Trt-Ser-Ala-Tyr-Try-Lys(BOC)-Asp(NH2)-Leu-Asp(NH2

)-Asp(NH

2

)-Tyr-His-Arg-Phe-Ser-Gly-Met-Gly-Phe-Gly-Pro-Glu-Thr-Pro-NH2 30 35 40 10,5 g Trt-Ser-Ala-Tyr-Try-Lys(BOC)--Asp(NH2)-Leu-Asp(NH2

)-Asp(NH

2

)-Tyr-NHNH2

-t 200 ml dimetilformamidban oldunk, és az oldatot —20°-ra hűtjük, és dioxános hidrogénklorid-oldatot adunk hozzá. Ezután hozzácse- 45 pegtetünk 1 ml terc-butilnitritet, és egyesítjük 10,5 g H-His-Arg-Phe-Ser-Gly-Met-Gly-Phe-Gly-Pro-Glu-Thr-Pro-NH2-nek 15 ml trietilamin és 100 ml dimetilf ormamid elegyével készült oldatával. Két óra múlva étert adunk hozzá, és a csa- 50 padékot szűrőn kloroformmal és vízzel mossuk. A cím szerinti vegyületet kapjuk. Olvadáspontja 20 [a] =—43° (c=l, dimetilformamidbanl. U 55 242° b) ABCDE peptidfragmens: 15 g Trt-Ser-Ala-Tyr-Try-Lys(BOC)-Asp(NH

2)-Leu-Asp(NH2

)-Asp(NH2)-Tyr-His-Arg-Phe-Ser- 60 -Gly-Met-Gly-Phe-Gly-Pro-Glu-Thr-Pro-NH2-t 500 ml 80%-os ecetsavban oldunk, és 2 óra hoszszat 40°-on állni hagyjuk. Bepárlás és éterrel való kezelés után az ABCDE peptidfragmenst 65 ,20 kapjuk 238° olvadásponttal; MD

=—23° (c=l, ecetsavban). ABCDEF peptidfragmens: BOC-Cys-Ser-1 -Asp(NH2

)-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Ser--Ala-Tyr-Try-Lys(BOC)-Asp(NH2

)-Leu-Asp(NH2

)-Asp(NH

2

)-Tyr-His-Arg-Phe-Ser-Gly-Met-Gly-Phe-Gly-Pro-Glu-Thr-Pro-NH2

. CH

3

COOH . 3H

2

0 1,0 g nonapeptidet (F peptidfragmens) feloldunk 10 ml dimetilformamidban, hozzáadunk 1,5 g N-hidroxiszukcinimidet és 0,52 g diciklohexilkarbodiimidet, 25°-on 6 óra hosszat keverjük, leszűrjük, és a szüredéket bepároljuk. A száraz maradékot etilacetáttal és dietiléterrel mossuk, I és szárítjuk. BOC-Cys-Ser-Asp(NH2)-Leu-Ser-1 -Thr-Cys-Val-Leu-O-Su-t kapunk 242° olvadásponttal. Ezt a vegyületet 10 ml dimetilformamidban oldjuk, az oldathoz 3,1 g trikozapeptid-diacetátot (ABCDE peptidfragmens), és 1,2 g N-hidroxiszukcinimidet adunk, és 25°-on 16 óra hosszat keverjük. Ezután szárazra pároljuk, és a maradékot dietiléterrel, kloroformmal és acetonnal mossuk. Az így kapott nyers, védett dotriakontapeptidet 50 ml 70:30:5 arányú kloroform-metanol-víz elegyben oldjuk, az oldatot a fent nevezett oldószereleggyel kiegyensúlyozott 5x100 cm méretű kovasavgél oszlopra rétegezzük. Az eluálást metanolt növekvő arányban tartalmazó eleggyel végezzük. A tiszta peptidet tartalmazó egyesített frakciókat bepároljuk, a maradékot dietiléterrel mossuk, és káliumhidroxid fölött nagyvákuumban megszárítjuk. Az ABCDEF peptidfragmenst kapjuk 240° olvadásponttal (bom-20 lik); [a]D

=—40° (c=l, 2:1 arányú n eoetsavoldat-metanol elegyben). A termék aminosav-összetétele savas hidrolízis után (6 n sósavval, 16 óra): Alai,i, Argi,o, Asp3

,9,

Cys/2i,6

, Glui,

2

, Gly

3

,o, Hisi.i, Leu

2)9

, Lysi,o, Met1)0

, Phe

2

,o, Pro2,!, Ser

3

,8, Thr^g, Tyr

ll9

, Val

0

,g (Tryi,o spektrofotometrikusan). Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás az I képletű új polipeptid és savaddíciós sói H-L-Cys-L-Ser-L-Asp(NH2

)-L-Leu-L-Ser-L-Thr-L-Cys-L-Val-L-Leu-L-Ser-L-Ala-L-Tyr-L-Try-L-Lys-L-Asp(NH2

)-L-Leu-L-Asp(NH2

)-L-Asp(NH

2

)-L-Tyr-L-His-L-Arg- I -L-Phe-L-Ser-Gly-L-Met-Gly-L-Phe-Gly-L-Pro-L-Glu-L-Thr-L-Pro-NH2 előállítására azzal jellemezve, hogy megfelelő aminosavakat egyenként vagy kisebb peptidegységek alakjában a peptidkémia ismert módszerei szerint az I képletben rögzített sorrendben egymással összekapcsolunk, és a szintézis alkal-