163157. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy polipeptid előállítására
163157 9 10 Ezután időnként megkeverve 4 óra hosszat hűtőszekrényben állni hagyjuk. A keletkezett csapadékot kiszűrjük, és a szüredéket bepároljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk, majd sorban mossuk 10%-os káliumkarbonát-oldattal (10 pH), vízzel, telített nátriumklorid-oldattal, vízzel, telített nátriumklorid-oldattal, kénsawal (3 pH), vízzel és nátriumklorid-oldattal. A nátriumszulfáton szárított etilacetátos fázis teljes bepárlása után világosbarna habot kapunk. Ezt 2 ízben kevés metanolban oldjuk, és dietiléterrel kicsapjuk. Az éteres fázist dekantáljuk, és a csapadékot megszárítjuk. A címben megnevezett 20 vegyületet kapjuk amorf hab alakjában; [a]D = = —8° (c=l, dimetilformamidban vagy metanolban). d) H-His-Arg-Phe-OMe . 4HCI 25 g Z-His(Z)-Arg(N02 )-Phe-OMe-t 800 ml jégecetben feloldunk, és hozzáadjuk 10 g 10% palládiumtartalmú palládiumszénnek 200 ml n sósavval készült szuszpenzióját. A keveréket 2 óra hosszat hidrogénezzük, majd a katalizátort kiszűrjük. A szüredéket hozzáadjuk 5 g 10% palládiumot tartalmazó palládiumszénnek vízzel készült szuszpenzióját, és 5,5 óra hosszat hidrogénezzük. Eközben az elméletileg szükséges hidrogénnek kb. 80%-a fogy. A katalizátort kiszűrjük, és a szüredéket teljesen bepároljuk, mire a cím szerinti vegyületet amorf hab alakjában kapjuk. e) Trt-His(Trt)-Arg-Phe-OMe. HCl 21,5 g H-His-Arg-Phe-OMe. 4HCI-t 100 ml piridinben és kb. 100 ml dimetilformamidban oldunk. Kb. +5°-on trietilaminnal 9 pH-ra állítjuk be a keveréket, majd 5 perc alatt hozzácsepegtetjük 29 g tritilkloridnak 300 ml piridinnel készült oldatát. A hozzáadás befejeztével a pH-t időnként ellenőrizzük, és szükség esetén trietilaminnal ismét beállítjuk 9 pH~értékre. A reakciókeveréket 4 óra alatt bepároljuk, a maradékot kloroform és víz keverékében megosztjuk, és kevés n sósav hozzáadásával 4 pH-ra állítjuk be. A kloroformos fázist elválasztjuk, 2 ízben vízzel mossuk, nátriumszulfáton szárítjuk, és teljesen bepároljuk. A maradékhoz étert adunk, és az étert eltávolítva a cím szerinti vegyületet kapjuk. f) C peptidfragmens 17 g Trt-His(Trt)-Arig-Phe-OMe . HCl-t 200_ml metanolban oldunk, és hozzáadunk 40 ml hidrazinhidrátot. A reakciókeveréket 2 napig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd bepároljuk, a maradékot kloroformban oldjuk, és 2 ízben vízzel mossuk. A kloroformos fázist nátriumszulfáton szárítjuk, és bepároljuk. Ezután a maradékot diétiléterrel mossuk, és a C peptidfragmenst 15 20 45 50 20 szűréssel elkülönítjük; [a] D = tilamidban). -9° (c=l, dime-5 D peptidfragmens: H-Lys(BOC)-Asp(NH2 )-Leu-Asp(NH2 )-Asp(NH 2 )-Tyr-OMe a) Z-Asp(NH2 )-Tyr-OMe 89 g Z-Asp(NH2 )-OCP-t és 31 g H-Tyr-OMe-t 10 feloldunk 500 ml dimetilformamidban, szobahőmérsékleten éjjelen át állni hagyjuk, étert adunk hozzá, a csapadékot szűrőn elválasztjuk, és éterrel mossuk. A szűrőmaradékot dimetilformamidban oldjuk, vízzel kiválasztjuk, szűrőn elválasztjuk, vízzel mossulk, és megszárítjuk. A címben megnevezett vegyületet kapjuk. Olvadáspontja 20 199°; [a] = +6° (c=l, dimetilformamidban). b) H-Asp(NH2)-Tyr-OMe . HCl 31 g Z-Asp(NH2 )-Tyr-OMe-t 500 ml dioxán és 85 ml n sósav elegyében oldunk, 25°-on pallá„g diumkatalizátor jelenlétében hidrogénezzük, leszűrjük, a szüredéket bepároljuk, a maradékot dietiléterrel mossuk, és megszárítjuk. A címben 20 megnevezett vegyületet kapjuk; [a]j} = +29° 30 (c=l, dimetilformamidban). c) Z-Asp(NH2 )-Asp(NH 2 )-Tyr-OMe 34,6 g H-Asp(NH2 )-Tyr-OMe . HCl-ot és 57 g 35 Z-Asp(NH2 )-OCP-t 500 ml dimetilformamidban oldunk, hozzáadunk 6 ml jégecetet, majd utána 14 ml trietilamint. A reakciókeveréket 2 napig 25°-on állni hagyjuk, majd dietilétert adunk hozzá. A kivált csapadékot dimetilformamidban old-40 juk, vízzel ismét kiválasztjuk, leszűrjük, és vízzel mossuk. A cím szerinti vegyületet kapjuk. Olva-20 dáspontja 220°; [«]D =—4° {c—1, dimetilformamidban). d) H-Asp(NH2 )-Asp(NH 2 )-Tyr-OMe. CH3COOH 42 g Z-Asp(NH2 )-Asp(NiH 2 )-Tyr-OMe-t 750 ml dimetilformamidban oldunk, és hozzáadunk 80 ml n ecetsavat. A reakciókeveréket 25°-on palládiumkatalizátor jelenlétében hidrogénezzük, leszűrjük, és a szüredéket bepároljuk. A maradékot forró vízben oldjuk, és liofilizáljuk. A __ címben megnevezett vegyületet kapjuk. Olva-20 dáspontja 168°; [a] y. =—6° (c=l, dimetilformamidban). 60 e) Z-Leu-Asp(NH2 )-Asp(NH 2 )-Tyr-OMe 40 g Z-Leu-OCP-t és 33 g H-Asp(NH2 )-Asp(NH2 )-Tyr-OMe . CH 3 COOH-t 500 ml dimetilformamidban oldunk, 2 napig 25°-on állni 65 hagyjuk, majd dietiléterrel leválasztjuk. A csa-
