163090. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cisztintartalmú peptidek és származékaik előállítására ciszteintartalmú aminosav-szekvenciákból

163090 9 1. H-Cys<Acm)-,OMe.HCl 10 5. példa: 100 ml.metanolhoz.—10° hőmérsékleten, keverés közben 7,9 ml tionilkloridot csepegtetünk, ügyelve, hogy eközben a hőmérséklet ne emelkedjék —5° fölé. A hozzáadás befejezése után —5° hőmérsékleten „22,8 g H-Cys(Acm)-OH-ot adunk száraz állapotban* az elegyhez, amelyet 30 percig még —5°-on, majd 4 óra hosszat 45°on tartunk, azután bepároljuk rotációs bepárlóban. A bepárlási maradékot 0,01 mm Hg-oszlop nyomáson, vízmentes káliumihidroxid felett súlyállandóságig szárítjuk. Az így kapott termék szilikagélen, metanolban felvett vékonyréteg-kromatogramján R/ = 0,55. 2. BOC-Cy&(Acm)-Cya(iAcm)-OMe 29,2 g BOCJCys(Acm)-QH, 26,2 g H-Cys(Acm)-OMe-HCl és 13,9 ml trietilamin elegyét 200 ml acetonitrilben 0° hőmérsékletre hűtjük és 22,6 g dieiklohexil-karbodiimidet adunk hozzá. Az elegyet 15 óra hosszat 0° hőmérsékleten állni hagyjuk, leszűrjük, a szűrletet bepároljuk, a maradékot kloroformban oldjuk és a kloroformos oldatot 0,5 n citromsav-oldattal, azután 0,5 n nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, végül vízzel kirázzuk. Az elkülönített kloroformos oldatot bepároljuk és a maradékként kapott fehér színű szilárd terméket etilacetát és petroléter elegyéből kristályosítjuk; op. 81—82°. 4. példa: BOC-Cys-Gly-Glui(OtBu)2 I BOC-Cys-Gly-Glu{OtBu)2 1,18 g BGC-Cysi(Aom)-Gly-Glu(OtBu)2

15 ml 80%-os ecetsavval készített oldatához szárazon 760 mg jódot adunk. Az elegyet 1 óra hosszat keverjük, majd 20° hőmérsékleten nátriumtioszulfát oldattal elszíntelenítjük, a reakcióterméket víz hozzáadásával kicsapjuk és vízmentes káliumhidroxid felett megszárítjuk. Etilacetát és petroléter elegyéből történő átkristályosítás után 150—152°-on olvadó terméket kapunk. A fenti eljárás kiindülóanyagát az alábbi módon állítjuk elő: 1,17 g BOC-Cys(Acm)-OH és 1,26 g H-Gly-Glu(OtBu)2 elegyéhez 40 ml etilacetátban hozzáadunk 900 mg diciklohexil-karbodiimidet. Az elegyet 0°-on 2 óra hosszat, majd 20°" hőmérsékleten 15 óra hosszat állni hagyjuk, azután leszűrjük, a szűrletet híg citromsav-oldattal, híg nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, végül pedig vízzel kirázzuk, vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk és bepároljuk. A maradékot etilacetát és petroléter elegyéből történő kiesapás útján tisztítjuk. A kapott termék vékonyréteg-kromatogramja szilikagélen kloroform-metanol 8 :2 rendszerben 0,45 R/-értéket mutat. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-OMe I 5 BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-OMe 1,30 g BOC-Cysi(Bcm)-G\yMAsn-Leu-OMe 15 ml 1 :1 arányú kloroform-metanol eleggyel készített oldatához 500 mg jódot adunk. Az ele-10 gyet 20° hőmérsékleten 1 óra hosszat állni hagyjuk, majd 100 ml kloroformmal hígítjuk, a kloroformos oldatot híg vizes nátriumtioszulfátoldattal, majd vízzel mossuk, azután bepároljuk és a maradékként kapott terméket kloro-15 form és éter elegyéből történő kicsapással tisztítjuk. A, vékonyréteg-kromatogramon szilikagélen, n-hutanol-jégecet-víz (75 : 7,5 : 21) rendszerben a termék 0,55 R/-értéket mutat. 20 A fenti eljárás kiindülóanyagát az alábbi módon állítjuk elő: 25 40 55 1. H-Cys(Bcm)-OH-HCl 15 g benzamido-metanol és 12 g H-Cys-OH elegyéhez 100 ml vízben 12 ml tömény sósavat adunk és az elegyet 50° hőmérsékleten 15 óra hosszat keverjük. Ezután a reakcióelegyet 0°-ra 30 hűtjük, pH-értékét 5 n nátriumhidroxid-oldat hozzáadásával 4,0-ra állítjuk, majd 0,01 mm Hgoszlop nyomáson, 40° hőmérsékleten bepároljuk. A maradékként olajszerű alakban kapott terméket metanol és éter elegyéből történő ki-35 csapással tisztítjuk. A termék vékonyréteg-kromatogramja szilikagélen, metanolban 0,40 R/-értéket mutat. 2. BOC^Cys<Bcm)-OH 25,4 g H-Cys(Bcm)-OH-HCl 800 ml dimetilfcrmamiddal készített oldatához 41,6 ml trietilamint és 40 ml terc-foutiloxikarbonií-azidot adunk. Az elegyet 45° hőmérsékleten 20 óra 45 hosszat keverjük, majd 0,01 mm Hg-oszlop nyo~ máson, 40° hőmérsékleten bepároljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk, az oldatot híg vizes citromsav-oldattal, majd vízzel mossuk, betöményítjük és éter hozzáadásával kicsapjuk a ter-50 méket. A termék vékonyréteg-kromatogramja szilikagélen, kloroform-metanol (1 :1) rendszerben 0,60 R/-értéket mutat. 3. BOC-Cysi(Bom)-Gly-Asn-Leu-OMe 4,5 g H-Gly-Asn-Leu-OMe [vö. Helv. Chim. Acta 53, 556, <1970)] és 3,64 g BOC-jCys(Bcm)-60 -OH 100 ml dimetilformamiddal készített oldatához 0° hőmérsékleten 2,128 g diciklcíhexil-ikarbodiimidet adunk. Az elegyet 0°-on 2 óra hoszszat, majd 20°-on 15 óra hosszat állni hagyjuk, azután leszűrjük, a szűrletet 40° hőmérsékleten, 65 0,01 mm Hg-oszlop nyomáson bepároljuk és a $