163090. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cisztintartalmú peptidek és származékaik előállítására ciszteintartalmú aminosav-szekvenciákból
163090 11 12 maradékként kapott nyers terméket metanolból történő újbóli kicsapással tisztítjuk. A termék szilikagélen, kloroform-metanol (8 : 2) rendszerben 0,35 R/-értéket mutat. 6. példa: H-Leu-Val-Cys-Gly-Glu-OH, H2 0 I H-Leu-Val-Cys-Gly-Glu-OH 312 mg H-Leu-Val-Cys(Acm)Gly-Glu-OH 8 ml 60%-ös ecetsavval készített oldataihoz 20° hőmérsékleten, keverés közben 5 ml 0,1 n jégecetes jódoldatot adunk. 30 perc múlva az elegyet 0,01 mm Hg-oszlop nyomáson bepároljuk, a maradékot vízben oldjuk és egy gyengén bázisos ioncserélővel {Merk Nr. II, acetát-alakban) töltött oszlopon keresztül szűrjük. Az eluátumot liof ilizáljuk; ily módon vékonyréteg-kromatográfiailag tiszta állapotban, fehér por alakjában kapjuk a fenti terméket. A termék vékony réteg-kromatogr am ja cellulózon, n-butanol-piridin-jégecet-víz (34 : 24 :12 : : 30) rendszerben 0,65 R/-értéket mutat. A fenti eljárás kiindulóanyagát az «alábbi módon állítjuk elő: 1. H-Cys(Acm)-Gly-Glu(OtBu)2 1,5 g Trt-Cys(Acm)-Gly-Glu(OtBu)2 16 ml jégecettel készített oldatához 4 ml vizet adunk. Az elegyet 20° hőmérsékleten 1 óra hosszat állni hagyjuk, majd további 12 ml vizet adunk hozzá, leszűrjük és a szűrletet bepároljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk, az oldatot híg vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, majd vízzel mossuk és bepároljuk. A maradékként kapott termék vékanyréteg-fcromatogramja szilikagélen, toluol-aceton (1 :1) rendszerben 0,45 R/-értéket mutat. 2. BOC-Leu-Val-Cys(Acm)-Gly-Glu(OtBu)2 6,7 g BOC-Leu-Val-OH és 10,1 g H-Cys(Acm)-Gly-Glu(OtBu)2 250 m i dimetilformamiddal készített oldatahoz hozzáadunk száraz állapotban 4,6 g N-hidroxi-szukcinimidet és 6,2 g diciklohexil-karbodiimidet. Az elegyet 16 óra hosszat állni hagyjuk, majd leszűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk és a maradékot kloroform és petroléter «legyéből történő újbóli kicsapás útján tisztítjuk. Az így kapott termék vékonyréteg-kromatogramja szilikagélen, kloroform-metanol (95 :5) rendszerben 0,26 R/-értéket mutat. 3. H-Leu-Val-Cys(Acm)-Gly-Glu-OH, CH3 COOH SSO mg BOC-Leu-Val-Cys(Acm)-Gly-Glu(OtBu)2-ra 10 ml 0° hőmérsékletű trifluorecet• savat öntünk. 45 perces állás után éter hozzáadása útján kicsapjuk a fenti terméket, ezt elkülönítjük és vízmentes káliumhidroxid felett megszárítjuk. A terméket a benne maradt trifluorecetsav s eltávolítása céljából vízben oldjuk és egy gyengén bázisos ioncserélővel (Merk Nr. II. acetátalakban) töltött oszlopon keresztül szűrjük az oldatot. Az eluátum bepárlása útján tiszta állapotban kapjuk a fenti terméket. 10 Cellulóz alkalmazásával végzett vékonyréteg kromatogrammal a következő R/ eredményeket kapjuk: 15 n-butanol-piridin-jégecet-víz rendszer <34 :24 : 12 : 30) R/ = 0,30; n-hutanol-piridin-hangyasav-víz rendszer (38 : 24 :8 : 3Q) R/ = 0,45; n-butanol-piridin-hangyasav-víz rendszer 20 (34 :24 : 12 : 30) R/ = 0,67. Elektroforézisnél a vegyület cellulózlemezekre vándorol 6 Volt/cm-nél 1,9 pH-nál: 3,3 cm katódhoz, 4,75 pH-nál: 2,5 cm anódhoz. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás cisztintartalmú peptidek és szár-30 mazékaik előállítására, a merkaptocsoportokon —CH2 —NH— CO—R általános képletű védőcsoporttal — ahol R rövidszénláncú alkil-, vagy fenilcsoportot képvisel — védett ciszteintartalmú aminosav-szekvenciákból, azzal jellemezve, 35 hogy az összekapcsolandó ciszteincsoportokat tartalmazó aminosav-szekvenciát, illetve aminosav-szekvenciákat jóddal kezeljük, olyan oldószerben vagy oldószerelegyben, amelyben a jód és az aminosav-szekvenciák oldhatók. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a reakciót 0 C° és 60 C° közötti hőmérsékleten végezzük. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganato-45 sítási módja, azzá) jellemezve, hogy a reakciót szobahőmérsékleten végezzük. 4. Az 1—,3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a reakciót valamely alkoholos oldószerben 50 végezzük. 5. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a reakciót valamely rövidszénláncú alkanolban végezzük. 55 6. Az 1—3. igényponioik bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a reakciót metanolban végezzük. 7, Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti 60 eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a reakciót ecetsavban végezzük. 8. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a reakciót valamely rövidszénláncú alka-65 nol és egy szerves oldószer elegyében végezzük.
