163090. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cisztintartalmú peptidek és származékaik előállítására ciszteintartalmú aminosav-szekvenciákból
7 mossuk, vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk és bepároljiuk. Kloroform és petroléter elegyébol történő átkristályosítás után a kapott Trt-Cys(Acm)-OH 143—,145°-on olvad. 5 J. Trt-Cys(Acm)-Gly-Glu(OtBu)2 870 mg Trt-Cys(Acm)-OH és 630 mg H-Gly-Glu(OtBu)2 elegyéhez 20 ml etilacetátban, 0° hőmérsékleten 454 mg diciklohexil^kar'bodiimi- 10 det adunk és az elegyet 0° hőmérsékleten 48 óra hosszat reagálni hagyjuk. Ezután a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük és az etilacetátos oldatot n citromsav-oldattal, majd n nátriumkarbonat-oldattal, végül vízzel mossuk. 15 Az oldatot bepároljuk és a maradékot etilacetát és petroléter elegyébol történő kicsapássel tisztítjuk. Ily módon vékonyréteg-kromatográfiásán tiszta állapotban kapjuk a kívánt terméket. R/ = 0,42 kloroform-metanol (9 :1) rendszerben. 20 3. BOC-Leu-Val-OMe 21,9 g BOC-Leu-OH és 13,2 ml trietilamin 25 elegyéhez 300 ml acetonitriiben, —10° hőmérsékleten 12,6 ml izobutil-klórkarbonátot adunk. 15 perc múlva 15,9 g sósav, H-Val-OCH3 és 13,2 ml trietilamin 160 ml acetonitrillel készített oldatát adjuk hozzá oly módon, hogy eközben 30 a hőmérséklet ne emelkedjék —10° fölé. Az elegyet —10° hőmérsékleten 1 óra hosszat, majd 20°-on 15 óra hosszat reagálni hagyjuk, azután leszűrjük, a szűrletet bepároljuk, a maradékot etilacetátban oldjuk, az etilacetátos oldatot n 35 citromsav-oldattal, majd n nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, végül pedig vízzel mossuk és bepároljuk. Petroléternek a részlegesen bepárolt oldathoz való hozzáadására kiválik a fenti termék kristályos alakban; op. 143—144°. 40 [a]20 D = —44°, (e = 2,4, metanolban). 4. BOC-Leu-Val-OH 45 13,8 g BOC-Leu-Val-OCH3 260 ml 3 :1 arányú dioxán-víz eleggyel készített oldatához 24 ml 2 n nátriumhidroxid-oldatot adunk és az elegyet 20° hőmérsékleten 1 óra hosszat állni hagyjuk. Ezután bepároljuk kb »100 ml térfogatra, 50 400 ml etilacetátot adunk hozzá és az oldat pH-értékét 0° hőmérsékleten, 2 n sósavoldat hozzáadásával 2,5-re állítjuk. Az etilacetátos oldatot elkülönítjük, vízzel mossuk és bepároljuk. A maradékot benzol és hexán elegyébol 55 átkristályosítjuk; 109—>lll0 -on olvadó kristályokat kapunk; [a]20 o = —32°, (c=2,0, metanolban). 5. Z-Gly-Glu(OtBu)2 60 23,2 g (0,11 mól) Z-Gly-OH és 15,54 ml (0,11 mól) trietilamin 200 ml tetrahidroíuránnal készített oldatához —10° hőmérsékleten 14,97 ml (0,11 mól) izobutil-klórkarbonátot adunk és az 65 8 elegyet —10° hőmérsékleten 10 percig állni hagyjuk. 28,52 g (96,5 millimól) H-Glu(OtBu)2 • HCl és 13,5 ml (96,5 millimól) trietilamin-hidrokloridot 300 ml tetrahidrofuránban oldunk, a kivált trietilamin-hidrokloridot kiszűrjük, a szűrletet lehűtjük —10° hőmérsékletre, és hozzácsepegtetjük az előző bekezdés szerint kapott, ugyancsak —10° hőmérsékletű oldathoz. Az elegyet —Í10° hőmérsékleten még 1 óra hosszat, majd szobahőmérsékleten 2 óra hosszat keverjük, azután a kivált trietilamin-ihidrokloridot kiszűrjük és a szűrletet bepároljuk szárazra. A maradékként kapott olajat etilacetátban .oldjuk és az etilacetátos oldatot vizes n citromsavoldattal, vizes n nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, végül pedig vízzel mossuk. Az elkülönített etilacetátos oldatból az oldószert elpárologtatjuk és a maradékként kapott peptidszármazékot etilacetát és n-hexán elegyébol átkristályosítjuk. 74—76°-on olvadó terméket kapunk; [Ű]23D = —17°', (c = = 2,2, metanolban). Vékonyréteg-kromatogramon szilikagélen, toluol-aceton 7 :3 rendszerben R/ = 0,5Q. 6. H-Gly-Glui(OtBu)2 2,7 g (6 millimól) Z-Gly-Glu(OtBu)2 30 ml etilacetáttal készített oldatát 250 mg 10%-os palládiumos aktívszén katalizátor hozzáadásával hidrogénezzük. A hidrogénfelvétel 4 óra alatt befejeződik. Ekkor a katalizátort kiszűrjük és a szűrletet bepároljuk. A terméket olajszerű maradék alakjában kapjuk, amely vékonyréteg-kromatográfiailag egységes. Szilikagélen, 7 :3 toluol-aceton rendszeriben R/ = 0,27; 9 : 1 kloroform-metanol rendszerben R/ = 0,37; terc-^amilalkohol-izopropanol-víz (67 : 26 : 7) rend^ szerben R/ = 0,50. 3. példa: . BOC-Cys-Cys-OMe előállítása 14,7 g jód 500 ml metanollal készített oldatához 20° hőmérsékleten, keverés közben, 45 perc alatt hozzácsepegtetjük 9,28 g BOC-Cys(Acm)-Cy9(Acm)-OMe 500 ml metanollal készített oldatát. Az elegyet szobahőmérsékleten 1 óra hosszat állni hagyjuk, majd lehűtjük 0° hőmérsékletre és n nátriumtioszulfát-oldattal elszíntelenítjük a reakcióelegyet. Az elegyet azután rotációs bepárlóban kb. 100 ml térfogatra bepároljuk és víz hozzáadásával kicsapjuk a terméket. Ezt elkülönítjük, vízmentes káliumhidroxid felett szárítjuk, majd kloroform és petroléter elegyébol átkristályosítjuk. Az így kapott termék 180—185°-on bomlás közben olvad. A fenti eljárás kiindulóanyagát a túloldali módon állítjuk elő: 4
