163090. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cisztintartalmú peptidek és származékaik előállítására ciszteintartalmú aminosav-szekvenciákból

3 képezett elegyét, vagy pedig ecetsavat, például jégecetet vagy vizes ecetsavat alkalmazunk oldószerként. A reakciót célszerűen jód feleslegének jelenlétében folytatjuk le, például oly módon, hogy híg oldatokkal dolgozunk és a peptid oldatát adjuk a jódoldathoz. Ennek során kizárólag a kívánt monomert kapjuk reakciótermékként. Ha viszont fordított módon járunk el, például a jódoldatot csepegtetjük a peptid oldatába, akkor jelentős mennyiségű pol

5mér képződik. A reakciótermékként kapott oldatból a jód feleslegét például tioszulfáttal távolíthatjuk el. Ha a találmány szerinti eljárást oly cisztin-peptidek előállítására kívánjuk alkalmazni, amelyek további szintézisek lehetővé tétéle érdekében az aminocsoporton savval könnyen lehasítható védőcsoportot, péidaul tritilcsoportot vagy 2-(p-bifemlil)-2-propiloxikarbonil-'csoportot (vö. 1 554 051 számú francia szabadalmi leírás) vagy valamely ezekkel egyenértékű csoportot hordoznak, akkor előnyösen savlekötőszer vagy puffer jelenlétében folytatjuk le a találmány szerinti eljárást. Savlekötőszerként például — különösen ha a reakciót vizes oldatban folytatjuk le — gyenge alkáliák, mint nátriumkarbonát vagy nátriumhidrogénkarbonát, vagy pedig — különösen ha szerves oldószeres oldatban dolgozunk — szerves nitrogéntartalmú bázisok, mint primer, szekunder vagy tercier aminők, például megfelelő rövidszénláncú alkilaminok, cikloalkilaminok, aromás, aralifás vagy heterociklusos aminők, mint szek-butilamin, morfolin, tiomorfolin, pirrolidin, piperidin, anilin, toluidin, benzilamin, trietilamin, kinolin vagy előnyösen piridin alkalmazhatók. Pufferként 4,5 és 9, előnyösen 5 és 8 közötti pH-tartományú pufferék, mint gyenge savak alkálifémsói, például acetát-, citrát- vagy foszfát-pufferek jönnek tekintetbe. A eisztintartalmú peptidek savval lehasítható védőcsoportok alkalmazásával lefolytatásra kerülő szintézise során például az et-aminocsoportot tritil- vagy 2-(p-bifenilil)-2--propiloxikarbonil-csoporttal, az oldalláncbeli aminocsoportokat terc-butiloxikarbonil-csoporttal, továbbá a hidroxilcsoportokat például terc-butiléter-csoporttal, a karboxilcsoportokat pedig terc-butilésztercsoporttal védhetjük. A cisztinné történő oxidációs alkalmával az N-a-tritilvagy 2-(p-bifenilil)-2-propiloxikarbonil-csopoi -tok a reakció során változatlanok maradnak. Ezeket a csoportokat azután a többi védőcsoporttal szemben szelektív módon 'hasíthatjuk le Sav, például 80%-os ecetsav segítségével, és az így kapott védett, de az a-aminocsoporton szabad peptidet közvetlenül felhasználhatjuk a további kondenzációhoz. A találmány szerinti eljárásban kiindulóanyagként oly peptideket alkalmazunk, amelyekben a szabad aminocsoportok szabadon maradnak vagy védőcsoportot is hordozhatnak. Kívánt esetben a szabad hidroxil- és karboxilcsoportok is lehetnek védett alakban, Amino-védő-4 csoportként például a következők jöhetnek tekintetbe: trifluoracetil-, ftaloil-, p-toluolszulfonil- vagy elsősorban a szénsavból levezethető csoportok, mint az aromás részben adott eset-5 ben halogénatomokkal, rövidszénláncú alkil-, alkoxi- vagy karbalkoxi-csoportokkal helyettesített karbobenzoxi-, toliloxikarbonil-, 2-fenil-izopropiloxikarbonil-, 2-tolil-izopropiloxikarbonil- és elsősorban 2-p-difenil-izopropiloxikarbo-10 nil-csoportok (a fent megadott körülmények között), továbbá alifás oxikarbonil- mint ciklopentiloxikarbonil-, terc-amiloxikarbonil-, adamantiloxikarbonil- és elsősoriban terc-butiloxikarbonü-csoportok. 15 A karboxilcsoportok kívánt esetben például amidálás vagy észterezés útján lehetnek védve. Észterként például a metanollal, etanollal, benzilalko'hollal, p-metoxi-benzilalkohollal, 2,4,5-tri-20 klórfenollal, N-hidroxi-szukcinimiddel, N-hidroxi-ftálimiddel vagy elsősorban terc-butanollal képezett észterek jönnek tekintetbe. A hidroxilcsoportok, például a szerin- vagy tirozin-csoportokban, például éterezéssel, például benzilalko-25 hollal vagy előnyösen terc-butanollal való éterezéssel lehetnek védve. Az arginin-csoportokban a guanidinocsoport például tozilcsoporttal lehet védve. A találmány szerinti eljárás kapott, védőcsoportokat tartalmazó diszulfid-peptidek 30 közvetlenül felhasználhatók hosszabb aminosavláncú peptidek további szintézisére, vagy pedig kívánt esetben a védőcsoportokat ismert módon, például hidrolízis és/vagy redukció útján lehasíthatjuk. 35 A találmány szerinti eljárás kiindulóanyagaiként felhasználható ciszteintartalmú peptidek és származékaik vagy már ismert vegyületek, vagy ismert módszerekkel előállítható. Származékokon különösen oly peptideket értünk, amelyek-40 ben a funkcionális csoportok, például az aminőcsoportok, karboxilcsoportok és/vagy hidroxilcsoportok az említett vagy egyéb, a peptidszintézisben ismeretes védőcsoportokat hordozzák, továbbá oly vegyületeket, amelyek az 45 egyik vagy mindkét kapcsolandó ciszteincsoport helyett dezaminocisztein-csoportot tartalmaznak. A találmány szerinti eljárás tetszőleges eisztintartalmú peptidek vagy peptid-szekvenciá'k 50 szintézisében alkalmazható, például oly peptidek előállítására, amelyekben a cisztin diszulfidhídja egyenesláncú, aminosav-szekvenciákat köt össze egymással, amint ez például az oxidált glutation esetében fennáll, vagy elsősorban oly 55 peptidek előállítására, amelyekben a diszulfidhíd gyűrűt képez, mint például az Oxitocin, a vazopresszinek, a vazotocin, izotocin, kalcitoninok és e peptidek szintetikus analógjai esetében. Ha a szintetizálandó peptid egynél több 60 diszulfid-hidat tartalmaz, akár egyenes aminosavláncok között, akár gyűrűt képezve, mint például az inzulin, proinzulin, növekedési hormonok, prolaktinok, apamin vagy melittin esetében, akkor a találmány szerinti eljárással cél-65 szerűen először olyan aminosav-szekvenciákat 1