162834. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antibiotikum kinyerésére és tisztítására

3 162834 4 sói tiszta formában állíthatók elő az antibiotikumot szennyezett formában tartalmazó nyers fermentlé vagy a részben tisztított anyag kaiio.vvagy anioncserélő gyantán végzett adszorbciójával és a tiszta anyag erre alkalmas eluálószerrel végzett eluálásávsal. Anioncserélő gyanta alkalmazása esetén előnyös erősen bázikus anioncserélő gyantát használni, bár az eljárás gyengén bázikus gyantával is elvégezhető. Kationcserélő gyanta alkalmazása esetén erősen savas gyanta használata előnyös. A klorid-ciklusban alkalmazott bázikus anioncserélő gyanta általában kvaterner ammónium-ioncserélő csoportot tartalmazó, térhálós stirol-divinilbenzol polimer, melyre példa a poldstirol-trimetilammónium gyanta: a Dowex 1X2. Az eljáráshoz polialkilamin csoportot tartalmazó térhálós stirol-divinilbenzol gyanta és térhálós akrilgvanta ií alkalmazható. A hidrogén-ciklusban általában savas • katiomcserélő gyanta, a szulfonált típusú stirol-divinilbenzol alapú gyanta alkalmazható, melyre példa a polistirol-gyűrűben szulfonált gyanta: a Dowex 50X2. Az I. képletű tisztított antibiotikum vagy sójának előnyös kinyerési módja a következő: az antibiotikum oldatát, pl. a kb. 7 pH-ra beállított fermentlevet, klorid-ciklusban, kvateraer ammónium-típusú anioncserélő gyantával töltőt oszlopon folyatjuk át. A fermentlé kénhatását általában 7 pH-ra állítjuk be, de a fermentlé közvetlenül pH-beállítás nélkül is felhasználható, mivel az oszlopon való áteresztéshez a pH-beállítás nem jelentős tényező. A gyantán adszorbeált anyagot ezután vizes, vagy vizes-alkoholos sóoldattal, pl. 90%-os metanolban 3°/o ammóniumkloridot tartalmazó oldattal, vagy 5% nátriumkloridot tartalmazó vizes oldattal eluáljuk. Az eluátumot frakciókba gyűjtjük, mely frakciók mennyisége az alkalmazott ioncserélő oszlop nagyságától függ. Az eluátumok biológiai aktivitását Vibrio percolans mikroorganizmus alkalmazásával határozzuk meg. A legtöbb aktív anyagot tartalmazó frakciókat, a szerves oldószer eltávolítása céljából, általában vákuumban bepároljuk, majd a tömény oldatot vízzel hígítjuk. Ez — az anioncserélő gyantát alkalmazó tisztítási eljárás — természetesen nem korlátozódik csupán a fermentlé feldolgozására, hanem az I. képletű vegyület szennyezett oldatának tisztítására is felhasználható. Az anioncserélő gyanta alkalmazásán túlmenően az I. képletű vegyület vagy sójának vizes oldata, beleértve a fermentlevet is, hidrogén-ciklusban, erősen savas szulfonsav-típusú kationcserélő gyantával is tisztítható. A gyantán való áteresztéshez az antibiotikum oldatát savas pH-ra, 1,5—7 pH-ra állítjuk be. A gyantán adszorbeált antibiotikumot ezután bázissal eluáljuk. Az eluálásra kiválasztott bázis fajtája nem jelentős, bár szerves bázis, mint a piridin, pikolin, lutidin vagy trialkilamin, valamint szervetlen bázis, mint az ammóniumhidroxid. előnyösen alkalmazható. Anioncserélő gyanta alkalmazása esetén az eluátumot frakciókba gyűjtjük és a frakciók biológiai aktivitását Vibrio percolans mikroorganizmussal vizsgáljuk, s A találmány szerinti eljáráshoz eluálószerként savak, bázisok és sók egyaránt felhasználhatók, melyekre példa: a szervetlen sók, mint a nátriumklorid, káliumklorid vagy ammóniumklorid és hasonlók vizes, vagy vizes-alkoholos oldata; 10 szervetlen hidroxidok, pl. ammóniumhidroxid, nátriumhidroxid és hasonlók vizes oldata; szerves amin-vegyületek, pl. trialkilaminok, mint a trimetilamin vagy trietilamin és hasonlók, vagy nitrogéntartalmú heterociklikus vegyületek, '5 mint a piridin vagy pikolin és hasonlók; ásványi savak, mint a sósav, kénsav, foszforsav. Gyakorlatban — az erősen bázikus anioncserélő gyanta-adszorbens alkalmazása esetén — a tisztított anyag eluálására sokkal célszerűbb 0 szervetlen só, előnyösen klorid-iont szolgáltató só vizes oldatát vagy vizes-alkoholos oldatát használni. Ilyen eluálószer például az ammóniumklorid vagy a nátriumklorid oldata. Kationcserélő gyanta-adszorbens alkalmazása 25 esetén, mint amilyen pl. a gyűrűben szulfonált polistirol gyanta, a Dowex 50X2, eluálószerként előnyösen használható valamely szervetlen hidroxid oldata, mint az ammóniumhidroxid, vagy a nátriumhidroxid oldata, vagy 30 valamely szerves amin-vegyület oldata, mint a kis szénatomszámú trialkilamin vagy valamely heterociklus amin oldata. A 7-(D-5-amino-5-karboxivaleramido)-3-(kar-35 bamoiloximetil)-7-nietoxi-cef-3-ém-4-karbonsav a nyers vagy részben tisztított vizes oldat gélszűrésével, pl. poliakrilamid gyantán vagy dextrán-gélen való áteresztéssel is tisztítható. A gél általában 50—100 mesh szemcseméretű, mely 40 francionálásra, sómentesítésre és a 200—2000 molekulasúlyú anyagok betöményítésére alkalmas, bár az eljáráshoz 50—400 mesh szemcseméretű gél is használható. A gél szemcsemérete nem korlátozó tényező, de az alkalmazott szem-45 cseméret függ az oszlop méretétől. Az eljáráshoz például felhasználható az epiklórhidrinnel térhálósított gömbszemcsés dextrán-gél, mint amilyen a Sephadex G—10 (Pharmacia Company, Svédország), és a metilén-bisz-akrilamid-50 dal térhálósított- poliakrilamid-gyöngy, mint amilyen a Bio-Gel P—2 (Bio Rad Laboratories, Richmond, California). A tisztításra kerülő anti• biotikum oldatát előnyösen semleges pH-ra állítjuk be, majd az oldatot a gélen átfolyatjuk. 5 <j Az antibiotikumot ezután a gélről vízzel vagy más alkalmas eluáló szerrel eltávolítjuk, az eluátumot frakcióba gyűjtjük és a biológiai vizsgálattal meghatározott, legtöbb aktív anyagot tartalmazó részeket egyesítjük.. HO A találmány szerint a 7-(D-5-amino-5-karboxivaleramido)-3-(karbamoiloximetil)-7-metoxi-cef-3-ém-4-*karbonsav oldata aktív szénnel kezelve is tisztítható. Az antibiotikum az aktív <; szénnel adszorbeálódik, melyről vizes-poláros 2