162758. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-alfa-ciano- acilamino-cefalosporánsavszármazékok előállítására
Í62758 VT 18 dörzsöljük. Leszűrve nyerjük a 7-ciánacetilamino-3- (3-metil-l ,2,4-triazol-5-iltio) -metilcef-3-em -4-karbonsavat, enyhén színezett porként. Ezt metanolban szuszpendáljuk, 1,3 térfogatrész 3 n metanolos inátrium-cc-etil-hexanoátoldattal oldatba visszük, és egyenlő térfogat etanol hozzáadásával és kis térfogatra bepárlással szilárd nátriumsóvá — (3,94 g) — alakítjuk át. Az anyag enyhe színét metanolos oldatban aktívszén nel kezelve távolítjuk el. Tisztítás céljából a nátriumsót vizes oldatban pH 2,5-re savanyítjuk le, és etilacetáttal extraháljuk, így ismét a savat állítva elő, majd a fentiek szerint etilacetáttal eldörzsöljük és a már leírt módon ismét nátriumsóvá alakítjuk át. UV-spektrumban Xmax — 267 nm (s = 9900); (ct)20 D = —11°±1° (c = 1,0 vízben). Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során Rfs2A = 0,31, RfioiA — 0,45, Rfiü2A =0,57, Rf etilacetát-jégecet (9:1) rendszerben = 0,1. 10. példa 1,34 g 3-propioniloximetil-7-ciánacetilamino-cef-3-em-4-karbonsav 30 ml, pH 6,7 (10%-os) foszfátpufferes oldatában 0,53 g 1 metil-5-merkapto-tetrazolt szuszpendálunk. Ezután intenzív keverés mellett 2 n nátriumkarbónátoldat hozzáesepegtetésével a pH-t 6,6-re állítjuk és nitrogénatmoszférában 7 órán át 60°-on melegítjük. Ezután az elegyet lehűtjük és egymás után 200 és 150 ml etilacetáttal extraháljuk. A szerves fázisokat kétszer 5—5 ml pH 6,5 pufferrel visszamossuk, és elöntjük. Az egyesített vizes fázisokra 300 ml etilacetátot rétegezünk, és intenzív keverés közben 4 n sósavoldattal a pH-t 2,5-re állítjuk (fcb. 6 ml-el). Az ekkor keletkezett barna csapadékot szűréssel eltávolítjuk. A fázisokat elválasztjuk, a vizes oldatot konyhasóval telítjük és kétszer 150—150 ml etilacetáttal extraháljuk. A szerves fázisokat kétszer 10—10 ml konyhasóoldattal kirázzuk, nátriumszulfát felett szárítjuk, és vákuumban kb. 20 ml-re pároljuk be. A oldathoz kis részletekben intenzív keverés közben 20 ml hexánt adunk, és az elegyet több órán át hidegben állni hagyjuk. Az elegyet leszívatjuk és a maradékot etilacetát-'hexán (1:1) eleggyel mossuk. A szürletet elöntjük. A maradékot acetonos oldatból 5 g semleges szilikagélen megkötjük, majd a száraz adszorbeátumot 50 g semleges szilikagéllel töltött oszlopra visszüli és kloroform-aceton (2:1) rendszerrel eluáljuk. Az első 160 ml eluátumot eldobjuk, a következő 200 tartalmazza a reakcióterméket. Ezt vákuumban szárazra pároljuk, a maradékot 30 térfogatrész aeetonban oldjuk, 5 térfogatrész metanolt adunk hozzá, majd 1,3 térfogatrész 3 m metanolos nátrium-cc-etil-hexanoátoldat hozzáadásával kristályos 7-ciánacetil-amino-3-(l-metil-tetrazol-5--iltio)-metilcef-3-em-4-karbonsawá — (0,54 g) — alakítjuk át, UV-spektrumban Xmax = 268 nm (s= 11 150); (a)20 D =+22°±1° (c = 0,99 vízben). Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során Rfs2A = 0,28, RfioiA — 0,54, Rfi02A = 0,76, etilacetát-jégecet (9:1) rendszerben Rf = 0,19. 5 A kiindulási anyagot a következőképpen állíthatjuk elő: 20,0 g (36,7 mmól) N,N-ftaloil-cefalosporin C (72%-os) tiszta vegyületet 400 ml desztillált vízben felszuszpendálunk, és 71 ml 1 n nátrium-10 hidroxidoldattal oldatba viszünk. Az oldatot 400 mg Bacillus subtilis ATCC 6633 acilészterázzal 20 órán át 37°-on állandó, 7,3 pH értéket tartva keverjük. Az enzimes elszappanosítás során keletkezett ecetsavat 32 ml 1 n nátronlúggal semle-15 geisítjük. Az elszappanosítási reakció befejeztével etilaoetátot és 0°-ra hűtés és kevevés közben 20%-os foszforsavat adunk hozzá, míg a pH-érték 2,3 lesz. A vizes fázist nátriumkloriddal telítjük és még háromszor 300 ml etilacetáttal 20 utánaextraháljuk. Az extraktumot telített konyhasóoldattal mossuk, nátriumszulfáttal szárítjuk és bepároljuk. Az N,N-ftaloil-cefalosporin C dezacetilezett nyers származékát 320 ml dioxánban és 80 ml metanolban oldjuk, részletekben 25 18 g difenildiazometánt adunk hozzá és 3 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Az oldatot szárazra pároljuk, és kétszer 400 ml éterrel digeráljuk. A maradékot benzolban oldjuk, és 200 g savval mosott szilikagélen (oszlopátmérő 4,15 cm) 30 kromatografáljuk, 100 ml-es frakciókat szedünk. Három-három benzolos, benzol-etilacetát (9:1) és benzol-etilacetát (5:5) elegyes frakciót eldobunk, míg az utolsó négy benzol-etilacetát (5:5) elegyes frakció tartalmazza a 7-(5'-ftálimido-5'-35 -karboxibenzhidril-valeroil)-ammo-oef-3~em-3-hidroximetil-4-karbonsav-benzhidrilésztert, melyet etilacetát-ciklohexán elegyből kristályosítunk át. O.p. 113—115°. (apo =+5°±1° (c = = 1,131 kloroformban), UV-abszorpciós spekt-40 rum (fiinomszeszben): Xma x — 260 m/j, (s = 9100), hnji = 241 m/u, (e = 14 300). Az anyag szilikagéles vékonyrétegen toluol-aceton (4:1) rendszerben futtatva 0,11 Rf-értékét ad. Előhívás káliumjodidos jódoldattal. 45 Jéghűtés közben 3,46 ml (40 mmól) propionsavklorid és 2,90 ml (36 mmól) piridin 30 ml dimetilformamidos elegyéhez 3,34 g (4 mmol) 7-(5'-ftálimido-S'-'karboxibenzhidril-valeroil)-50 -amino-cef-3-em-3-hidroximetil-4-karbonsavbenzhidrilészter 7 ml dimetilformamidos oldatát csepegtetjük. Az elegyet 3 órán át szobahőmérsékleten reagáltatjuk. A reakcióterméket 800 ml 10%-os monokáliumfoszfátoldat és 1000 55 ml etilacetát között megosztjuk, és még kétszer 500—500 ml etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos extraktumot telített konyhasóoldattal mossuk, nátriumszulfát felett szárítjuk, és be^pároljuk. A 7-(5'-ftálimido-5'-karboxibenzhidril-60 -valeroil)-amino-cef-3-em-3-proipioniloxime:til-4-Jkarbonsav-—benzhidrilészter-aceton-etilacetát elegyből színtelen alakban kristályosodik ki. O. p. 163—165°; (a) 20 D = +16° (c = 1,119 kloroformban; UV-abszorpciós spektrum (finomszesz-65 ben): 9
