162758. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-alfa-ciano- acilamino-cefalosporánsavszármazékok előállítására
162758 19 20 Amax = 260 mß (e = 9100), Xinji = 241 nyt (e = — 14 300). Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során toluol-aceton (9:1) rendszerben Rf = 0,19. 2,03 g (2,28 mmól) 7-(5'-ftálimido-5'-karboxi-benzihidril-valeroil)-amino-cef-3-em-3-propioniloximetil-4-karbonsavbenz-hidrilésztert 20 ml metilénkloridban oldunk, —10°-ra hűtjük, és 1,75 ml (21,7 mmól) abszolút piridint adunk hozzá. Ezután keverés közben 12 perc alatt 11,4 ml (5,5 mmól) frissen előállított 10%-os abszolút metilénkloridos faszforpentakloridoldatot adunk hozzá. 40 percig —10°-on keverjük, majd az oldathoz 3 perc alatt 7,62 ml (188 mmól) —20°-ra hűtött abszolút metilénkloridot adunk. A reakcióelegyet további 30 percig —10°-on és 60 percig +20°-on keverjük. Erős keverés közben 19 ml (19 mmól) 1 m sósavoldatot adunk hozzá, és 45 percig 20°-on reagáltatjuk. A reakcióelegy pH-ját 3,8 ml 50%-os vizes trikáliumfoszfátoldattal és 18,3 ml 2 n nátriumhidroxid oldattal pH 8 értékre lúgosítjuk. A fázisokat szétválasztjuk, a nátriumszulfát felett szárított metilénkloridos extraktumot bepároljuk és 2 órán át magas vákuumban szárítjuk. A maradékot 50 ml toluoletilacetát (3:1) elegyben oldjuk és háromszor 20—20 ml etanol-2 n sósavoldat (1:1) eleggyel extraháljuk. Az egyesített alsó fázisokat 30 ml 2 n nátriumkarbonátoldattal pH 7,0 értékre állítjuk be, az alkoholt lepároljuk és a vizes oldatot etilacetáttal visszaextraháljuk. A szárított és bepárolt etilacetátos extraktumot azonnal 1,14 ml (10,5 mmól) anizolban oldjuk, —30°-ra lehűtjük, és 3,32 ml (43,5 mmól) trifluorecetsavat adunk hozzá. A savval 30 percig +20°-on reagáltatjuk, majd toluolt hozzáadva jól ledesztilláljuk. A maradékhoz 40 ml —30°-ra hűtött metanolt adunk és 0,4 ml trietilaminnal 3,5 pH-értékre állítjuk. A spontán keletkezett csapadékot lecentrifugáljuk és kétszer 5—5 ml metanollal, metilénkloriddal és éterrel mossuk, majd nagyvákuumban szárítjuk. A 3-propioniloximetil-7-amino-cef-3--em-4-karbonsav amorf por. (a)20 D = +110° +1° (c = 1,000 0,5 N nátriumhidrogénkarbonátoldatban) ; UV-abszorpciós spektrumban (0,5 N nátriumhidrogénkarbonátoldatban) Imax = 262 mpi (s = 8200). Szilikagélen futtatva n-butanol-piridin- jégecet-víz (30:20:6:24) rendszerben az anyag 0,58 Rf-értéket mutat (a 7Hamino-cefa;losporánsavé 0,55). 25 ml-es, mágneses keverővel ellátott szulf urálólombikban 374 mg ciánecetsav 2,5 ml tetrahidrofurános oldatához nitrogénatmoszférában —50 és —70° közötti hőmérsékleten 0,596 ml trietilamint és 0,476 ml triklóracetilkloridot adunk. Az elegyet 15 percig —50 és —70° közötti hőmérsékleten reagáltatjuk. Ezután 573 mg (2 mmól) 7-amino-cef-3-em-3-propioniloximetil-4~karbon sav és 1 ml trietilamin 6,5 ml metilénkloridos, —70°-ra hűtött oldatát adjuk hozzá, és a reakcióelegyet 45 percig nitrogénatmoszférában —50 és—70° közötti hőmérsékleten keverjük. Ezután 10 ml 10%-os vizes káliumdihidrogénfoszfátoldatot keverünk hozzá, melynek hatására a pH 5,0-re áll be. Az alsó szerves fázist elválasztjuk, és a vizes fázist 5 ml metilénkloriddal és 10 ml etilacetáttal utánamossuk. A vizes fázisra 20 ml etilacetátot rétegezünk, 2 n sósavoldattal pH 2,0 5 értékre savanyítjuk és — konyhasós telítés és a fázisok elválasztása után — még kétszer 10—10 , ml etilacetáttal utánaextraháljuk. A három etilacetátos oldatot 10 ml telített konyhasóoldattal mossuk, nátriumszulfát felett szárítjuk és 5 g 10 szilikagéllel töltött, 16 mm átmérőjű és 10 cm magas oszlopon szűrjük. Az oszlopot 20 ml etilacetáttal mossuk és az egyesített szürleteket 2,3—3,0 g-ra pároljuk be. A tömény oldatból 50 ml éter-petrolétér (1:1) eleggyel kicsapjuk a 3-15 -propioniloximetil-7-ciánacetilamino-cef-3-em-4-karbonsavat, melyet azután tetrahidrofurán-etilacetát elegyből átkristályosítunk. O. p. 146—150°. Szilikagélen végzett vékonyrétagkromatográ-20 fiás vizsgálat során n-butanol-jégecet-víz (67: 10:23) rendszerben az Rf-érték 0,35 (a 7-ciánacetil-aminocefalosporánsavé 0,26). 25 11. példa - 8,84 g 7-(a-fenil-a-ciánacetilamino)-cefalosporánsav 190 ml pH 6,7 (10%-os) foszfátpuff eres oldatában 3,23 g l-metil-5-merkapto-tetrazolt szuszpendálunk. Ezután intenzív keverés közben 30 80 ml 10%-os KH2 P0 4 oldat hozzáadásával a pH értékét 6,5-re állítjuk és nitrogénatmoszférában 7 órán át 60°-on melegítjük. Ezután az elegyet lehűtjük, és egymás után 1 liter és 0,5 liter etilacetáttal extraháljuk. A szerves fázisokat két-35 szer 20—20 ml pH 6,5 pufferrel visszamossuk és elöntjük. Az egyesített vizes fázisokra 1,5 liter etilacetátot rétegezünk, és intenzív keverés közben 4 n sósavoldattal (kb. 37 ml-el) pH 2,6-értékre savanyítjuk. A keletkezett barna csapadé-40 kot szűréssel eltávolítjuk. A fázisokat szétválasztjuk, a vizes oldatot konyhasóval telítjük és 1 liter, majd 0,5 liter etilacetáttal extraháljuk. A szerves fázist kétszer 70—70 ml telített konyhasóoldattal utánamossuk, majd nátriumszulfát 45 felett szárítjuk, és vákuumban kb. 100 ml térfogatra pároljuk be. Ehhez az oldathoz erős keverés közben kis részletekben 100 ml hexánt adunk és az elegyet több órán át hidegben állni hagyjuk, majd leszívatjuk és a maradékot etil-50 acetát-hexán (1:1) eleggyel mossuk. A 8,5 g maradékot acetonos oldatból 50 g semleges szilikagélen adszorbeáljuk. A száraz adszorbeátumot 450 g semleges szilikagéllel töltött oszlopra viszszük fel (0 5,75 cm, h = 41 cm) és kloroform^ 55 -aceton (2:1) eleggyel eluáljuk. Az első liter eluátumot elöntjük és a következő frakciók tartalmazzák a reakcióterméket. Ezeket vákuumban szárazra pároljuk, a maradékot 40 térfogatrész acetonban oldjuk, 10 térfogatrész metanolt 60 csepegtetünk hozzá, majd 1,3 térfogatrész 3 m metanolos nátrium-a-etil-hexanoátoldat hozzáadásával kristályos 7-(a-fenil-a-ciánacetilamino)-3-(l-metiltetrazolil-5-iltio)-metilcef-3-em-4-karbonsav nátriumsóvá — (3,12 g) — alakít-65 juk át. 10
