162728. lajstromszámú szabadalom • Eljárás oxitetraciklin előállítására
162728 vetkeztében fragmentumokra esik szét. Ezekből a fragmentumokból nő ki később a II. generáció, amely a növekedés lelassulása uitián a hifák fejlődésének 2., termelő fázisát mutatja. Az a felismerésünk, hogy a hifák fejlődése 2. 5 fázisának alakulását generációváltás nélkül is biztosítani lehet az előfertmentációs táptalaj emészthető fehérje tartalmának meghatározott szintre állításával, valamint szabad aminosav tartalmának limitálásával, szervetlen N-forrás M kizárásával, amikoris olyan hifatömeget hozunk létre, amely a fermentációs táptalajban generációváltás nélkül növekszik tovább a hifák fejlődésének 2. fázisában. Ez jelentős technológiai előnyt biztosít azokkal a próbálkozásokkal szem- 15 ben, ahol a hozamnövelést a főfermentációs táptalaj módosítása révén kísérelték meg (W. A. Zygmunt: Applied Microbiology, Vol. 9. No. 6. 502—507., 1961; W. A. Zygmunt: Nature, 4877 *sz., 289., 1963). Továbbá biztonságosan és 20 egyszerűeri oldja meg azt a célt is, melyet a kutatók ezideig a mikroorganizmus speciális, nemesítésével, vagy a fermentációs táptalajok megfelelő kialakítása útján kíséreltek megoldani — sikertelenül. Lassúbb növekedési ütem mel- 25 lett lehetővé teszi, hogy a fermentációs táptalajban csak a 2. fejlődési fáizislban levő termelő hifák legyenek jelen. Míg a korábbi eljárások alkalmazása esetén a generációváltásig, majd a generációváltás után is egyideig növekvő im- 30 produktív hifák elfogyasztják a táptalaj tápanyagainak egyrészét, addig eljárásunknál a tápanyagokból több vehet részt a szekunder anyagcsere termékek kialakításában, minthogy a növekedés és szekunder-ányag-termelés párhuzamosan, egy generációban zajlik. Eljárásunk lehetővé teszi magas OTC hozam elérését viszonylag alacsony tápanyag koncentrációjú táptalajokon. A gerierációváltásos technológiáknál a hozam emelésének az a lehetősége, hogy az alkalmazott fermentációs táptalajt tápanyagokban dúsítják, igen nagy nehézségekbe ütközik. A koncentrálással párhuzamosan különösen keverő nélküli csofermentorokban egy bizonyos határon túl a keverés elégtelenné válik. Azokon a táptalajokon, melyek keverés szempontjából az adott fermentor típusban optimális koneentrációjúak, eljárásunkkal lényegesen magasabb hozam érhető el, mint a hagyományos 50 generációváltásos technológiákkal. Eljárásunk lényege megfelelő előfermentátíós táptalaj összetétel alkalmazásával a növekvő hifák olyan biokémiai állapotának biztosítása, 55 amely nem teszi lehetővé a későbbi generációváltást és az azzal kapcsolatos improduktív hifák kifejlődését, ennek megfelelően a fermentáció egész folyamata során a hifák fejlődésüknek 2., termelő fázisát mutatják. GQ Eljárásunk kivitelezését az 5. számú példa muitJatja be. Az 1. példát azért szerepeltetrjiük, mert ez alkalmazza a legálrtalánosalbban használt előfermenitéciós itáptaliaj/t. 65 1. példa: A Streptomyces rimosus MKL-^-184 törzs spóraszuszpenzióját 500 ml-es Erlenmeyer lombikban levő 100 ml steril táptalajba oltottuk úgy, hogy a steril táptalaj ml-enként 2,5X10'' spórát tartalmazott. A táptalaj összetétele a következő volt :•'•.• kukoricalekvár i(100%-os) 0,8% burgonya keményítő 3,8% •<NH*)2SO, 0,6% CaCÖ:i 0,5% NaCl 0,5%, pH sterilezés előtt 7,0. A beoltott táptalajt 28 °C-on 60—70 órán át rázattuk. A síkrázóasztal adatai: 350 ford/perc, kilengése 28—32 mm. Az így nyert vegetatív oltóanyagból 10 literes üvegf érmen torban levő 5 liter alábbi összetételű előférmentációs táptalajba oltottuk: kazeinhidrolizátum 2,4 % keményítő 2,4 % CaCO., 0,6 %, NaCl 0,370/o kukoricalekvár (100%-os) 0,6 %, pálmaolaj 0,5 % Az előfermentációs táptalaj emészthető fehérje tartalma 0% [mérési módszer: Emészthető fehérje meghatározás Sjollema—Wedermeyer 35 szerint, MSZ 6830—66. (S—19) 15 oldal, 5. 41., 1970. XII. havi kiadás], szabad aminosav tartalma pedig 44,0 mg%, aminosavnitrogénnek megfelelő voHr„ [mérési módszer: Formol-titrálásos módszer • (Sörensen), Bálint: KLINIKAI 40 LABORATÓRIUMI DIAGNOSZTIKA, 1962. Medicina, Budapest, 380, 382]. A tenyészetet 1 : 1 arányú levegőztetés mellett 28 °C-on, 6,8-as induló pH-n, 25 órán át növesz-45 tettük. Ekkor metilénkék redukciós ideje elérte a minimum értéket (mérési módszer: L. Nyiri, Z. Lengyel, 1959., Acta Microbiologics VI/3, p. 171—177). Az inokulum metilénkék redukciós ideje átoltáskor 30 másodperc veit. Az inokulumból 0,5 litert 10 literes üvegfermentorban levő 5 liter alábbi összetételű táptalajba oltottuk: kukoricaliszt 6,8 o/0; CaCOn 0,5 % NaCl 0,3 %i KCl 0,2 % NH4NO3 0,4 % bórsav 5 XlO-^/o MnS04 2,5X10-% Co(N03 ).> 2,5X10-4% KH2 PO A ojaiti»/0 pálmaolaj 0,5 % 2
