162728. lajstromszámú szabadalom • Eljárás oxitetraciklin előállítására
162728 A főfermentációs tenyészetet 1 : 1 arányú levegőztetés' mellett, 28 °G-on, 7,0 induló pH-n, 144 óráig növesztettük. A főfermentáció első harmadában az előfermentációból származó tovább növekedő tenyészet fragmentumokká esett szét. A fragmentumokból nőtt Iki a II. generáció. 144 óinás korban a teljes femmanitlé térfogat pH-ját 2,2-re állítottuk 25%-os kénsawal, 30 percig kevertettük, majd szűrtük. A micéliumot 1 liter ionmentes vízzel átmostuk, majd a mosóvizet a szűrtlével egyesítettük. Ezután' 4 g Na2S20/,-et adtunk hozzá kevertetés közben, majd ammóniumhidroxiddal a pH-t 6,0-ra állítottuk be. Ezután 12,5 g nátriumhidrokarbonátot adtunk hozzá, újra kevertettük 15 percig, a pH-t ammóniumhidroxiddal tovább emeltük 9,0 értékig. Félórai kevertetés után a kicsapott komplexsót szűrtük. A kiszűrt csapadékot 50 °C hőmérsékleten, áramló levegővel szárítottuk. A fentiek szerint előállított komplexsó vízmentes oxigéntetraciklin bázis tartalma 24,5 g volt. 2. példa: Streptomyces rimosus MKL—184 törzsből az l-es példában leírt módon készített vegetatív oltóanyagot 10 literes üvegfermentorban levő 5 liter alábbi összetételű előfermentációs táptalajba oltottuk: liter alábbi összetételű előfermentációs táptalajba oltottuk: szójaliszt keményítő CaC03 NaCl KCl pálmaolaj 0,75% 3,5 % 0,5 % 0,3% 0,2 % 0,5 % Az előfermentációs táptalaj emészthető fehérje tartalma 0,375%, szabad aminosav tartalma pedig 0,94 mg% aminosavnitrogénnek megfelelő érték volt. A tenyészetet 1 :1 arányú levegőztetés mellett 28 °C-on 6,8-as induló pH-n, 36 órán át növesztettük. Ékkor metilénkék redukciós ideje elérte a minimum értéket. Az inokulum metilénkék redukciós ideje átoltáskor 1 perc 30 másodperc volt. A fermentációt pontosan az 1.* példában leírt, ismert eljárással végeztük. Generációváltás nem volt, a fermentáció nagyon gyengén fejlődött. A fermentációból a hatóanyag kinyerését az 1. példában leírt, ismert eljárás alkalmazásával végeztük. A fentiek szerint előállított komplexsó vízmentes oxiteträcifclin bázis tartalma 33,5 g volt. 3. példa: Streptomyces rimosus MKL—184 törzsből az . l-es példában leírt módon készített vegetatív oltóanyagot 10 literes üvegfermentorban levő 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 szójaliszt 1,8% keményítő 3,5í>/oi kazein hidrolizátum 0,5% CaCO.! 0,5% NaCl 0,3% KCl * 0,2% pálmaolaj 0,5% Az előfermentációs táptalaj emészthető fehérje tartalma 0,9%,, szabad aminosav tartalma 7,75 mg% aminosavnitrogénnek megfelelő érték volt. A tenyészetet"l : arányú levegőztetés mellett 28 °C-on 6,8-as induló pH-n, 22 órán át növesztettük. Ekkor metilénkék redukciós ideje elérte a minimum értéket. . Az inokulum metilénkék redukciós ideje átoltáskor 22 másodperc volt. A fermentációt pontosan az 1. példában leírt, ismert eljárással végeztük. A generációváltás az 1. példában leírt módon következett be. A fermentációból a hatóanyag kinyerését az 1. példában leírt, ismert eljárás alkalmazásával végeztük. A fentiek szerint előállított komplexsó vízmentes oxitetraciklin bázis tartalma 26,0 g volt. 4. példa: Streptomyces rimosus MKL,—184 törzsből az l-es példában leírt módon készített vegetatív oltóanyagot 10 literes üvegfermentorban lev'Ő 5 liter alábbi összetételű előfermentációs táptalajba oltottuk: szójaliszt NH4 NO :j keményítő CaCO;i NaCl KCl pálmaolaj 2,0% 0,4% 3,5% 0,5%! 0,3%-0,2% ' 0,5% Az előfermentációs táptalaj emészthető fehérje tartalma 1,0%, szabad aminosav tartalma 2,5 mg% aminosavnitrogénnek megfelelő érték volt (ezt az értéket a NH4NO3 aimmónia-N értékének a mérési adatokból való levonása után kaptuk). A tenyészetet 1 :1 arányú levegőztetés mellett 55 28 °C-on 6,8-as induló pH-n, 23 órán át növesztettük. Ekkor metilénkék redukciós ideje elérte a minimum értéket. Az inokulum metilénkék redukciós ideje átoltásfcor 20 másodperc volt. 60 A fermentációt pontosan az 1. példában leírt, ismert eljárással végeztük. A generációváltás az 1. példában leírt módon következett be. A fermentációból a hatóanyag kinyerését ugyancsak az 1. példában leírt, ismert eljárás 65 alkalmazásával végeztük. 1
