162292. lajstromszámú szabadalom • Eljárás proteolitikus enzimek előállítására
162292 22 VII. táblázat Törzs C 339 C 347 C 351 i Kiindulási anyag 250 kg 25 Anson-egység/kg enzimet tartalmazó tenyészfolyadék 250 kg 45 Anson-egység/ kg enzimet tartalmazó tenyészfolyadék 600 ml 32 Ansonegység/l enzimet tartalmazó tenyé»zfolyadék Anson-egység összesen 6250 11250 19,2 Centi ifugálási sebesség lufű/perc, időtartama perc 3000 30 3000 30 4000 30 Kicsapás hőmérséklete C* kicsapó szer Körülményei 35 85 kg Na2 S0 4 egy órai állás 35 85 kg Na,S04 egy órai állás 0 1200 ml C, ",OH Szűrés 2,25 kg Kieselguhi présszűrő présszűrő nincs Icentrifuqálás 30 per cig 3000 ford/perc, mosás > 600 ml C,H,OH-val 0 C" ', on, majd centrifugálás 4000 ford/perc sebességgel 10 per Ciq) Szárítás Szárítószekrény 40 C* Szárítószekrény 40 C* Vákuum P2 0, i Enzimtartalmú poi f 4000 g 0,4 Anson-egység/g aktivitású 1300 g 0,8 Anson egység/g aktivitású 9,7 g 1,3 Ansonegység/g akti | vitású i :i Termelés 1600 Anson-egység = 25% 1020 Anson-egység = 9% 1 12,6 Anson-egység - 65% A VII. táblázatban felsorolt kiindulási anyagokat úgy állítottuk eló', hogy a baktériumokat egy 550 literes rozsdamentes acéltartályban tenyésztettük aerob körülmények között. A tápközeg kezdeti pll-értékét 2 mólos Na, CO, oldattal állítottuk be. lizt az oldatot az inokuláció előtt steril körülmények között vittük be a rendszerbe. A II. táblázatban felsorolt baktériumokkal előállított proteolitikus enzimeket megvizsgálva azt találtuk, hogy az enzimek nem egységesek, mivel számos tulajdonságukban különböznek eevmástól. Ezenzimeket proteolitikus aktivitásuk alapján úgy oszthatjuk csoportokba vagy típusokba, hogy a 7-es. 9-10-es és . 12-es pH-nal mert proteolitikus aktivitást a maximális aktivitás százalékában fejezzük ki. A „maximális aktivitás" kifejezésen az Anson-módszerrel különböző pH-értékeken meghatározott legnagyobb lehetséges proteolitikus aktivitást értjük. A kövctke/ő enzim-tipusokat különböztetjük meg: L tipus: 60 80'v aktivitás pH 7-nél. 100% aktivitás pH 9 2. tipus: 50-70% aktivitás pH 7-nél, 100% aktivitás pH 9 60 -80% aktivitás pH 12-nél; 12-nel: 10-nél, 3. tipus:: 55 30 50% aktivitás pH 7-nél, 100% aktivitás pH 9-10-nél, kb. 20% aktivitás pH 12-nél. Szakemberek előtt ismeretes, hogy a kalciumionok a legtöbb proteolitikus enzim aktivitását stabilizálják. Meg-60 vizsgáltuk, hogy az I. táblázatban felsorolt és a II. táblázat szerint fajokba és változatokba osztott baktériumok által termelt enzimek hatását hogyan stabilizálja a kalciumion mennyisége. A vizsgálatokat 10,5 vagy 11-es pH-n végeztük 0,01 mólos kalcium-oldattal. A stabilizációt a 30 percig 50 85 C°-on való állás után megmaradó százalékos aktivitásban fejezzük ki. Az enzimek típusvizsgálatának és a kaleiumionok stabilizáló hatására vonatkozó vizsgálatoknak az eredményeit a VIII. táblázatban tüntettük fel. A kereszt (•) azt jelenti, hogy a kalciumionok távollétében meghatározott maradék 70 proteolitikus aktivitás kisebb, mint a kalciumionokat tartalmazó minta maradék proteolitikus aktivitásának 80%-a, a vonás ( -) pedig azt jelenti, hogy a kalciumionok távollétében meghatározott maradék proteolitikus aktivitás nagyobb, mint a kalciumionokat tartalmazó minta maradék 76 proteolitikus aktivitásának 80%^a. 11
