161900. lajstromszámú szabadalom • Eljárás anti-alfa1-fetoglobulin tartalmú, elsődleges rákos májdaganat diagnosztizálására alkalmas szer előállítására

161900 tartó anyaggal együtt való feloldásával és koaguiáltatásával vagy i(l2) egy olyan diszperzió alakjában, amely anlá-ai-tfetoglolbulinnak egy 'hordozón Vialó adszorfoeáltatásával és az így kapott terméknek diszpergáló közegben való diszpergálásával állítható elő. A találmány értelmében a tisztított anti-winfetoglobulin előállítására egy hepatomas íbeteg hasvizével vagy egy emberi magzat szérumával immunizálunk egy állatot, és az állatból vérpróbát veszünk. Ebből a vérpróbából kiválasztjuk a szérumot, és az antiszéruimot normális emberi szérummal vagy normális emberi szérumnak .például glutáraktóhiiddel való kezelésével bapott oldhatatlan irnmumoaidszorbenssel aidszorbealtatjuk. Ügy is eljárhatunk, hogy a hasvizet vagy a szérumot előzetesen a szokásos fehérjei rakcionálással tisztítjuk, és az így kapott ai-íetoglobulin frakoiaval iimmunizáljuk az állatot. Ezután vérpróbát veszünk az állatból, és a szérumot elválasztjuk. A tisztított minőségű ainfetoglobuiin előállítására a találmány értelmiében egy primer hepatomas beteg hasvizét vagy szérumát akrinollal szemben dializáljuk, és a dáalizátumiból kapott csapadékot fethérjefraikcdonálással tisztítjuk. Amióta felvetették annak a lehetőségét, hogy az ai-fetoglofoulin jelenléte vagy ihiánya felhasználható lehet hepatoma megkülönböztető diagnosztizálására, számos kutató kísérletezett primer heptoma immunodiagnózisával, mindeddig azonban nem sikerült alkalmas diagnosztikai szert találni, és ezért jelenleg analógia alapján immunodiffúziós és immunoelektroforetikus eljárásokat alkalmaznak, mert ezek jól bevált módszerek számos immunodiiagnosztikai alkalmazásra. Az immunodififuzió egyszeri és kettős diffúziós eljárásiként osztályozható. Az egyszeri diffúziós eljárásiban az antigént, az antitestet és a diffúziós közeget három külön rétegben tartalmazó cső precipitin sávot mutat a diffúziós közegből álló középső rétegben az optimális antigén-antitest aránynak megfelelő szinten, és ezt a szintet használják fel diagnosztikai észlelésre. Ezt a módszert általáibon Oudin-módszerként ismerik. Az OuűhterlonyHmódszernek nevezett kettős diffúziós eljárás abban áll, hogy az antitestet egy középső lyukba és az antigént azt körülvevő lyukakba helyezik — ezek a lyukak egy lemezen levő agarmétegben vannak —, mire precipitin gyűrű jelenik meg az egyszeri diffúziós eljárás optimális antigén-antitest arányának megfelelő helyen, és ezt a precipitin gyűrűt használják fel diagnosztizálásra. Qudin módszere, amelyben a precipitin gyűrűt az antigén és az antitest diffúziós tényezője és koncentrációja által meghatározott szinten hozzák létre, előnyös az antigén kvantitatív meghatározására. Másrészt Ouchterlony módszere használhatóbbnak (bizonyul, ha különböző antigének között kell különbséget tenni. . Az immunoelektroforézis a közönséges zónás elektroforézis és a fent említett immunodiffuzió kombinációja. Eszerint ha az antitestet a lineárisan frakcionált antigén vándorlási irányával párhuzamosan helyezzük el, precipitin gyűrű •alakul ki a fent leírt optimális aránynak meg-5 felelő helyen, és ezt a precipitin gyűrűt használják fel diagnosztizálásra. Ez a módszer különösen jó reprodukálhatóság tekintetében. Mindamellett ezeket a diagnosztizáló módsze-10 reket nem specifikusan hepatoma megkülönböztető diagnosztizálásária dolgozták ki, és noha alkalmazhatók, mindkét módszernek számos hátránya van, többek között a kétes pozitív eredmények gyakori előfordulása, költséges beren-15 dezés szükségessége és a bonyolult és időrabló diagnosztizáló eljárás. Ennélfogva specifikusabb és egyszerűbb módszer volt kívánatos, hogy sok beteget lehessen megvizsgálni korlátozott idő alatt. 20 Halálmányaink célja a sok hátrány elhárítása volt, és kísérleteink során azt találtuk, hogy anti-ai-fetogloihulinit egy tartó anyaggal együtt feloldva és diszpergált állapotban megdermedni hagyva vagy anti-<ai-fetoglobulint egy hordozón 25 adszonbeáltatrva és ilyen állapotban diszpergáló közegben diszpergálva olyan diagnosztizáló szerhez juthatunk, amellyel közvetlenül megvizsgálható a beteg hasvize vagy széruma minden bonyolult művelet elvégzése nélkül. Sikerült 30 olyan diagnosztizáló szert előállítanunk, amely változás nélkül hosszú ideig eltartható és ritkán ad kétes pozitív eredményt, de előnyös primer hepatoma kimutatására. A találmány számos további előnye és jellegzetessége kitűnik a követ-35 kező leírásból. Az alábbiakban ismertetjük egy olyan találmány szerinti diagnosztikai szer előállítását, amelyben az antitest, az anti-ca-ifetoglobulin fel van oldva egy tartó anyaggal együtt és az oldat 40 meg van dermesztve diffúz állapotban. Ennek a diagnosztizáló szernek az előállítására egy állatot az ai-fetoglobulin antigénnel immunizálunk, a kapott antiszéruimot egy tartó 45 anyaggal együtt feloldjuk, adott esetben felületaktív szent, színezéket és tartósítószert adunk hozzá, és diszpergált állapotban megdermedni hagyj.uk. A találmányban használt tartó anyagnak nagy 50 a viszkozitási tényezője, és a jó megkülönböztethetőség érdekében kellően átlátszó. Ezeknek a követelményeknek megjelenek az agar, dextrin, keményítő, pektin és más poüszacharidok, továbbá fehérjék, mint a zselatin stib. Előnyösen 55 agart, szintetikus poliakrilamiid gélt és keményítőt használunk. A klinikai alkalmazáskor hiperkoleszterines szérumnak tulajdonítható kétes pozitív eredmények arányának csökkentésére alkalmazott felületaktív szer lehet anionos- pél-60 dául nátriumoleát, nátriumlaurilszulf át, nátriumoktilszulfát, nátriumsztearilszulfát, nátriumarilbenzolszulfonát, nátrium'diialkilszulfoszukcinat stb., kationos, például dodecilamiinacetát, benzildimetilalkilammóniumíhalogenid, cetilpiridMum-65 halogenid stb. és nem ionos, például poláoxieti-I