161849. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A16886 antibiotikumok előállítására
5 161849 6 Az AI 68861 ammóniumsója Whatman No. 1 papíron történő papírkromatográfiás vizsgálatban Rf 0,41 értéket ad, propanol-aoetonitril-víz 1:1:1 rendszerben. Bioautográfiát végeztünk, a papírt tesztorganizmusként Salmonella galli- 5 narum-mal inkubált agarlemezekre helyezve. Ha az A16886I monoammóniumsóját vékonyrétegkromatográfiásan, szilikagéles lemezeken futtatjuk, 70%-os vizes acetonitrilt alkalmazva, és előhívásra ninhidrin-spray-t használva, az 1" Rf-érték 0,51; cellulózlemezen aoetonitril-izopropanol-víz rendszerben, az előző hívószert alkalmazva az Rf-érték 0,36. Az Al 68861 antibiotikum saivaisihidrolizátumának Spackman—Moore—Stein módszeiTel vég- 15 zett aminosavanalízise két ninhidrinnel reaktív foltot ad, melyek egyike a glicinnel megegyezően (0,61 «mól/mg), míg a másik még a glicin előtt fut, és az a-aiminoadipinsaivval azonosítható (1,97 «mól/mg). 20 Az A16886II monoammóniumsójának elektrometrikus titrálása 66% dimetilformamid-víz oldatban, 7,7 kezdeti pH-értéken négy titrálható csoport jelenlétét mutatja: pK'ai = 4,4; pK'a2 = 25 = 5,7; pK'a:! = 9,6; pK'a 4 t=10,4. Ez utóbbi mintának hasonló titrálása, csak 6,8 kezdeti pH-értéken végezve, pK'ai = 4,0; pK'a2 = 5,3; pK'a:! = 9,2 és pK'a4 = 10,5 értékeket ad. Az A16886II monoammóniumsójának analízise 30 nem mutat metoxi-tartalmat, és szemben az I faktorral, nem található metoxi-csoportra utaló jel az A16886II monoammóniumsójának NMR spektrumában sem. Van Slyke aminonitrogén meghatározás során az A16886II monoammó- 35 niumsójára 5,1% adódik. Az A16886II D2 0-ban felvett "NMR spektruma a következő értékeket adja: 5,67 ppm (1H, dublett, J=5 Hz); 5,15 ppm (1H, dublett J = 5 40 Hz); 4,90, 4,68 ppm (2H, AB kvartett, J=13 Hz); 3,9—3,7 (1H, multiple«); 3,69, 3,39 (2H, AB kvartett, J=18 Hz); 2,6—2,3 (2H multiple«); 2,1—1,5 (4H, multiple«). Az AÍ6886II antibiotikum monoammónium- A& sójának lásványolajiban felvett infravörös spektruma a mellékelt 2. ábrán látható. Az A16886II monoammóniumsójának vizes oldatban felvett UV-spektrumában 260 ingnál (Ej°^m = 148) van maximum, a cirkuláris 50 dikroizmust ugyancsak vizes oldatban mérve pozitív Cotton-effektust kaptunk 258 m«-nál, és negatívat 228 m/'-nál. Az A16886II antibiotikum monoammóniumsójának Whatman No. 1 papíron végzett papír- 55 kromatográfiás vizsgálatában propanol-acetonitril-víz (1:1:1) rendszerben Rf = 0,33 értéket kaptunk. Bioautogrófiát végeztünk, tesztorganizmusként Salmonella gallinarum törzzsel inkubált agar-lemezre téve a papírkromatog- 60 ramot. Az A16886II antibiotikum monoammóniumsóját vékonyrétegen futtatva, szilikagéles lemezen, 70%-os vizes acetonitril rendszerben, előhívóként ninhidrin sprayt vagy bioautográ- 05 fiát használva, az Rf-érték 0,42; cellulóz-lemezeken acetonitril-izopropanol-víz (1:1:1) rendszerben, ugyanígy előhíva, az Rf-érték 0,29. Az A16886II antibiotikum savashidrolizátumának aminosavanalízise, Spackman—Moore— Stain módszerrel futtatva, elsődlegesen csak egy ninhidrinnel reagáló foltot kaptunk; ez még a glicin előtt eluálódo* t és az a-aminoadipinsavval azonosítható (2,1 «mól/mg). Csak egy egészen gyenge, glicinnel azonosítható foltot kapunk. Később ugyanígy egy másik mintát analizáltunk, és a két érték 2,1 «mól/mg, illetve 0,13 «mól/ /mg volt. Az előzőkön kívül az A16886I és A16886II monoammóniumsóit 'különböző rendszerekben papírkromatograimon és vékonyrétegkromatográfiásan futtatva a következő eredményeket kaptuk: Oldószerrendszer Rf-érték I faktor II faktor Papírkromatográfia Etanol-víz (80 : 20) + + 1,5% NaCl, papír 1 N nátriumszulfátoldattal impregnálva 0,38 0,33 Vízzel telített butanol startponton startponton Vízzel telített butanol+ 2% p-toluolszulfonsav 0,39 0,32 Vízzel telített metilizobutilketon startponton startponton Vízzel telített metilizobutilketon + + 2% p-toluolszulfonsav startponton startponton Vízzel telített; metilizobutilketon + + 2; 0 piperidin startponton startponton Acetonitril startponton startponton Propanol-acetonitril-metanol-víz 4:3:2:1 startponton startponton Propanol-piridin-ecetsav-víz 15 : 10 :3 : 12 0,32 0,27 Propanol-piridin-ecetsav-acetonitril-Víz 45 : 30 : :9 :40 : 36 0,21 0,15 Butanol-ecetsav-víz 3:1:1 0,20 0,17 Etilacetát-ecetsav-víz 3:1:1 0,29 0,22 Propanol-víz 70 : 30 0,17 0,17 Acetónitril-víz 70 : 30 0,72 0,65 Víz-etanol-ecetsa v 70 : 42 : 6 0,82 0,82 Vékonyrétegkromatográfia Acetonitril-víz (7 : 3) rendszerrel cellulóz lemezeken 0,35 0.29 3
