161608. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-aminocefalosporánsav-származékok előállítására
5 161608 6 mossuk és vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk. Kzután az oldatot 10 g szilikagólt tartalmazó oszlopon keresztül szűrjük és a szú'rletet vákuumban bepároljuk szárazra. A maradékot 12 ml etanolban oldjuk és éjjelen át -20° hőmérsékleten kristályosodni hagyjuk. Az így kapott 7-azidoacetilamino-cefalosporánsav 132-133*-on olvad. Az anyaJúgot kevés metanolban oldjuk és 3 mólos metanolos nátrium-alfa-etil- hexanoát segítségével nátriumsóvá alakítjuk; ez a só rövid idő alatt kristályos alakban kiválik az elegyből. i -*129' 1° (c = 1 vízben, nátriumsó alakjában); Rf52 = 0,27:Rt '101 A = 0,45; a.nátriumsó ibolyántúli színképe (vízben); Ama\= 260 millimikron í, - 9000). 5,44 g 7-azidoaeetilaniino cefalosporánsav-nátriumsót 3.02 g kálitimrodamiddal együtt 15 ml vízben oldunk. Az oldathoz 3,0 ml piridint adunk, majd az elegy pll-értékét 0,26 ml 85'?-os foszforsav hozzáadásával 6,4-re állítjuk be. Az elegyet 6 óra hosszat 60* hőmérsékleten melegítjük. Kzután 75-75 ml metilizohiitilketonos Amberlite I.A-1-aeetát oldattal hatszor, majd 75 ml metilizobutilketonnal egyszer, végül pedig 75-75 ml etilacetáttal kétszer extraháljuk. (A folyékony ioncserélő oldatát olymódon készítjük, hogy 200 ml Amberlite LA-1,24 ml jégecet és 600 ml metiltzobutilketon elegyét 160 ml vízzel fél óra hosszat keverjük, majd a fázisok s/étválásáig állni hagyjuk és az elkülönített szerves fázist alkalmazzuk a fenti célra.) A vizes oldathoz azután 1 liter alkoholt adunk, az elegyet jégfűrdőben 2 óra hosszat állni hagyjuk, majd a kivált pelyhes csapadékot kiszűrjük. A v/űrletet vákuumban bepároljuk, a még nedves maradékot 60 ml vízben oldjuk és egy oly oszlopon keresztül szűrjük, amely alulról lelkié irányuló sorrendben a következő anyagokat tartalmazza: 10 ml „Sephadex" CM C-25 (H*-a)ak), 40 ml „Alox", 10 ml „Zeo-Carb" 226 (iT-alakj, 40 ml „Alox". 10 iril ,.l)owe\-l" (acetát-alak) és 10 ml „Sephadex" CM C-25 (H*-alak). Az oszlopot azután összesen 200 ml vízzel utánamossuk és a/ egyesített szűrletet vákuumban bepároljuk szárazra. A maradékot 10 ml abszolút alkohollal eldörzsöljük; ilymodon dihidrát-alakban kapjuk a tiszta 3-(dezacetoximetil)-3-piridiniome til- 7-(az;doacetilamino)-cefalosporán savat. |a|2()=- -36 < T (c - 0,7 7,u/henl; R,-52=0,02. Rt 101 AO,2; ibolyántúli színkép (vízben); Amax = 258 millimikron (<= 13 150). 2. példa 4.53 g 7-a/idoacetilamino-cefalosporánsav-nátriumsót 300 ml vízben oldunk, az oldatot 37° hőmérsékletre melegítjük, majd 2,4 ml 0,1 n nátriumhidroxidoldattal 7.4 pH-értékre állítjuk be. I zu tán 120 mg ace ti lesz te ráz (Bacillus subtilis ATCC 6633 törzsből, vö. 1 080 904 sz. belga szabadalmi leírás) kb. 4 ml vízzel készített szuszpenzióját adjuk hozzá és a képződő ecetsavat folyamatosan semlegesítjük 0,1 n nátriumhidroxidoldattal (beállítás 7,3 pll-értékre; hőmérséklet: 37°). A reakció óra 45 perc alatt befejeződik. A reakcióelegy pll-ertékét 6.5-re állítjuk, az oldatot G4 Zsugorított üvegszűró'n keresztül leszűrjük és a szűrletet liofilizáfjuk. Nymodon 5.34 g sárgás gyantaszerű termék alakjában kapjuk a 7-azidoaceIilamino-O-dezacetil-cefalosporánsav nátriumsóját. 4,47 g lenti módon kapott nyers terméket közvetlenül oldunk 50 ml abszolút dimetilformamid és 14,0 ml trietilamin elegyében, az oldathoz 8,4 ml béta-klóretilizocianátot adunk és az elegyet szobahőmérsékleten fél óra hosszat keverjük. Kzután az oldószert nagyvákuumban elpárologtatjuk és a kapott gyantaszerű maradékot 250-250 ml abszolút éterrel háromszor eldörzsöljük. Az éterben oldhatatlan maradékot 125 ml I0'/-os foszfát-pufferoldattal (pH=6,7) felvesszük és 750 ml etilacetáttal kirázzuk. A fázisok szétválása után a felső fázist kiontjuk és az alsó fázist ismét felülrétegezzük 750 ml etilacetáttal. 45 ml 2 n sósavoldat hozzáadásával a vizes fázis pH-értékét 2,8-ra állítjuk. A fázisokat erélyes összerázás után szétválasztjuk, a vizes fázist nátriumkloriddal telítjük, majd 500-500 ml etilacetáttal még kétszer extraháljuk. A szerves oldószeres g fázisokat egyesítjük, 75-75 ml telített nátriumkloridoldattal kétszer mossuk, nátriumszulfáttal szárítjuk és vákuumban bepároljuk szárazra. A maradékként kapott gyantaszerű terméket aceton és kloroform 5:95 arányú elegyével felvesszük és egy 3 cm átmérőjű, 25 cin magas, 85 g 10 szilikagólt tartalmazó oszlopon aceton és kloroform mövekvő arányú acetont tartalmazó elegyével kromatografáljuk. A terméket 20-35 tf.9? acetonnal eluáljuk. A gyengén sárgás eluátumokat egyesítjük és vákuumban bepároljuk szárazra. A maradékot 6 ml metanolban oldjuk, 1,35 ml 3 mólos 15 metanolos nátrium-alfa-etilhexanoát oldatot adunk hozzá, 10 ml acetonnal hígítjuk, majd vákuumban zavarosodásig bepároljuk. Kzután a termék egy kristályával beoltjuk (vagy spatulával dörzsöljük) és -10* hőmérsékleten több óra hosszat kristályosodni hagyjuk. A képződött színtelen kristályokat 20 leszivatással elkülönítjük, acelonnal mossuk, nagyvákuumban szárítjuk és így az 0-dezacetil-0-(béta-klóretil-karbamoil)-7-azidoacetilainino- cefalosporánsav tiszta nátriumsóját kapjuk. Ibolyántúli színkép: maA = 261 millimikron ((=9350); . 20=M14* • 1' (c=0.75 vízben); * vékonyréteg-kroiuatogramm szilikagélen: Rf 101 A = 0.62:Rf az etilacetát-piridín-ecetsav-víz (62:21:6:11) rendszerben =0,39. 30 .?. példa 9.06 g 7-azidoacetilaniino-celalosporánsav-nátriiimsót 250 ml vízben oldunk és 240 mg acetíleszteráz segítségével 37* 35 hőmérsékleten, a 2. példában leírthoz hasonló módon a 7-azidoacetilamino-O- dezacetil-cefalosporánsav nátriumsójává alakítjuk; hozam 10.47 g. 8,79 g fenti módon kapott nyers terméket 100 ml abszolút dimetílformamidbaii szuszpendálunk és a szuszpen-40 zióhoz0,15 ml tri-n-butil-óiK>xidot-|(C,H, ),Sn|,() adunk, l/után az elegybe/ 15 perc alatt hozzácsepegtetjük 5,2 ml metilizocianát 45 ml ümetilformamiddal készített «Idatát és az elegyet még I ora hosszal keverjük. A reakcióelegyet azután leszűrjük és a szűrletet nagyvákuumban bepároljuk 45 szárazra. A gyantaszerű maradékot 500-500 ml abszolút éterrel háromszor eldörzsöljük, miközben az éterben oldódó részt minden alkalommal elkülönítjük és kiontjuk, majd a maiadékot 250 ml 10'^os foszfát-pufferoldattal pH= 6,7) felvesszük. A kapott elegyet előbb 1,5 liter, majd 0,5 liter 50 etilacetáttal extraháljuk. A szerves oldószeres fázisokat egyesítjük, 100-100 ml 6,7 pH-értékű pufferoldattal kétszer extraháljuk, majd a szerves fázist kiontjuk, a vizes kivonatokat egyesítjük, 1,5 liter etilacetáttal felülrétegezzük, 2 n sósavoldat hozzáadásával, rázás közben 2,4 pH-értékre 55 állítjuk és a fázisokat szétválasztjuk. A vizes fázist nátriumkloriddal telítjük, majd l-l liter etilacetáttal még kétszer extraháljuk, a szerves oldószeres fázisokat egyesítjük, 200-20Ó ml telített nátriumkloridoklattal kétszer mossuk, vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk, majd egy 4,5 cm 60 átmérőjű, 100 g szilikagellel töltött oszlopon keresztül szűrjük. Az oszlopot 500 ml friss etilacetáttal mossuk és az egyesített etilacetátos eluátumot vákuumban bepároljuk szárazra. 4,5 g aiíiori" maradékot kapunk, amely 15 ml metanol hozzáadására kristályosodik. A nyers, kristályos 65 terméket elkülönítjük, nedves etilacetátban oldjuk, egy 10 g szilikagél töltetű oszlopon keresztül újból leszűrjük, eluáljuk. az eluátumot bepároljuk szárazra és a maradékot nátrium-alfa-etilhexanoát metanolos oldatával kristályos natriumsóvá alakítjuk át. l'zt metanolból átkristályosítjuk és szükség 70 esetén kevés aktívszénnel való kezelés útján színtelenítjük. Ilymódon az O-dezacetü-O-metiIkarbamoil-7-azido-acetilamino-cefalosporánsav tiszta nátriumsóját kapjuk, amely kristályrácsában 1/2 mól metanolt tartalmaz igen erős kötésben. A termék UV-spektruma: ?6 A.max 260 millimikron (t=8750); 3
