161605. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-aminocefalosporánsav-származékok előállítására
161605 A kiindulási anyagot a következó'képpen állítjuk eló': 17,5 g 3-(dezacetoximetil)-3-benzoiltiometil-7-aminó-cefalosporánsav (lásd a 65o 444 számú belga szabadalmi leírást) és 12,5 ml trietilamin 1 liter dimetilformamidos oldatát egy óra alatt 9,2 ml brómacetilamidot 100 ml 5 metilénkloridos, eró'sen kevert oldatához csepegtetjük (nitrogénatmoszférában). A hőmérsékletet 1,5 óra alatt lassan 10°-ra engedjük emelkedni és itt tartjuk még egy fél óráig. Ezután az oldószer nagy részét 0,5-1 Hgmm-es vákuumban, szárazjég-aceton hűtőelegyes hűtőn keresztül ledesztilláljuk. 10 Az olajos terméket pH = 6-os foszfátpufferhez öntjük és 1 liter ecetészterrel kirázzuk. Mind a két fázis felületen csapadék keletkezik, amelyet szűréssel vagy centrifugálássjl elválasztunk. Ezután a vizes fázis pH-ját 2-re állítjuk be, konyhasóval telitjük és elválasztjuk a szerves fázist. A vizes 15 fázist 600 és 4oo ml ecetészterrel utánnaextraháljuk. Telitett konyhasóoldatos mosás után a szerves fázisokat nátriumszulfáttal szárírjuk és egymás után egy 100 mg szilikagélt tartalmazó oszlopon szűrjük. A szürleteket vákuumban szárazra pároljuk, a maradékhoz 30 ml etanolt adunk és 20 20° on kikristályosítjuk. így 7,8 g 3-(dezacetoximetil 3 benzoiltiometil 7 brómacetilamino-cefalosporánsa-; vat kapunk. O.p: 137-138°. RfSJ = 0,55. A nátriumsó UV-spektruma a következő értékeket mutatja (vízben): 25 *max = 243 nm(e= 16 800) = 275 nm (e * 20 600) 20 (a|rj =-47 ± 1° ( c = 1, 0,1-M nátriumbikarbonát-aceton(1:1) elegyben). 3. példa 35 5.13 g 3 (dezacetoximetil)-3-benzoiltiometil 7 (imidazolil (1) -aeetilamino) • cefalosporánsavat 45 ml piridinben oldunk és az oldathoz 45 ml dioxánt adunk. Ezután 26 ml 4o %-os higanyperklotatoldatot adunk hozzá, majd 40 45°-on, erős keverés közben 45 percig reagáltatjuk (nitrogénatmoszférában). Ezután lehűtjük, 13,8 ml tiobenzoesavat adunk hozzá és 5 percig rázzuk. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a maradék 250 ml vizes oldatát „Celite"-n szűrjük. A szürletet egymás után 110 ml toluollal, kétszer 68 45 ml „Amberlite" LA-2 és 14o ml toluol elegyével és kétszer 110 ml toluollal mossuk. Ezután a vizes fázist lentről felfelé 10 ml „Sephadex" CM-C-25-öt (H*-ciklusban), 42 ml „Alox"-ot, lo,5 ml „Zeo-Karb" 226-ot (H*-ciklusban),42 ml „Alox"-ot, 10,5 ml „Dowex 1"-et (acetát formában) és 50 lo ml „Shephadex" CM C-25-öt (H*-ciklusban) tartalmazó oszlopon szűrjük. A „Celite"-t, a szerves fázist és az oszlopot kétszer 30-30 ml vízzel utánaextraháljuk, az oszlopot ezenkívül 300 ml vízzel eluáljuk. Az egyesített eluátumokat vákuumban bepároljuk, kis mennyiségű csapadé 55 kot szűréssel eltávolítunk és szárazra pároljuk. A maradékot 10 ml alkohollal digeráljuk és így 1,7 g 3-(dezacetoxi metil)-3-piridinometil 7 imidazolil (1) aeetilamino) cefalosporánsavat kapunk. lalfo0 = * 76° ± 1° ( c = 1, vízben); 6° UV-spektrum vízben: 257 nut ( e = 11 650); RflOlA ° °'05-4. példa 7,13 g 7-(imidazolil-(l>acetilamino)-cefalosporánsavat 70 200 ml vízben oldunk és 37° -on 180 mg acilészterázzal az 1. példában leírt módon 7-(imidazolil-(l)-acetilamino)-0-dezacetil- cefalosporánsav nátriumsóvá alakítjuk át. Termelés 9,04 7,32 g ilyen nyersterméket 100 ml abszolút dimetH- 75 ("omiamid és 18 ml trietilamin elegyében oldunk, 5 perc alatt 9,4 ml (8,55 g) metilizocianát 30 ml dimetilformamidos .>ldatát adjuk hozzá és 50 percen át szobahőmérsékleten keverjük. Az oldatot leszűrjük, az oldószert magas vákuumban eltávolítjuk és a barna gyantás maradékot háromszor 350-350 ml abszolút éterrel eldörzsöljük. Az éterben oldhatatlan maradékot 200 ml vízben oldjuk (pH 7,0) és egymás után 1,5, 1,5, 1,0 és 0,75 liter etilacetáttal extraháljuk. A szerves fázisokat kétszer 75-75 ml vízzel mossuk. A vizes fázist (• a mosófolyadékokat) 100 ml térfogatú Sephadex-oszlopon szűrjük és vízzel utánamossuk. A megfelelő oszlop 3,0 cm átmérőjű és 15 cm magas Sephadex CM.25 C (H*-ciklusú). Az első 250 ml eluátum egy mellékterméket tartalmaz, a következő 300 ml eluátum a messzemenően tisztított hatóanyag sárgás oldata. Ezt liofilizáljuk. További tisztítás céljából a liofilizátumot kb. 45 ml vízben oldjuk, Norittal (aktivszénncl) kezeljük, Celite-n szűrjük, telitett nátriumkarbonátoldattal pH 6-ra állítjuk be, és mégegyszer a fentiekben leírt módszerrel 50 ml-es Sephadex CM 25 C (H*-ciklusú) oszlopon szűrjük és liofilizáljuk. így nyerjük a magas fokon tisztított O<iezacetil-0-metilkarbamoil- 7-(imidazolil-(l)- aeetilamino)- cefalosporánsavat, terjedelmes, színtelen porként. Termelés 1 9 g. UV-spektrum: 260 nm (e - 8050). 20, Optikai forgatóképesség: |a|p * 139°b 1°. (c = 0,94 vízben). Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatögráfiás vizsgálat során RflOlA = 0-25. RÍ52 = °>03. 5. példa 8,3 g 7-(imidazolil-(l)-acetilarnino)-cefalosporánsavat 230 ml vízben oldunk, és 378 -on 210 mg acetilészterázzal az 1. példában leírt módon a 7-(imidazolil-(l)-acetilamino)O-dezacetil-cefalosporánsav nátriumsójává alakítjuk át. Termelés 10,5 g. Ezt a nyers terméket 110 ml abszolút dimetilformamid és 27 ml trietilamin elegyében oldjuk, 5 perc alatt 18 ml etilizocianát 50 ml dimetilformamidos oldatát adjuk hozzá, és 50 percen át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután az oldatot szűrjük, az oldószert magas vákuumban eltávolítjuk és a barna gyantás maradékot háromszor 500-500 ml abszolút éterrel eldörzsöljük. Az éterben oldhatatlan maradékot 200 ml vízben oldjuk (pH 7,1) és egymás után 2,0, 1,5 és 1,5 liter etilacetáttal extraháljuk. A szerves fázisokat kétszer 100 100 ml vízzel mossuk, a vizes fázist (• a mosófolyadékokat) 120 ml térfogatú Sephadex- oszlopon szűrjük és vízzel utánamossuk. Erre a célra 3,0 cm átmérőjű és 18 cm magas, Sephadex CM 25C (H*-ciklusú> oszlopot használunk. Az első 320 ml eluátum egy mellékterméket tartalmaz, míg a következő 260 ml eluátum a messzemenően tisztított hatóanyag sárgás oldata. Ezt az oldatot liofilizáljuk, majd további tisztítás céljából 45 ml vízben oldjuk, Norittal (aktivszénnel) kezeljük, Celite-n szűrjük, telített nátriumbikarbonátoldattal pH 6-ra állítjuk és a fent leírt . módszerrel mégegyszer egy 80 ml-es Sephadex - CM 25C (H*-ciklusú) oszlopon szűrjük és liofilizáljuk. így 2,9 g O-dezacetil O etilkarbamoil-7r (imidazolil-(l) acetilamino)-cefalosporánsavat kapunk, u-rjedelmes, szinteler puntént. UV-spektrum: Xmax 258 nm (e = 780). 66 Optikai forgatás:[a|Jj° = *150°±1° (c = 0,98 vízben.) Vékonyrétegkromatogram szilikagélen: RflOlA= 0>32, Rf52 = 0,04. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás (I) általános képletű 7-aminocefalosporánsavszármazékok és ezek, adott esetben belső sóinak, előállítására, mely képletben R, szubsztituálatlan vagy rövidszénláncu 3
