161605. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-aminocefalosporánsav-származékok előállítására

3 161605 4 tunk imidazol vagy hidrogénezett imidazol felesleget is. A reakció néhány óra alatt szobahőmérsékleten lejátszódik; ha szükséges, végrehajtható alacsonyabb, vagy kissé magasabb hőmérsékleten is. A Z csoport helyén hidrogént tartalmazó (II) vegyület acüezése az aminosavak acüezesere ismert módszenei, pl. savhalogeniddel, főként savkloriddal vagy savaziddal vagy savanhidriddel, főleg pL monoészterezett szénsavból, pivalinsavból vagy triklórecetsavból képzett vegyes anhidriddel, vagy magával a szabad savval történik, kondenzálószer, pl. karbodiimid, mint pLdiciklohexilkarbodiimid jelenlétében. A (II) vegyület acilezését úgy is végrehajthatjuk, hogy a Z csoport helyén hidrogént tartalmazó (II) vegyületet először szililezzük, vagy sztannilezzük, a szililezett vagy sztannilezett terméket a savval vag> egy R,-S-CH2-CO-csoportot • tartalmazó reakcióképes észterrel acilezzük, és adott esetben a bevitt szilil- vagy sztannil-csoportot alkohollal vagy vízzel lehasítjuk, lásd pL az 1,073,530 sz. brit szabadalmi leírást és a 67,17107 sz. holland szabadalmi bejelentést. Előnyösen olyan kiindulási anyagokat alkalmazunk, amelyek a kívánt különösen hatásos végtermékekhez vezetnek. A kiindulási anyagként alkalmazott cefalosporinszármazckok ismertek és az önmagukban ismert eljárásokkal előállíthatók. A találmány körében tartoznak az eljárásnak azok a megvalósítási változatai is, melyek során az eljárás valamelyik szakaszában közbenső termékként keletkezett vegyületből indulunk ki és a hátralevő lépéseket visszük végig, vagy melyeknél az eljárást egy közbenső lépésnél megszakítjuk, vagy melyeknél a kiindulási anyagokat a reakciókörülmények során kapjuk, vagy a reakciókomponenseket adott esetben sóik formájában alkalmazzuk. Az új vegyületek felhasználhatók gyógyászati készítmények, pl. gyógyszerkészítmények formájában.Ezek a vegyületek enterális, topikális, vagy parenteralis adagolásra alkalmas, gyógyászati célra alkalmazható, szerves, vagy szervetlen, szilárd, vagy folyékony hordozóanyagokkal keverve tartalmazzák. A keverékek készítésére olyan anyagok jöhetnek szóba, amelyek az új vegyületekkel nem reagálnak, mint pl. víz, zselatin, laktóz, keményítő, sztearilalkohol, magnéziumsztearát, talkum, növényi olajok, benzilalkoholok, gumi, propilénglikol, polialkilénglikol, vazelin, koleszterin, vagy más ismert gyógyászati hordozóanyagok. A gyógyászati készítményeket pl. tabletta, drazsé, kenőcs, krém, kapszula vagy folyékony állapotban oldat, szuszpenzió vagy emulzió alakban állíthatjuk elő. Adott esetben a készítmények sterilizáltak és/vagy segédanyagokat, pl. konzerváló-, stabilizáló-, nedvesítő- vagy emulgeálószereket, oldást fokozó szereket, vagy az ozmózisnyomást megváltoztató sókat vagy pufféit tartalmaznak. A készítményeket a szokásos módon állítjuk elő. A találmányt a következő példák kapcsán ismertetjük. A hőmérsékleti értékeket Celsius fokokban adjuk meg. A 7-aminocefalosporánsavat a továbbiakban 7-ACA megnevezéssel jelölj ük, Szililcagéles vékonyréteg-kromatográfiához a következő rendszereket használjuk: 52 sz. rendszer: n-butanol-jégecet-víz (75:7,5:21) lol A rendszer: n-butanol- piridin-jégecet-víz (42:24:4:30). /. példa 5,92 g (15 mmól) brómacetil-7-ACA-t 45 ml dimetilformamidban oldunk. Ehhez hozzáadjuk 3,37 g (49,5 mmól) imidazol 22,5 ml metilénkloridos oldatát, 7,5 ml metüenkloriddal utánnamossuk. Ha a reakcióelegy felmelegszik, rövid időre jeges vizes fürdőb.' helyezzük. 6 óra múlva 1.17 ml jégecetet adunk hozzá iS 7-(imidazolil (l)-acetilaminó)- cefalosporánsavat frakcionált kristályosítással izoláljuk. E célból a reakcióelegyet 37,5 ml metilénklorid-tetrahidrofurán (4:1) eleggyel egyesítjük imikoris csapadék válik ki, amelyet leszivatva eltávolítunk. A szürlethez keverés közben 30 ml metilénkloridot és 160 ml tetrahidrofuránt adunk. Az így keletkezett színtelen csapadékot leszivatjuk és tetrahidrofuránnal mossuk. Ha az anyag még kevés dimetilformamidot tartalmaz, 75 ml meti-5 lénklorid-tetrahidrofurán (4:1) eleggyel eldörzsöljük, leszivatjuk és mégegyszer tetrahidrofuránnal mossuk. Magas vákuumos szárítás után 4,21 g 7-(imidazolil-(l)-acetilaminó)-cefalosporánsavat kapunk, csaknem színtelen por alakban. 10 Az anyag 131°-on megsárgul és 141-150° között olvad (bomlás közben, evakuált kapillárisban). \a\ 2° = *127° ±1° (vízben, c = 1). 15 Rf,, -- 0.03.Rf]0lA '- °-5

0. 1,97 g 7-(imidazoliMl) acetilamino) cefalosporánsavat lüU ml vízben okiunk, 37"-ra melegítünk és 57,5 ml 0,I-N nátronluggal pH = 7,5-re állítunk. Ezután hozzáadunk 50 mg 20 acetilézterázt (Bacillus subtilis ATCC 6633 ból nyerve, lásd az 1 080 904 sz. angol szabadalmi leírást) 2 ml vízben felkeverve és a felszavaduló ecetsavat 0,1-N nátronluggal automatikus titrálóval semlegesítjük (beállítás pH 7,3-ra). 4 óra múlva a reakciót befejezzük. ApH-t 6,5-re állítjuk be, 25 az oldatot G4 - es üvegszűrőn szűrjük és liofilizáljuk. így 2,62 g- 7 (imidazolü (1) acetilamino) 0-dezacetil- cefalosporánsav keletkezik sárgás gyanta alakban. Ezt a nyersterméket közvetlenül 22 ml abszolút dimetilformamid és 6.15 ml trietilamin elegyében felvesszük, 3,7 ml 30 0-klóretilizocianátot adunk hozzá és fél órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután az oldószert magas vákuumban eltávolítjuk és a gyantás barna maradékot többször 100-100 ml abszolút éterrel eldörzsöljük. Az éterben oldhatatlan maradékot 60 ml vízzel felvesszük, és kétszer 300-300 ml, 35 majd kétszer 15o-15o ml ecetészterrel extraháljuk. A szerves fázisokat kétszer 15-15 ml vízzel utánnamossuk A vizes fázist Sephadex-oszlopon szűrjük és vízzel utánnamossuk. E clra 2.1 cm átmérőjű és 9 cm magas, Sephadex CM 15-C vél (H -ciklusban) töltött oszlopot használunk. Az első 40 80 ml cluatum tartalmazza a melléktermek., i. A következő 150 ml eluátum a hatóanyag sárgás oldata. Az oldatot egy vékony „Celité" oszlopon szűrjük és liofilizáljuk. így 0,46 g igen nagy mértékben tisztított O-dezacetil-O- (<3-k!óretilkar-:

' bamoil)-7 (ünidazolil-(l)- acetilamino) cmlosporánsavat 45 kapunk terjedelmes porként. UV-spektrumban A.rnax~ot

mutat 254 nm-nél, e

= 8050 (vízben). Optikai forgatóképesség \a\^ = •154° ± 1° ( c = 0,83, vízben). Vékonyréteg—kromatográfiás vizsgálat során a következő Rf-értékeket adja: 101 A rendszerben: 0,3: 60 ecetészter-piridin-jégecet-víz (62:21:6:11) rendszerben 0,07. 2. példa 55 11,75 g 3-(dezacetoximetil)-3- benzoiltiometil-7 brómacetilaminó-cefalosporánsavat 45 ml dimetilformamidban oldunk, 5,25 g imidazol 12 ml dimctilformamidos oldatának hozzáadása közben. Az oldathoz 1,45 ml jégecetet 60 adunk és fény kizárása mellett szobahőmérsékleten állni hagyjuk. 23 óra múlva erős keverés és jeges vizes hűtés közben lassan 56 mll|12-N sósavat adunk hozzá. A barna ragadós csapadékot egy vékony Hyflo oszlopon szűrjük. A szürletet igen intenzív keverés és jéghűtés közben gyorsan 65 570 ml 1/12-N sósavval elegyítjük, majd egy óra hosszat tovább keverjük és hűtjük. A kapott 10.5 g pelyhes 3-(dezai.'etoximetil)-3-benzoiltiometil- -7-(tmidazolil (1) acetilamino) cefalosporánsav csapadékot leszivatjuk és 10 ml 'vízzel mossuk. Rf,, = 0,13; RfiOlA =0-^5 UV- spektrumban, 0,1 M nátnumbikarbonátoldatban/ \max

= 243 nm (e=14 200) '5 *max =

273 nm (e = 15 600). 2