161479. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glutaminsav és/vagy aszparaginsav- komponenseket tartalmazó polipeptidek szintézisére
4. lépés: Z-Ile-Ser-Leu-Leu-OMe előállítása 7 g (20 mmól) védett dipeptidhidrazidot (3. lépés) feloldunk 70 ml dimetilformamid és 10 ml 6 N sósav elegyében, majd —10°-ra hűtve 5 hozzáadunk 4 ml 5 M nátrium-nitrit oldatot. A keletkezett azid kiválik. Ezután a reakcióelegyet lúgosítjuk 8,4 ml (60 mmól) trietilaminnal, majd hozzáadunk 5,88 g (20 mmól) dipepüdészter-klórhidrátot (1. lépés) és 2,8 ml (20 mmól) 1° trietilamint 30 ml dimetilformamidos szuszpenzióban. A reakcióelegyet éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Másnap bepároljuk, vízzel alaposan eldörzsöljük, szűrjük, vízzel, citrom- 15 savoldattal és ismét vízzel mossuk, szárítjuk. Szárítás után acetonban szuszpendáljuk és kifőzzük, majd ä szuszpenziót szűrjük, acetonnal mossuk és szárítjuk. 6,1 g (52%) védett tetrapeptidésztert nyerünk. Op.: 199—202°, R* 0,68— 20 0,72. [a]2g —18,19° (c=l, dimetilformamidban). Analízisa: C30 H 48 O 8 N 4 (M: 592,716) képlet alapján: 25 Számított: C: 60,78%, H: 8,16%, N: 9,45%. Talált: C: 60,80%, H: 8,20%, N: 9,42%. 5. lépés: Z-Arg-Ile-Ser-Leu-Leu-OMe előállítása „„ 5,92 g (10 mmól) védett tetrapeptidésztert 60 ml metanolban hidrogénezünk csontszenes palládium jelenlétében. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk és a maradékot éterrel kristályosítjuk. 4,2 g (91%) sza- 35 bad tetrapeptidésztert kapunk. Op.: 169—171°, Rsf 0,18—0,22. Analízisa: C22 H 42 0 6 N 4 (M: 458,588) képlet alapján: 40 Számított: C: 57,61%, H: 9,23%, N: 12,20%. Talált: C: 57,58%, H: 9,60%, N: 12,20%. A fenti anyagból 3,8 g-ot (8,2 mmól) felöl- 45 dunk 15 ml dimetilformamidban és —10°-ra hűtve az alábbi vegyesanhidridet adjuk hozzá: 3.44 g (10 mmól) karbobenzoxi-arginin-klórhidrátot feloldunk 10 ml dimetilformamidban, majd —10°-on hozzáadunk 1,32 ml (10 mmól) 50 klórszénsav-izobutilésztert, s ezt követően 1,1 ml (10 mmól) N-metil-morfolint. A reakcióelegyet kb. 8 perc keverés után adjuk a fenti aminő-komponens oldatához. Az egyesített oldatot, ill. szuszpenziót éjszakán át állni hagyjuk, majd 55 bepároljuk és a párlási maradékot eldörzsöljük 1 N sósavval és etilacetáttal. Az ilyen módon kapott géles anyagot alaposan szárítjuk exikkátorban nátrium-hidroxid és foszfor-pentoxid mellett. 5,5 g (86%) anyagot kapunk. Op.: 176— 60 179°, R2 0,52—0,56. [a]2° —17,49° (c=l, dimetilformamidban). Analízisa: C36 H 61 0 9 N 8 C1 (M: 785,369) képlet alapján: 65 34 Számított: C: 55,05%, H: 7,82%, N: 14,27%, Cl: 4,51%. Talált: C: 55,00%, H: 7,85%, N: 14,30%, Cl: 4,65%. 6. lépés: ZN-Met-Leu-OMe előállítása 5,09 g (10 mmól) p-nitro-benziloxikarbonil-metionin diciklohexilammónium sót szuszpendálunk 20 ml dimetilformamidban és —10°-on előbb 0,11 ml (1 mmól) N-metil-morfolint, majd 1,32 ml (10 mmól) klórszénsav-izobuíilésztert adunk hozzá. Tizenöt perc keverés után a vegyesanhidridhez adunk 1,81 g (10 mmól) leucin-metilészter-klórhidrátot és 1,4 ml (10 mmól) trietilamint 20 ml dimetilformamidban oldva, illetve szuszpendálva. A reakcióelegyet egy órán át hűtés mellett keverjük, majd éjszakán át állni hagyjuk. Bepárlás után a maradékot etilacetát-vízben feloldjuk és az etilacetátois oldatot mossuk vízzel, 0,1 N sósavval, vízzel, 5%-os nátrium-bikarbonátoldattal, vízzel, ezután szárítjuk és bepároljuk. A védett dipeptidésztert éterpetroléterből kristályosítjuk. 3,53 g (78%) anyagot kapunk. Op.: 78—81°, R 4 . 0,90—0,95. Analízisa: C20 H 29 O 7 N 3 S (M: 455,528) képlet alapján: Számított: C: 52,80%, H: 6,42%, O: 24,35%, N: 9,22%, S: 7,04%. Talált: C: 52,70%, H: 6,60%, O: 24,50%, N: 9,23%, S: 7,02%. 7. lépés: ZN-Met-Leu-NHNH2 előállítása 4,55 g (10 mmól) védett dipeptidésztert (6. lépés) 10 ml meleg metanolban feloldunk, majd 1,39 g (20 mmól) 72%-os hidrazin-hidrátot adva hozzá éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A kivált hidrazidot szűrjük, metanollal, éterrel és vízzel mossuk, szárítjuk. 4,28 g (94%) anyagot kapunk. Op.: 187—190°, R* 0,80—0,85. Analízisa: C19 H 29 0 6 N 5 S (M: 455,534) képlet alapján: Számított: C: 50,10%, H: 6,42%, O: 21,05%, N: 15,34%, S: 7,04%. Talált: C: 50,09%, H: 6,70%, O: 21,16%, N: 15,24%, S: 7,02%. 8. lépés: ZN-Met-Leu-Arg-Ile-Ser-Leu-Leu-OMe-HCl előállítása 3,54 g (4,5 mmól) védett pentapeptidészterklórhidrátot (5. lépés) feloldunk 60 ml dimetilformamidban és hidrogenolizáljuk csontszenes palládium jelenlétében. A dekarbobenzoxilezés végén (Rj.0,15—0,22) a dimetilformamid oldatot betöményítjük kb. 10 ml-re, majd az alábbi azidoldathoz öntjük —10° hőmérsékleten: 2,3 g (5 mmól) védett dipeptidhidrazidot (7. lépés) oldunk 20 ml dimetilformamidban, mely 2,5 ml 6 N sósavat is tartalmaz. Miután —10°-ra 17
