161479. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glutaminsav és/vagy aszparaginsav- komponenseket tartalmazó polipeptidek szintézisére
35 hűtöttük az oldatot, 1 ml 5 M nátrium-nitritoldatot adunk hozzá. Az azid kialakulása után az oldatot 2,1 ml (15 mmól) trietilaminnal lúgosítjuk, s az amin-komponens fenti dimetilformamidos oldatával egyesítjük. A reakcióelegyet egy órán át —10° körüli hőmérsékleten keverjük, majd szobahőmérsékleten éjszakán át állni hagyjuk. Bepárlás után a maradékot vízzel eldörzsöljük, szűrjük, vízzel, majd szárítás után etilacetáttal, s végül acetonnal mossuk. 3,9 g (80%) anyagot kapunk. Op.: 231—233° (bomlik), R 2 0,50—0,55. Analízisa: C47 H 80 O 13 N u SCl (M: 1074,721) képlet alapján: Számított: C: 52,52%, H: 7,50%, N: 14,32%, S: 2,98%, Cl: 3,29%. Talált: C: 52,48%, H: 7,60%, N: 14,31%, S: 2,96%, Cl: 3,25%. 9. lépés: ZN-Met-Leu-Arg-Ile-Ser-Leu-Leu--NHNH2 előállítása 3,22 g (3 mmól) védett heptapeptidészter-klórhidrátot (8. lépés) feloldunk 15 ml dimetilformamidban és 1,05 ml (21 mmól) hidrazin-hidrátot adva hozzá szobahőmérsékleten állni hagyjuk éjszakán át. A keletkező géles anyagot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éterrel, vízzel, 0,1 N sósavval, majd ismét vízzel s végül etanollal mossuk és szárítjuk. 3,0 g (91%) anyagot kapunk. Op.: 206—207° (bomlik), Rj 0,43—0,46. Analízisa: C/l0 H 80 O 12 N 13 SCl (M: 1074,727) képlet alapján: Számított: C: 51,4%; H: 7,50%, N: 16,95%. Talált: C: 51,2%,, H: 7,60%, N: 16,90%. 10. példa: ZN-Leu-Ser-Arg-Leu-Phe-Asp-Asn-Ala-NHNH2 előállítása 1. lépés: Z-Asn-Ala-NHNH-BOC előállítása 4,45 g (10 mmól) karbobenzoxi-aszparagin-2,4,5-triklór-fenilésztert feloldunk 30 ml dimetilformamidban keverés mellett, majd hozzáadunk 10 mmól H-Ala-NHNH-BOC-t (6. példa 1. lépés) és az oldatot éjszakán át állni hagyjuk szobahőmérsékleten. Másnap az oldatot bepároljuk, a maradékot éterrel kristályosítjuk, szűrjük, éterrel és vízzel mossuk, végül szárítjuk. 4,35 g (96%) nyersterméket kapunk, melyet 130 ml etanolból átkristályosítunk. 3,48 g (77%) védett diDeptid-származékot kapunk. Op.: 193— 195° (bomlik). RS 0,3—0,4. [a]2% —15,8° (c=l, dimetilformamidban). Analízisa: C20 H 2!J O 7 N 5 • 0,5 H2 0 (M: 460,498) képlet alapján: Számított: C: 52,03%, H: 6,57%, O: 26,05%, N: 15,20%. Talált: C: 52,03%, H: 6,70%, O: 26,00% N: 15,13%. 36 2. lépés: Z-Asp(OBZL)-Asn-Ala-NHNH-BOC előállítása 3,48 g (7,7 mmól) védett dipeptid-származékot 5 (1. lépés) 80 ml metanolban hidrogénezünk csontszenes palládium jelenlétében. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk és éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éterrel mossuk. 2,22 g (90,5%) szabad vegyületet ka-10 punk. 2,5 g (7 mmól) karbobenzoxi-/J-benzil-aszpa~ raginsavat feloldunk 7 ml dimetilformamidban, hozzáadunk 0,77 ml (7 mmól) N-metil-morfolint, majd —10°-ra hűtve 0,925 ml (7 mmól) 15 klórszénsav-izobutilésztert. Tíz perc keverés után a fenti amino-komponens 7 ml dimetilformamidos oldatát adjuk a vegyesanhidridhez. A reakcióelegyet 1 órán át hűtés mellett, 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd éjszakán 20 át állni hagyjuk. Másnap a kivált sókat kiszűrjük, az oldatot bepároljuk és a maradékot éterrel eldörzsöljük, éterrel és vízzel mossuk, szárítjuk. 4,43 g (95%j) védett tripeptid-származékot kapunk. Op.: 190° (bomlik). R4 f 0,6—0,7; R*. 25 0,25—0,35. [a] —16,5° (c=l, dimetilformamidban). Analízisa: C3:1 H /l0 O 10 N fi (M: 653,693) képlet alapján: 30 Számított: C:56,69%, H: 6,13%, N: 12,79%. Talált: C: 56,52%, H: 6,07%, N: 12,75%,. 3. lépés: Z-Arg-Leu-Phe-NHNH2 -HCl előállí-35 tása 4,26 g (10 mmól) Z-Leu-Phe-OMe-t [B. F. Erlanger: J. Am. Chem. Soc. 76, 1806 (1954)] és 0,9 g (10 mmól) vízmentes oxálsavat 30 ml metanoi-40 ban feloldunk és csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezünk. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk és a . maradékot éterrel kristályosítjuk, szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. 3,44 g (90%) szabad di-45 peptidészter-oxalátot nyerünk. 3,1 g (9 mmól) karbobenzoxi-arginin-hidrokloridot feloldunk 9 ml dimetilformamidban, hozzáadunk —10°-on 1,19 ml (9 mmól) klórszénsav-izobutilésztert, majd 0,99 ml (9 mmól) N-50 -metil-morfolint. A reakcióelegyet —5° körüli hőmérsékleten 10 percig keverjük, majd —15°on hozzácsurgatjuk a fenti dipeptid-oxalát és 2,52 ml (18 mmól) trietilamin 9 ml dimetilformamidos oldatát, illetve szuszpenzióját. Egy órán 55 át hűtés mellett, 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük a reakcióelegyet, majd éjszakán át állni hagyjuk. Másnap a kivált sókat kiszűrjük, az oldatot bepároljuk. A maradékot feloldjuk etilacetát-vízben. Az etilacetátos fázist mossuk 1 N 6Q citromsavoldattal, vízzel, 5%-os nátrium-bikarbónátoldattal, vízzel, majd megszárítjuk és bepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük és szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. 4,45 g nyers tripeptidészter-klórhidrátot kapunk. R^ 65 0,30—0,35 és szennyezések: 0,22—0,25, illetve 18
