161479. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glutaminsav és/vagy aszparaginsav- komponenseket tartalmazó polipeptidek szintézisére
31 jük di-izopfopiléterrel, szűrjük, di-izopropiléterrel mossuk, szárítjuk, majd 10 ml víz és 20 ml etanol elegyével 10 percig forraljuk. A szuszpenzió lehűtése után szűrjük, vizes etanollal, majd éterrel mossuk és szárítjuk. 2,4 g (62%) védett pentapeptidet kapunk. Op.: 223—227° (bomlik), R4 0,45—0,55. Analízisa: C^H^O^Ng (M: 894,016) képlet alapján: Számított: C: 59,11%, H: 7,11%, N: 14,09%. Talált: C: 59,00%, H: 7,60%, N: 14,10%. 4. lépés: ZN-Leu-Ile-Gln-Ser-Trp-Leu-NHNH-BOC előállítása 2,4 g (3,8 mmól) védett pentapeptid-származékot (3. lépés) 100 ml metanolban hidrogénezünk csontszenes palládium mellett. A reakció végén (R* 0,1—0,2) a katalizátort kiszűrjük és az oldatot bepároljuk, majd a maradékot 20 ml dimetilformamidban oldva az alábbi vegyesanhidrid oldathoz adjuk. 1,87 g (3,8 mmól) p-nitrobenziloxikarbonil-leucin diciklohexilammónium sót szuszpendálunk 15 ml kloroformban, majd 0,04 ml (0,38 mmól) N-metil-morfolin és 0,456 ml (3,8 mmól) klórszénsav-izobutilészter hozzáadása után —10°-on keverjük negyed órán keresztül. Ezután adjuk hozzá a fenti amino-komponens oldatát. A reakcióelegyet keverjük hűtés mellett, majd szobahőmérsékleten 1—1 órán át, végül éjszakán át állni hagyjuk. Másnap a szuszpenziót bepároljuk, a maradékot 100 ml 1 N citromsav oldattal eldörzsöljük, szűrjük, citromsavval, vízzel, 5%-os nátrium-bikarbonátoldattal, vízzel, s végül éterrel mossuk, szárítjuk. 2,85 g (71%) anyagot kapunk. Op.: 222—224°, R4 0,4—0,5; Rj. 0,08—0,12. Analízisa: C^H^O^r^! (M: 1052,172) képlet alapján: Számított: C: 57,09%, H: 6,99%, N: 14,65%. Talált: C: 57,00%, H: 7,00%, N: 14,64%. 5. lépés: ZN-Leu-Ile-Gln-Ser-Trp-Leu-NHNH2 előállítása 2,75 g (2,61 mmól) hexapeptid-származékot (4. lépés) 15 ml trifluorecetsavban oldunk. A trifluorecetsav kevés merkaptoetanolt és anizolt is tartalmaz. Fél óra után az oldatot éterrel hígítjuk, a kivált csapadékot szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. A nyersterméket dimetilformamidban. feloldjuk, piridinnel semlegesítjük, majd az anyagot vízzel kicsapjuk, szűrjük, vízzel mossuk és szárítjuk. 1,44 g (58%) védett hexapeptidhidrazidot kapunk. Op.: 233—235°. Analízisa: C4 5H 63 0 12 N 11 (H: 952,058) képlet alapján; Számított: C:56,76%, H: 6,88%, N: 16,28%. Talált: C: 56,66%, H: 6,94%, N: 16,23%. 32 9. példa: ZN—Met-Leu-Arg-Ile-Ser-Leu-Leu--NHNH2 előállítása 1. lépés: H-Leu-Leu-OMe• HCl előállítása 5 12,2 g (33,8 mmól) védett dipeptidésztert [M. Brenner, C. H. Bruckhardt: Helv. Chim. Acta 34, 1070 (1951)] 100 ml ekvivalens sósavat tartalmazó metanolban hidrogénezünk csontszenes palládium mellett. A reakció végén a katalizáló tort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk, s éterből kristályosítjuk. 8,7 g (87%) anyagot kapunk. Óp.: 167—170°, Rj 0,68—0,73. Analízisa: C13 H 27 0 3 N 2 C1 (M: 294,819) képlet 15 alapján: Számított: C: 52,95%, H: 9,23%, N: 9,50%, Cl.: 12,02%. Talált: C: 52,99%, H: 9,28%, N: 9,57%, 20 .Cl: 12,00%. 2. lépés: Z-Ile-Ser-OMe előállítása 22,3 g (50 mmól) karbobenzoxi-izoleucin diciklohexil-ammónium sót feloldunk 100 ml klo-25 roformban, hozzáadunk 0,55 ml (5 mmól) N-metil-morfolint, majd —10°-ra hűtve 6,6 ml (50 mmól) klórszénsav-izobutilésztert. Tíz perc után a kialakult vegyesanhidridhez öntjük 7,75 g (50 mmól) szerinmetilészter-klórhidrát és 7,0 ml (50 30 mmól) trietilamin 50 ml tetrahidrofurános szuszpenzióját. Egy órán át —10° körüli hőmérsékleten keverjük, majd éjszakán át állni hagyjuk szobahőmérsékleten. Másnap a kivált diciklohexilammónium-kloridot kiszűrjük, az ol-35 datot bepároljuk és etilacetát-vízben feloldjuk. Az eilacetát-oldatot mossuk 0,5 N kénsavval, vízzel, 5%-os nátrium-bikarbonátoldattal, vízzel, majd szárítás után bepároljuk. A maradékot ciklohexánból kristályosítjuk. 15,5 g (88,6%) vé-40 dett dipeptidésztert nyerünk. Op.: 173—175°, R^. 0,60—0,65, R4 f 0,76—0,82. Analízisa: C18 H 26 0 6 N 2 (M: 366,404) képlet alapján: 45 Számított: C: 59,00%, H: 7,15%, N: 7,65%. Talált: C: 58,95%, H: 7,20%, N: 7,65%. 3. lépés: Z-Ile-Ser-NHNH2 előállítása 50 12,6 g (36,3 mmól) védett dipeptidésztert (2. lépés) feloldunk 75 ml forró metanolban és 10 ml 72%-os hidrazid-hidrát hozzáadása után éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A 55 kivált kristályokat szűrjük, metanollal mossuk és szárítjuk. 11,65 g (92,5%) anyagot kapunk. Óp.: 208—211°, R4 0,17—0,22. Analízisa: C17 H 26 0 5 N 2 • 1/2 H 2 0 (M: 375,408) kép-60 let alapján: Számított: C: 54,38%, H: 7,25%, O: 23,44%, N: 14,92%. Talált: C: 54,40%, H: 7,35%, O: 23,50%, 65 N: 14,95%. 16
