161479. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glutaminsav és/vagy aszparaginsav- komponenseket tartalmazó polipeptidek szintézisére
25 Analízisa: C^H^C^Ng (M: 849,922) képlet alapján: Számított: C: 57,92%, H: 6,52%, N: 14,83%. Talált: C: 57,90%, H: 6,60%, N: 14,80%. 5 4. lépés: Z-Leu-His-Gln-Leu-Ala-NHNH-BOC előállítása 4,0 g (4,7 mmól) védett tetrapeptidet (3. lé- 10 pés) 0,85 g (9,4 mmól) vízmentes oxálsav jelenlétében 30 ml dimetilformamidban hidrogénezzük csontszenes palládium mellett. A reakció végén (R? 0,05—0,1) a katalizátort kiszűrjük, és az oldatot kb. 15 ml-re pároljuk be, majd 2 g 15 (5,18 mmól) karbobenzoxi-leucin-p-nitrofenilésztert és 2,7 ml (19,4 mmól) trietilamint adva hozzá állni hagyjuk szobahőmérsékleten egy éjszakán át. Másnap az oldatot bepároljuk, s étervízzel eldörzsöljük, éterrel és vízzel mossuk. Ez- 20 után mossuk kevés etanollal, majd végül vízzel. Szárítás után 2,75 g (71%) védett pentapeptidet kapunk. Op.: 191—194°, Rj 0,5—0,6. [a]2 °— 27,8° (c=l, dimetilformamidban). „. Analízisa: C39 H 60 O l0 N 10 (M: 828,950) képlet alapján : Számított: C: 56,50%, H: 7,29%, N: 16,88%. Talált: C: 56,40%, H: 7,30%, N: 16,80%. 30 5. lépés: Z-Arg-Leu-His-Gln-Leu-Ala-NHNH-BOC előállítása 2,75 g (331 mmól) védett pentapeptidet (4. lé- 35 pés) 20 ml dimetilformamidban hidrogénezünk csontszenes palládium jelenlétében. A reakció végén (Rj. 0,3—0,4; Rj 0,03—0,1) a katalizátort kiszűrjük, az oldatot kb. 5 ml-re bepároljuk, majd az alábbi vegyes anhidrid-oldatot adjuk 40 hozzá: 1,2 g (3,5 mmól) karbobenzoxi-arginin-klórhidrátot feloldunk 4 ml dimetilformamidban és —30°-ra hűtve hozzáadunk előbb 0,46 ml (3,45 45 mmól) klórszénsav-izobutilésztert, majd 0,38 ml (3,45 mmól) N-metil-morfolint. Az oldatot, illetve szuszpenziót 8 percig —10°-on keverjük. A vegyes anhidrid- és az amino-komponens oldatának egyesítése után a reakcióelegyet éjszakán 50 át állni hagyjuk szobahőmérsékleten, majd bepároljuk és konyhasó oldattal eldörzsöljük, szűrjük, konyhasó oldattal mossuk és alapos leszívatás után szárítjuk. A száraz anyagot forró acetonnal tovább mossuk. 2,7 g konyhasó tártai- 55 mú anyagot kapunk (kb. 70—75%). R2 f 0,22— 0,27. Op.: 180° (bomlik). 6. lépés: ZN-His-Arg-Leu-His-Gln-Leu-Ala-NHNH-BOC-HCl előállítása 60 2,85 g (kb. 2,15 mmól) védett hexapeptidet (5. lépés) 20 ml 95%-os vizes dimetilformamidban hidrogénezzük csontszenes palládium jelenlétében. A reakció végén (R2 f 0,05—0,15) a katalizá- 65 26 tort kiszűrjük és az oldatot kb. 4 ml-re betöményítjük, majd az alábbi azid oldatot adjuk hozzá —10°-on: 1,0 g (2,87 mmól) p-nitro-benziloxikarbonil-hisztidin-hidrazidot feloldunk 4 ml dimetilíormamid és 1,9 ml 6 N sósav elegyében, s—15°ra hűtjük. Az oldathoz 0,573 ml (2,87 mmól) 5 M nátrium-nitritoldatot adunk. Kb. 5 perc alatt kialakul az azid, ezután —30°-ra hűtjük és 1,5 ml (11,1 mmól) trietilamin hozzáadása után az amino-komponens dimetilf ormamid oldatához öntjük. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten éjszakán át állni hagyjuk, ezután bepároljuk, konyhasó-oldattal eldörzsöljük, szűrjük, konyhasó-oldattal, majd víz-etilacetáttal többször mossuk. Szárítás után 1,35 g (52%) anyagot kapunk. Op.: 191—197° (bomlik), R J. 0,5—0,6; R2 f 0,05—0,1. [a]2 ° — 19,9" (c=l, dimetilformamidban). Analízis a C51 H 79 0 14 N 18 C1 (M: 1213,793) képlet alapján: Számított: C: 50,88%, H: 6,61%, O: 18,68%, N: 20,94%, Cl: 2,94%. Talált: C: 50,80%, H: 6,65%, O: 18,70%, N: 20,90%, Cl: 2,96%. 7. példa: ZN-Glu-Pro-Val-Glu-Phe-Ala-N2H 3 előállítása 1. lépés: Z-Glu(OtBu)-Phe-Ala-OMe előállítása 3,84 g (10 mmól) Z-Phe-Ala-OMe-t [W. Grassmann, E. Wünsch, A. Riedel: Chem. Ber. 455 (1958)] 30 ml metanolban csontszenes palládium és 0,9 g (10 mmól) vízmentes oxálsav jelenlétében hidrogénezünk. A katalizátor kiszűrése után az oldószert lepároljuk. Az így kapott szilárd anyagot éterrel kristályosítjuk. 3,4 szabad dipeptidészter-oxalátot nyerünk. Op.: 160° (bomlik), R3. 0,2—0,25. 5,18 g (10 mmól) karbobenzoxi-^-terc.-butil-glutaminsav-diciklohexilammónium sót 20 ml tetrahidrofuránban szuszpendálunk. Hozzáadunk 0,11 ml (1 mmól) N-metil-morfolint, majd a reakcióelegyet —15°-ra hűtjük. 1,32 ml (10 mmól) klórszénsav-izobutilészter hozzáadása után a szuszpenziót —10°-on 15 percig keverjük. Ezután 3,4 g (10 mmól) H-Phe-Ala-OMe • (COOH)2 és 2,8 ml (20 mmól) trietilamin 10 ml dimetilformamidban készült oldatát csepegtetjük az előzőleg —20°-ra lehűtött reakcióelegyhez, majd —10°-on 1 órán át, majd szobahőmérsékletre felmelegítve 3 órán át keverjük. Éjszakán át állni hagyjuk. A kivált sókat kiszűrjük, az oldószert lepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, mossuk 3 vízzel, majd éterrel. Ötszörös mennyiségű etanol-vízből átkristályosítjuk. 5,0 g (88%) terméket kapunk. Op.: 134—136°, R9 f 0,4. [a] 2 ° —25,0° (c=l, dimetilformamidban). Analízis a C30 H 39 O 8 N 3 (M: 569,645) képlet alapján: 13
