161479. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glutaminsav és/vagy aszparaginsav- komponenseket tartalmazó polipeptidek szintézisére
161479 27 28 Számított: C: 63,30%, H: 6,90%, O: 22,50%, " 7,40%. 63,35%, H: 7,30%, O: 22,57%, Talált: Analízisa: C40 H 55 O 10 N 5 (M: 765,905) képlet alapján: Számított: C •" 5 N 2. lépés: Z-Val-Glu(OtBu)-Phe-Ala-OMe elő- Talált: C állítása 5,0 g (8,8 mmol) Z-Glu(OtBu)-Phe-Ala-OMe-t 100 ml metanolos szuszpenzióban 0,793 g (8,8 mmól) vízmentes oxálsav és csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezünk (a védett tripeptidészter a reakció végére feloldódik). A katalizátor kiszűrése után az oldószert lepároljuk. A maradékot éterrel kristályosítjuk, szűrjük, mossuk éterrel. 4,47 g tripeptidészter oxalátot nyerünk (Op.: 145—148° (bomlik), R} 0,4—0,5), melyet feloldunk 9 ml dimetilformamidban, majd hozzáadunk 2,38 ml (4,7 mmól) trietilamint és 3,16 g (8,5 mmól) karbobenzoxi-valin-p-nitrofenilésztert. Kb. 30 perces keverés után a reakcióelegy géllé alakul. Éjszakán át állni hagyjuk. Az oldószert ledesztilláljuk és a maradékot éterrel eldörzsöljük. Szűrjük, megmossuk vízzel, majd éterrel. A nyersterméket ötszörös mennyiségű etanollal kifőzzük, szűrjük és mossuk vízzel. 4,7 g (83%) terméket kapunk. Op.: 204—207°, R9f 0,45—0,55. [a] 2 ° —22,7° (c=l, dimetilformamidban) . N 63,00%, H: 7,25%, O: 20,80%, 9,15%. 62,26%, H: 7,66%, O: 20,78%, 9,19%. Analízisa: C^H^OgN,, (M: 668,788) képlet alapján: Számított: C N Talált: C N 63,40%, H: 7,28%, O: 21,2%, 8,38%. 63,03%, H: 7,50%, O: 21,1%, 8,57%. 3. lépés: előállítása Z-Pro-Val-Glu(OtBu)-Phe-Ala-OMe 4,7 g (7,05 mmól) Z-Val-Glu(OtBu)-Phe-Ala-OMe-t 100 ml metanolban szuszpendálunk és 0,635 g (7,05 mmól) vízmentes oxálsav és csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezünk. A reakció végén az oldat homogén. A katalizátor kiszűrése után az oldószert lepároljuk. A kivált tetrapeptidészter-oxalátot absz. éterrel kristályosítjuk. 4,19 g anyagot nyerünk. Op.: 154— 158° (bomlik), R j. 0,2—0,3. E terméket 7 ml piridinben feloldjuk, 1,88 ml (13,4 mmól) trietilamint és 2,48 g (6,7 mmól) karbobenzoxi-prolin-p-nitro-fenilésztert adunk hozzá. A homogén oldatot éjszakán át állni hagyjuk. Az oldószer desztillálása után az olajat etilacetát-vízben feloldjuk, az etilacetátos fázist vízzel, 1 N kálium-hidrogénkarbonátoldattal kirázzuk, majd vízzel semlegesre mossuk. Az etilacetátos oldatot szárítás után bepároljuk. A kivált anyagot éterrel kristályosítjuk. Szűrjük, mossuk éterrel. 4,72 g (92%) védett pentapeptidésztert kapunk. Op.: 185—189°, R9 f 0,8—0,9. [a}2 ° —36,88° (c=l, dimetilformamidban). 10 15 20 25 30 35 40 45 50 4. lépés: ZN-Glu(OtBu)-Pro-Val-Glu(OtBu)Phe-Ala-OMe előállítása 4,72 g (6,16 mmól) Z-Pro-Val-Glu(OtBu)-Phe-Ala-OMe-t 60 ml metanolban, 0,55 g (6,16 mmól) vízmentes oxálsav és csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezünk. A katalizátor kiszűrése után az oldószert bepároljuk. A szilárd maradékot éterrel kristályosítjuk. 4,35 g pentapeptidészteroxalátot nyerünk. Op.: 175— 178° (bomlik), Rj. 0,0. 3,41 g (6,05 mmól) p-nitro-benziloxikarbonil-/-terc.-butil-glutaminsav diciklohexilamin sót 18 ml tetrahidrof uránban szuszpendálunk. —15°-on 0,06 m (0,6 mmól) N-metil-morfolint, és 0,8 ml (6,05 mmól) klórszénsav-izobutilésztert csepegtetünk hozzá. 15 percig —10° körüli hőmérsékleten keverjük. Ezután —20°-ra lehűtjük, és 4,36 g (6,05 mmól) fenti szabad pentapeptidészter-oxalát és 1,69 ml (12,1 mmól) trietilamin 18 ml dimetilformamidban készült oldatát adjuk hozzá. —5°-on egy órán át, majd szobahőmérsékleten három órán át keverjük. Éjszakán át állni hagyjuk. A kivált sókat kiszűrjük, az oldószert csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot etilacetát-vízben feloldjuk. Az etilacetátos oldatot kimossuk még kétszer vízzel, háromszor 1 N citromsavoldattal, háromszor vízzel, háromszor 5%-os nátrium-bikarbonátoldattal, majd vízzel semlegesre. Az etilacetátos oldatot nátrium-szulfáton megszárítjuk, majd bepároljuk. A maradékot di-izopropiléterrel kristályosítjuk. Szűrjük, mossuk di-izopropiléterrel 4,7 g (78%) terméket kapunk. Op.: 85—90° (bomlik), Rj. 0,8—0,9. [a] —38,60° (c=l, dimetilformamidban). 55 60 65 20 D Analízisa: C49 H 6í> 0 15 N 7 (M: 996,125) képlet alapján: Számított: C N Talált: C N 5. lépés: előállítása 59,00%, H: 6,97%, O: 24,20%, '70-59,42%, H: 7,08%, O: 23,90%, 9,60%. ZN-Glu-Pro-Val-Glu-Phe-Ala-OMe 4,7 g (4,72 mmól) védett hexapeptidésztert 100%-os trifluorecetsavban rázogatás közben feloldunk, majd szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A sűrű, olajszerű oldatból absz. éterrel kicsapjuk a terméket. Jégszekrényben néhány órán át állni hagyjuk. Szűrjük, és alaposan megmossuk éterrel. 4,15 g anyagot kapunk. R* 0,4—0,5. A termék nem egységes, tartalmaz egy (RÍ 0,5—0,6) mellékterméket is. 14
