161479. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glutaminsav és/vagy aszparaginsav- komponenseket tartalmazó polipeptidek szintézisére
23 jük, szűrjük, éter-vízzel alaposan kimossuk. Szárítás után 1,5 g (72%) anyagot kapunk. R* 0,38—0,44. Analízisa: CgaH^O^ (M: 692,702) képlet alapján: Számított: C: 60,69%, H: 5,82%, N: 8,08%. . Talált: C: 60,40%, H: 5,98%, N: 8,05%. 5. lépés: Z-Phe-Asp-Thr-Tyr-NHNH2 előállítása 1,45 g (2,08 mmól) védett tetrapeptidésztert (4. lépés) feloldunk 2 ml dimetilformamidban, majd 0,45 ml (15 mmól) hidrazin-hidrát hozzáadása után 3 órán át állni hagyjuk. A reakcióelegyet ecetsavas vízzel eldörzsöljük, a kivált csapadékot szűrjük, vízzel mossuk és szárítjuk. 1,45 g (100%) védett tetrapeptidhidrazidot nyerünk. Op.: 180—181°. Analízis a C34 H /l0 O 10 N 6 (M: 692,708) képlet alapján: Számított: C: 58,94%, H: 5,82%, N: 12,13%. Talált: C: 58,80%, H: 5,90%, N: 12,18%. 6. példa: ZN-His-Arg-Leu-His-Gln-Leu-Ala-NH-NH-BOC előállítása 1. lépés: Z-Leu-Ala-NHNH-BOC előállítása 50 ml tetrahidrofuránban feloldunk 11,16 g (50 mmól) karbobenzoxi-alanint, majd —10°-ra hűtve hozzáadunk 5,55 ml (50 mmól) N-metil-morfolint és 6,6 ml (50 mmól) klórszénsav-izobutilésztert. Hűtés mellett keverjük 10 percig, majd hozzáadjuk 6,6 g (50 mmól) terc.-butil-karbazát 50 ml tetrahidrofurános oldatát. A reakcióelegy erősen habzik. Egy órán át hűtés mellett, 3 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd a reakcióelegyet kevés víz hozzáadása után (a kivált sók oldására) bepároljuk. A maradékot feloldjuk benzolban, mossuk előbb 0,5 N kénsavval, vízzel, 5%-os nátrium-bikarbonátoldattal, vízzel. Az oldatot szárítás után bepároljuk. A párlási maradékot feloldjuk 50 ml metanolban és csontszenes palládium jelenlétében hidrogenolizáljuk. A dekarbobenzoxilezett származékot (H-Ala-NHNH-BOC; R* 0,7—0,8) a katalizátor kiszűrése és bepárlás után oldjuk 50 ml tetrahidrofuránban (ha az anyag nem hidrálódott szennyezést is tartalmaz, a metanolos oldathoz ekvivalens sósavas metanolt adunk, s bepárlás után éterrel eldörzsöljük; a maradékot 50 ml kloroformban oldjuk és 7 ml (50 mmól) trietilamin hozzáadása után egyesítjük a vegyes anhidrid oldatával), s az alábbi vegyes anhidrid oldatához adjuk: 45 mmól toluolban oldott karbobenzoxi-leucinhoz —10°-on 4,95 ml (45 mmól) N-metil-morfolint, majd 5,95 ml (45 mmól) klórszénsav-izobutilésztert adunk. Tíz percig keverjük, majd a fenti alanin-származék tetrahidrofurános oldatát hozzácsurgatjuk. A reakcióelegyet tovább keverjük hűtés mellett 1 24 órán át, majd szobahőmérsékleten állni hagyjuk éjszakán át. A reakcióelegyből a tetrahidrofuránt (vagy kloroformot) vákuumban kidesztilláljuk és to-5 luolos vagy etilacetátos hígítás után mossuk 0,5 N kénsavval, vízzel, 5%-os nátrium-bikarbonátoldattal, vízzel, majd szárítjuk és bepároljuk. A párlási maradék etilacetát-petroléter (1:5) elegyből kristályosítható és átkristá-10 lyosítható. 15 g (75%) dipeptid-származékot kapunk. Op.: 143—145°. Rj 0,48—0,52. [a]2 ° — 57° (c=2, metanolban). Analízisa: C22 H 34 0 6 N 4 (M: 450,524) képlet alap-15 ján: Számított: C: 58,64%, H: 7,60%, N: 12,43%. Talált: C: 58,63%, H: 7,80%, N: 12,54%. 2. lépés: Z-Gln-Leu-Ala-NHNH-BOC előállí-20 tása 11,25 g (25 mmól) dipeptid-származékot (1. lépés) 100 ml metanolban csontszenes palládium jelenlétében hidrogenizálunk, majd a reakció 25 végén a katalizátort kiszűrjük, a metanol-oldatot bepároljuk, a metanol nyomokat benzol ledesztillálásával elűzzük. A maradékot oldjuk 30 ml dimetilformamidban és 11,5 g (25 mmól) karbobenzoxi-glutamin-2,4,5-triklórfenüésztert, 30 valamint 3,5 ml (25 mmól) trietilamint adunk hozzá. A reakcióelegyet éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk (géllé alakul). Másnap a géles anyagot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éterrel alaposan kimossuk, szárítjuk. 12,8 35 g (89%) tripeptid-származékot kapunk. Op.: 206—210°, Rj 0,2—0,3. [a]2 ^ —30,9° (c=l, dimetilformamidban) . Analízisa: C27 H 42 O g N 6 (M: 578,654) képlet alap-40 ján: Számított: C: 56,03%, H: 7,31%, N: 14,52%. Talált: C: 55,95%, H: 7,45%, N: 14,50%. 45 3. lépés: Z-His(Z)-Gln-Leu-Ala-NHNH-BOC előállítása 8,7 g (15 mmól) védett tripeptidet (2. lépés) 1,35 g (15 mmól) vízmentes oxálsav jelenlétében 50 100 ml dimetilformamidban hidrogénezünk csontszenes palládium mellett. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük és az oldatot betöményítjük kb. 30 ml-re. Ezután 9,4 g (16 mmól) dikarbobenzoxi-hisztidin-2,4,5-triklórfenilésztert 55 (dikarbobenzoxi-hisztidin-metanolát és 2,4,5--triklórfenol DCC kondenzációjával készül, etanolos kristályosítás után op.: 108—110°) adunk hozzá, majd oldódás után az észter-bázist 4,2 ml (30 mmól) trietilaminnal szabadítjuk fel oxál-60 savas sójából. Éjszakai állás után a dimetilformamidot ledesztilláljuk, a maradékot eldörzsöljük éterrel, szűrjük, éterrel, majd vízzel mossuk és szárítjuk. 9,42 g (74%) anyagot kapunk. Op.: 158—161°, R4 0,5—0,6. [af° —18,5° (c=l, 65 dimetilformamidban). 12
