161479. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glutaminsav és/vagy aszparaginsav- komponenseket tartalmazó polipeptidek szintézisére
21 222—225°, RS 0,95—0,98, [af° —21,1" (c=l, dimetilf ormamid). Analízisa: C57 H 84 0 17 N tí (M: 1125,290) képlet alapján: 5 Számított: C: 60,80%, H: 7,50%, N: 7,50%, O: 24,20%. Talált: C: 60,80%, H: 7,50%, N: 7,70%, O: 24,00%. 10 10. lépés: Z-Glu-Glu-Phe-Glu-Glu-Ala-N2H 3 előállítása 12,3 g (11 mmol) védett hexapeptidésztert (9. 15 lépés) 30 ml trifluorecetsavban oldunk és egy órán át állni hagyjuk szobahőmérsékleten, majd éterrel (kb. 200 ml) kicsapjuk, szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk (Rf 0,17—0,27). Ezt követően az anyagot feloldjuk 22 ml metanolban és 20 5,5 ml (kb. 77 mmól) 72%-os vizes hidrazinhidrátot adva hozzá éjszakán át állni hagyjuk. Az oldatot 22 ml metanollal hígítjuk és kénsavval (1 N) vagy trifluorecetsavval semlegesítjük a hidrazin felesleget. A kivált anyagot kiszűr- 25 jük, sok vízzel mossuk és szárítjuk. 8,65 g (87%) védett hexapeptidhidrazidot nyerünk. Op.: 211—212°, R2 0,16—0,26. Analízisa: C/l0 H 52 O 16 N 8 (M: 900,880) képlet alap- 30 ján: Számított: C: 53,26%, H: 5,83%, N: 12,43%. Talált: C: 53,25%, H: 5,90%, N: 14,60%. 5. példa: Z-Phe-Asp-Thr-Tyr-NHNH2 előállí- 35 tása 1. lépés: H-Thr-Tyr-OMe• HCl előállítása 12,9 g (30 mmól) karbobenzoxi-treonin dicik- 40 lohexilammónium sót feloldunk 60 ml kloroformban és hozzáadunk 0,33 ml (3 mmól) N-metil-morfolint, valamint —10°-on 3,96 ml (30 mmól) klórszénsav-izobutilésztert. Tíz perc keverés után a reakcioelegyhez adunk 6,0 g (30,77 45 mmól) tirozinmetilésztert, s a szuszpenziót egy órán át keverjük —10° körüli hőmérsékleten, majd éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Másnap a kivált sókat kiszűrjük, az oldatot bepároljuk, feloldjuk etilacetátban, mossuk 0,5 50 N kénsavval, vízzel, 5%-os nátrium-bikarbonátoldattal, vízzel, végül szárítjuk és bepároljuk. A maradék a védett dipeptidészter (Rj! 0,85—0,88) olaj, amit feloldunk ekvivalens sósavat tartalmazó 150 ml metanolban és csontszenes pallá- 55 dium jelenlétében hidrogénezzük. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk, benzol-etanol elegyben újra oldjuk és ismét bepároljuk, majd etilacetáttal kristályosítjuk. Szűrés, etilacetátos mosás és szárítás után 60 8,8 g (87%) anyagot kapunk. Op.: 163—167°, R* 0,2—0,3. Analízisa: C14 H 21 0 5 N 2 CM,5 H 2 0 (M: 359,805) képlet alapján: 65 22 Számított: C: 46,70%, H: 6,70%, O: 28,90%, N: 7,80%, Cl: 9,90%. Talált: C: 46,72%, H: 6,70%, O: 28,65%, N: 7,82%, Cl: 9,90%. 2. lépés: Z-Asp(OtBu)-Thr-Tyr-OMe előállítása 3,64 g (10 mmól) karbobenzoxi-^-terc.-butilaszparaginsav-p-nitrofenilésztert (vagy 5,7 g megfelelő pentaklórfenilésztert) és 3,32 g (10 mmól) dipeptidészter-klórhidrátot (1. lépés) feloldunk 1,4 ml (10 mmól) trietilamint tartalmazó 10 ml piridinben keverés közben. A reakcióelegyet éjszakán át állni hagyjuk, majd bepároljuk. A maradékot éter-vízzel eldörzsöljük, szűrjük, éter-vízzel alaposan kimossuk és szárítjuk. Végül 60 ml metanol és 120 ml víz elegyéből átkristályosítjuk. 3,75 g (62,5%) anyagot kapunk. Op.: 170—172°, Rj 0,55—0,60. Analízisa: C30 H 39 O 10 N 3 (M: 601,636) képlet alapján: Számított: C: 59,88%, H: 6,53%, O: 26,59%, N: 6,98%. Talált: C: 59,89%, H: 6,79%, O: 26,54%, N: 6,98%. 3. lépés: H-Asp-Thr-Tyr-OMe előállítása 4,2 g (6,9 mmól) védett tripeptidésztert (2. lépés) 10 ml trifluorecetsavban feloldunk és fél órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az oldatból a keletkezett anyagot 2 ml víz és kb. 50 ml éter segítségével kicsapjuk. A kivált kristályos anyagot leszűrjük, vizes éterrel alaposan mossuk és szárítjuk. 3,2 g (85%) terméket ká^ punk. Op.: 168—170°, Rj5 0,32—0,38. A fenti anyagot 40 ml ecetsavban hidrogénezzük csontszenes palládium jelenlétében. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk és a maradékot 2 ml víz, 10 ml metanol segítségével kristályosítjuk, szűrjük, metanollal és éterrel mossuk. Szárítás után 1,6 g (68%) anyagot kapunk. Op.: 196—198°, R* 0,05— 0,15. Analízisa: C18 H 25 0 8 N 3 (M: 411,404) képlet alapján: Számított: C: 52,54%, H: 6,12%, O: 31,11%, N: 10,21%. Talált: C: 52,55%, H: 6,59%, O: 31,32%, •N: 10,38%. 4. lépés: Z-Phe-Asp-Thr-Tyr-OMe előállítása 1,24 g (3 mmól) szabad tripeptidésztert (3. lépés) és 1,5 g (3,6 mmól) karbobenzoxi-fenilalanin-p-nitrofenilésztert szuszpendálunk, illetve oldunk 10 ml dimetil-formamidban, majd 0,33 ml (3 mmól) N-metil-morfolin hozzáadása után keverjük a reakcióelegyet oldódásig. Az oldatot éjszakán át állni hagyjuk, majd bepároljuk és a maradékot 0,1 N sósavval és éterrel eldörzsöl-11
