161475. lajstromszámú szabadalom • Eljárás bradikinin szintézisére
7 mmol) trietilamint. A keletkezett szuszpenziót 12 órán át keverjük, a fel nem oldódott aktív észtert kiszűrjük, és dimetilformamiddal való mosás után a dimetilformamidos oldatokat egyesítve vákuumban bepároljuk (4—6 torr, 5 fürdőhőmérséklet max. 50°). A maradékot 50 ml etilacetátban feloldjuk és 3x10 ml 1 N citromsav-oldattal, 2x10 ml vízzel mossuk, szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A maradékot éterrel porrá dörzsöljük. 4,24 g (60%) védett 10 tripeptidésztert kapunk. R^ 0,8. BOC-Gly-Phe-Sér-OMe (VIII) előállítása 250 ml-es hidráló lombikban feloldunk 13 g (35 mmol) Z-Phe-Ser-OMe-t [VI, R. A. Boissannas et al., Helv. Chim. Acta 43, 1349 (I960)] 180 5 ml metanolban, hozzáadunk 1 g csontszénes palládiumot (semleges, metanollal mosott) és hidrogénezzük. A hidrogenolízist etilacetát-piridin-ecetsav-víz (60 : 7,5 : 1,5 : 2,75) rendszerben végzett kromatográfiával követjük. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, metanollal mossuk és a metanol-oldathoz 5,55 g (35 mmól) BOC-Gly-OH-t (VII) adva bepároljuk. A bepárlá'si maradékot 70 ml dimetilformamidban feloldjuk, majd 0°-ra hűtve hozzáadunk 7,2 g (35 mmól) DCC-t. Egy órán át 0°-on, majd éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk a reakcióelegyet. A kivált DCU-t kiszűrjük, a dimetilformamid-oldatot bepároljuk vákuumban a szokott módon (4—6 torr, fürdőhőmérséklet max. 50°). A maradékot éterrel eldörzsöljük, az amorf anyagot szűrjük, éterrel mossuk, szárítjuk. A nyersterméket 120 ml etanolból kristályosítjuk. 10,64 g (75%) védett tripeptidésztert kapunk. Op.: 167—169°. Rj 0,15. 35 BOC-Gly-Phe-Ser-N2 H 3 (IX) előállítása 250 ml-es gömblombikban feloldunk 10,2 g (25 mmól) védett tripeptidésztert (VIII) 100 ml metanolban és hozzáadunk 4,5 ml (50 mmól) 40 hidrazin-hidrátot. Az oldatot éjszakán át állni hagyjuk, majd a metanolt vákuumban ledesztilláljuk és a maradékot éterrel kristályosítjuk. 9,5 g (89%) védett tripeptidhidrazidot kapunk. Op.: 159—161°. Rj. 0,0, R< 0,6. 45 BOC-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg(N02 )-ONB (X) előállítása Kalcium-kloridos-csővel ellátott 100 ml-es lombikban 4,07 g (5,8 mmól) BOC-Pro-Phe- 50 -Arg(N02 )-ONB-t (V) leöntünk 10 ml trifluorecetsavval és 15 percig rázogatjuk, majd kb. 50 ml éterrel kicsapjuk a peptid-trifluoracetátot. Az anyagot szűrjük, éterrel mossuk és káliumhidroxid és kénsav mellett szárítjuk. 55 Keverővel ellátott lombikban feloldunk 2,36 g (5,8 mmól) BOC-Gly-Phe-Ser-N2 H 3 -t (IX) 12 ml dimetilformamidban, majd —30°-ra hűtve keverés közben 4 ml 1:1 arányú dimetilformamid-6 N sósav elegyet csepegtetünk hozzá. Ez- 60 után 1,18 ml 5 mólos nátrium-nitrit-oldatot adunk a hidrazidhoz —30°-on, majd 10 percig keverjük —10°-on. Visszahűtve —30°-ra becsepegtetünk 2,8 ml (20 mmól) trietilamint, valamint ezen a hőmérsékleten a fent elkészített 65 8 tripeptidészter-trifluoracetát 11 ml dimetilformamiddal készült oldatát. Végül a reakcióelegyet keverjük 1 órán át hűtés közben, majd éjszakán át állni hagyjuk. Ezután a dimetilformamidot ledesztilláljuk, a maradékot feloldjuk 50 ml etilacetátban, mossuk citromsavval, vízzel, 10%os nátrium-karbonát-oldattal, vízzel, és bepároljuk. A bepárlási maradékot feloldjuk 4—6 ml etilacetát-piridin-ecetsav-víz (60:5:1,5:2,75) elegyben, majd szilikagél oszlopra visszük. Az oszlop 2,2x70 cm-es, 60 g szilikagélből készült etilacetáttal. Az anyag felvitele előtt az említett elegy 10 ml-ét beszívatjuk. Az eluálást a fenti eleggyel végezzük, a frakciókat vékonyrétegkromatográfiával vizsgáljuk. A védett hexapeptidet tisztán tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, bepároljuk, éterrel eldörzsöljük. Szárítás után 3 g (53%) anyagot kapunk. Z-Arg(N02 )-Pro-Pro-OH (XVI) előállítása Kalcium-kloridos-csővel és keverővel ellátott 100 ml-es gömblombikban feloldunk 6 g (10 mmól) Z-Arg(N02 )-OPCP-t (XV, J. Kovács: Chem. and Ind. 1965, 2100) 10 ml dimetilformamidban, hozzáadunk 2,12 g (10 mmól) H-Pro-Pro-OH-t [XIV, N. C. Davis, E. L. Smith: J. Biol. Chem. 200, 373 (1953)] és 1,4 ml (10 mmól) trietilamint. A reakcióelegyet éjszakán át keverjük, majd a kapott oldatot vákuumban bepároljuk. A maradékot 10 ml víz — 10 ml éterben oldjuk. Az éteres rész elválasztása után a vizes oldatot 2x10 ml éterrel mossuk, majd savanyítjuk 1 N sósavval. A kivált olajat 3x20 ml etilacetátba átrázzuk, az egyesített etilacetátos részeket egyszer vízzel mossuk, szárítjuk (magnézium-szulfát) és vákuumban bepároljuk. A bepárlási maradékot éterrel eldörzsöljük. 3,6 g (66%) védett tripeptidet kapunk. R£ 0,15. Z-Arg(N02 )-Pro-Pro-OPCP (XVII) előállítása Kalcium-kloridos-csővel ellátott 50 ml-es lombikban feloldunk 2,2 g (4 mmól) Z-Arg(N02 )-Pro-Pro-OH-t (XVI) és 1,18 g (4,4 mmól) pentaklórfenolt 10 ml metilénkloridban, majd 0°-ra való hűtés után hozzáadunk 0,92 g (4,4 mmól) DCC-t. Egy órán át jeges vízben hűtjük, majd éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A kivált DCU kiszűrése (és metilénkloridos mosása) után a metilénklorid-oldatot vákuumban bepároljuk, a maradékot éterrel porrá dörzsöljük. Az anyagot szűrjük, éterrel mossuk és megszárítjuk. 2,0 g (63%) aktív észtert kapunk. R^. 0,1. Z-Arg(N02 )-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg(N02 )-ONB (XVIII, védett bradikinin) előállítása Kalcium-kloridos-csővel ellátott 100 ml-es lombikban 2,65 g (2,7 mmól) BOC-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg(N02 )-ONB-t (X) leöntünk kb. 15 ml trifluorecetsavval és 15 percig rázogatjuk. A teljes oldódás után és a pezsgés megszűntével a trifluoracetátot éterrel (kb. 50 ml) kicsapjuk, szűrjük, éterrel mossuk és kálium-hidroxid és kénsav mellett szárítjuk. A száraz trifluoracetátot feloldjuk 10 ml piridinben, kalcium-klori-4
