161311. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pirrolo- benzodiazepinon-származékok előállítására
16131 7 • '- , 3 can Type Culture Collection Rockville Maryland (USA) intézménynél deponáltuk. A deponálási szám ATCC 21353 és a mikroorganizmust a továbbiakban „Streptomyces achromogenes var. tomaymyceticus"-nak nevezzük. * Megjegyezzük, hogy találmányunkat nem korlátozzuk az új antibiotikumnak a leírt organizmussal, vagy az. alábbiakban megadott növekedési és mikroszkopikus jellemzőknek teljes mértékben megfelelő organizmusokkal történő 10 előállítására; az alábbi adatok csak a törzsek bemutatását szolgálják példálódzó jelleggel. Találmányunk a kívánt organizmusból különböző módszerekkel (pl. röntgensugárzás, ultraibolya besugárzás, mustár olaj okkal és fágokkal történő 15 behatás) előállított mutánsok felhasználására is kiterjed. Találmányunk továbbá bármely olyan organizmus felhasználására kiterjed — függetlenül külsejétől vagy fiziológiai viselkedésétől —, me- 20 lyet a fent leírt fajból transzformálással, transzdukcióval, génrekombinációval vagy valamely nukleinsavat alkalmazó más genetikai eljárással állítunk elő. A találmányunk szerinti eljáráshoz tehát olyan organizmus alkalmazható, 25 mely fenti behatások eredményeként a kívánt termék termelésére vagy a leírt biológiai átalakítás elvégzésére képes. A mikroorganizmus izolálása ; és jellemzése céljából a talajminta részletét steril desztillált 30 vízben rázzuk és Krainsky féle agar táptalajon szélesztjük. Ezután 30 C°-on 7 napon át inkubáljuk, majd a Streptomyces achromogenes var. tomaymyceticus ATCC 21353 telepeit a táptalajból izoláljuk és Bennett féle agar táptalajon te- 35 nyésztjük. Mikroszkopikus morfológia Az alábbiakban a Streptomyces achromogenes var. tomaymyceticus ATCC 21353 morfológiáját 40 Czapek agáron 30 C°-on 10—14 napon át végzett tenyésztés után adjuk meg. A konidium szférikus-ovális sima felülettel. Elágazó és egye^nes vagy enyhén görbült hosszú légmicéliummal rendelkezik, ritka, növekedéssel, 45 Tenyészeti és fiziológiai jellemzők . A Streptomyces achromogenes var. tomaymy^ ceticus ATCC 21353 új törzs tenyészeti és fiziológiai jellemzőit számos táptalajon az alábbiak- 50 ban adjuk meg. A megfigyelést 30 C^-on 10—14 napon át tartó inkubálás után végezzük el. A fenti inkubálási periódust és hőmérsékletet alkalmazzuk feltéve, hogy. mást nem közlünk. Czapek agar: Fehér-halványsárgás telepszerű 55 növekedés; porszerű fehér légmicéliumok ritka növekedéssel; oldható pigment nincs. / Keményítő-ammónium agar: Gyengén szürkés növekedés porszerű,. sötétszürke légmicéliummal; oldható pigment nincs. Gyenge diasz- QQ tatikus hatás. Glükóz-aszparagin agar: Fehér-világos . elefántcsontszínű telepszerű . növekedés; légmicélium nem nő vagy porszerű fehér légmicélium ritkán nő; oldható pigment nincs. gg 1 4 Kálcium-malát agar: Krémszerű növekedé: porszerű, fehér-sötétszürke légmicéliummal oldható pigment nincs. A kálcium-malátot oldhatóvá teszi. Tirozin-agar: Ritka színtelen vagy világos barna vegetatív növekedés; légmicélium és oldható pigment nincs. Bouillon-agar: Krémszerű telepszerű növeke dés, légmicélium nincs; barnás oldható pigmentét termel. Kénhidrögént 7 napos inkubálá: után nem termel. • Bennett-agar: Világos krémszínű telepszeri növekedés;-' légmicélium1 és oldható pigmen nincs. 37 C°-on történő inkubálás után barna: telepszerű növekedést mutat porszerű, sötétszür ''.kés légmicéliummal' és barna oldható pigmen termeléssel. Glükóz-bouillon; Krémszínű telepszerű nőve kedés barna oldható pigmenttel; légmicéliun növekedés nincs. Glükóz—Czapek oldat: Felületi növekedés ke vés, színtelen, telepszerű-porszerű fehér lég micélium növekedése ritka, oldható pigmen nincs. A nitrátot egyáltalán nem vagy gyengéi redukálja nitritté. Zselatin: Krémszínű növekedés, 15—20 C°-oi 21 napon át végzett inkubálás után légmicéliuri és oldható pigment nincs. Gyenge zselatin-folyó - SÍtás.' •: .' - L .:•;••; :••: -Lakmusztej: A tenyészet a felületen krémszí nű gyűrűként fejlődik. Gyengén szürkésbarn oldható pigmentet termel. Enyhe peptonizálás koagulálás azonban nem lép fel. Burgonya-lemez: Szürkés krémszínű vegeta tív növekedés ráncos felülettel; porszerű fehé légmicélium ritkán nő; sötétbarna oldható pig mentet termel. Cellulóz agar: Nitrogénforrásként ammónium vagy nitrát-ionokat alkalmazva növekedés nine: - <•• Szénforrás hasznosítás A szénforrás hasznosítást Pridham és Gottlie módszerével 30 C°-on 7 napon át végzett inku bálás után végezzük él. a) Jól hasznosítható szubsztrátumók: glükóz, x: lóz, mannóz, fruktóz és mannit. b) Közepesen hasznosítható szubsztrátumol arabinóz, ramnóz, szacharóz, laktóz, trehí lóz, raffinóz és inozit. c) Gyengén hasznosítható szubsztráfum: szalicil •'•'••• Az- antibiotikum Az antibiotikumot a Streptomyces achromt genes var. tomaymyceticus valamely táptalaj c ellenőrzött szubmerz aerob körülmények közö történő fermentációjával állítjuk elő. Az eljár; növekedési szakaszában igen sokfajta táptala alkalmazhatunk. Azt találtuk, hogy a leg jot eredményeket asszimilálható szénforrást és as: szimilálható nitrögénforrást vagy fehérj eszei anyagot tartalmazó vizes táptalaj felhasználá: esetén kapjuk. Az „asszimilálható szeniorrá; kifejezés a többértékű alkoholokat és mono-, d 2
