161074. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szerves oldószerekben oldható cefalosporin-C-származékok előállítására

3 161074 4 könnyen végrehajtható. A levet előnyösen- leszűrjük az acilezési lépés előtt, és be is töményíthetjük, hogy elkerüljük nagy térfogatú víz. kezelését. Ezt az N-halogénalkanoil-cefalosporin C-t most már kiextrahálhatjuk a fermentléből, valamilyen Vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel. Vízzel nem elegyedő oldószer alatt olyan oldószereket értünk, amelyek korlátoltan vízoldhatóak, és nem szükséges, hogy teljesen oldhatatlanok legyenek. Például az etilacetát, amely kissé oldható vízben, kiválóan alkalmas a jelen extrakció céljaira. Az extrakciót előnyösen savas pH-tartományban végezzük. Az extrakció során alkalmazható szerves oldószerek pl. a rövidszénláncú észterek, pl. etilacetát, n-propilacetát, izopropilacetát vagy a szek.-butilacetát. Néha előnyös az észtert 0,1—1-szeres térfogatnyi rövidszénláncú alifás alkohollal, pl. etilalkohollal vagy n-butanollal keverni. Egyéb alkalmas oldószerek pl. a nitrilek, pl. a vajsavnitril vagy adiponitril, vagy a ketonok, pl. a ciklohexanon vagy metilizobutilketon. Az előnyös- oldószer az etilacetát, vajsavnitril és a ciklohexanon. ' Az N-halogénalkanoil-cefalosporin C a szerves oldószerből bármelyik jól ismert módszerrel elválasztható. Például az oldatot meglúgosítjuk, így a céfalosporin C-származék egy sóját állítva elő, mely keverés hatására kicsapódik a szerves oldószerből, előnyösen az oldat hűtése közben. Ezt az izolált származékot azután oldallánchasítási reakcióval 7-aminocefalosporánsavvá alakíthatjuk át. Lehet a hasítási reakciót az extrakcióra használt szervés oldószerben is végezni, úgy hogy az N-halogénalkanoil-cefalosporin C izolálása nem szükséges. A következő példák kapcsán az oldható céfalosporin C-származékok előállítását és kiextra-^ hálásukat a vizes fermentléből részletesen tárgyaljuk. Munkánk során kétfajta céfalosporin aktivi'tás mérési módszert használtunk. Az egyik egy UV-módszer, amely nemcsak a céfalosporin C-t mutatja ki, hanem a többi hasonló anyagot is, amely ugyancsak reagálhatott az acilezőszerrel. A másik a nikotinamid-módszer, amely jóval specifikusabb a céfalosporin C-re, és ezért ennek a módszernek eredményeit használtuk fel a termelések számítására. 1. példa Egy liter, szűrt és ioncserélőgyantával kezelt céfalosporin C fermentleben UV-analízissel 89 g céfalosporin C-jellegű anyagot, nikotinamidos módszerrel pedig 75,25 g céfalosporin C-t mértünk. Ehhez az 1 liter fermentléhez 1 liter, 25 ml 25!%-os nátriumhidroxidot tartalmazó, telített nátriumhidrogénkarbonátoldatot és 500 ml acetont adunk. 15 perc alatt 72 ml klóracetilklorid 500 ml acetonos oldatát adjuk hozzá. Az adago.lás közben a pH-értéket 8,0 és 8,7 között tartjuk, és a reakciót jégfürdőn végezzük, hogy a hőmérsékletet 20 és 28 C° között tartsuk. A reakcióelegyet az adagolás befejezése után még további 15 percig keverjük. A reakcióelegy teljestérfogata 3070 ml. 1520 ml ilyen eredeti reakcióelegyhez 300 ml benzolt adunk, és az elegy pH-ját 135 ml 6 N 5 sósav hozzáadásával 3,5-re állítjuk-be. A fázisokat hagyjuk szétválni, majd a benzolos fázist eldobjuk és visszamarad 1220 ml vizes oldat. Ezt az 1220 ml-t két egyenlő részre osztjuk, és a továbbiakban Al és A2 jelzéssel látjuk el. 10 Az Al oldathoz egyenlő térfogat etilacejátot adunk, és a pH-t 6 N sósavat hozzáadva 2>0 értékre állítjuk be. A fázisokat elválasztjuk és mégegyszer egyenlő térfogat -etilacetáttal extrahálunk. Az egyesített etilacetátos fázisokat nát-15 riumszulfát felett szárítva 1200 ml etilacetátos oldat marad vissza, amely UV-analízis szerint 11,5 g aktív anyagot tartalmaz. Az etilacetátos oldathoz 16,6 ml kinolint adunk, és az elegyet beoltjuk. Egy éjszakán át szobahőmérsékleten 20 keverjük, majd szűrés előtt lehűtjük. A leszűrt szilárd terméket 25 ml acetonnal mossuk, és vákuumszekrényben szárítva 18,9 g N-klóracetil-cefalbsporin C kinolinsó keletkezik. Az A2 oldathoz 200 ml acetont és 810 ml etil-25 acetátot adunk. A pH-t 6 N sósavval 2,0 értékre állítjuk, és a fázisokat hagyjuk szétválni. Az etilacetátos oldatot nátriumszulfát felett szárítva 1080 ml etilacetátos extraktum keletkezik, mely UV-analízis alapján 12,9 g aktív anyagot tartal-30 maz. Az oldathoz 18,6 ml kinolint adunk, és az elegyet beoltjuk. Egy éjszakán át keverjük, majd a szilárd anyag leszűrése előtt lehűtjük. A szilárd terméket acetonnal mosva és vákuumszekrényben szárítva 17,8 g N-klóracetil-cefalospo-35 rin C kinolinsó keletkezik. A másik 1520 ml eredeti reakcióelegyet egyenlő térfogat etilacetáttal kezeljük és a pH-t 235 ml 6 N sósav hozzáadásával 2,0 értékre állítjuk be, 40 majd a fázisokat elválasztjuk. Egyenlő térfogat etilacetáttal még egy extrakciót végzünk. Az egyesített etilacetátos fázisok térfogata 3000 ml, aktív anyag tartalma pedig UV-analízis szerint 30,9 g. 45 2. példa 1 liter, gyantával kezelt céfalosporin C fermentléhez, amelynek aktív anyag tartalma UV-analízis alapján 32,5 g, nikotinamidos mérés sze-50 rint pedig 26,15 g, 300 ml acetont és 100 g száraz nátriumhidrogénkarbonátot adunk, miközben az elegyet jégfürdőn, 10 C°-on tartjuk. A pH-t 25%-os nátriumhidroxidoldattal 8,5-re állítjuk. A hűtést folytatva, a reakcióelegyhez 15 perc 5g alatt 45 ml diklóracetilklorid 255 ml acetonos oldatát adjuk. Az adagolás során a pH-t 8,0 és 8,8 közötti értéken tartjuk, 25%-os nátriumhidroxidoldattal. Az adagolás befejezése után a reakcióelegyet levesszük a jégfürdőről, és 20 C°-6Q

on 20 percig keverjük. Ezután a pH-t 6 N sósavval 3,5-re állítjuk, és 1700 ml etilacetáttal extrahálunk, miközben a pH-t 6 N sósavval továbbsavanyítjuk 1,9-re. Ezt az elegyet 15 percig keverjük, majd centrifugálva szeparáljuk. Az 65 etilacetátos fázis térfogata 1940 ml, és az UV-2