160875. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hidrofil antibiotikumok, (cefaloszporin C) izolálására

5 160875 6 6 liter „Amberlite" XAD-2-t vízzel együtt az ioncserélőknél szokásos módon 10 cm átmérőjű üvegoszlopba betöltjük. A gyantaágy magassága 76 cm. Az oszlopon keresztül 6 liter fenti módszerrel kapott szűrt fermentlevet 3 liter/óra sebességgel perkolálunk. A szűrletet azonos áramlási sebesség betartása mellett 3 liter ionmentes vízzel az oszlopról kiszorítjuk és az oszlopot 10%-os vizes izopropilalkohollal eluáljuk. Az adszorpciós és mosóvízként kapott perkolátumokat másfél literes frakciókban, narancssárga s színű eluátumokat 1 literes frakciókban fogjuk fel. Az „Amberlite" XAD—2 ioncserélőt 6 liter 1 n nátriumhidroxid tartalmú 50!

%-os vizes metilalkohollal reagáltatjuk, majd a regenerálószert az oszlopról vízzel kimossuk. Az oszlop ily módon ismét alkalmas adszorpcióra. Az adszarpciós^ehiálási lépések eredménye a következő: a fermentlé szennyeződéseinek kb. 65—70%-a a biológiailag inaktív perkolátum és a mosóoldat-frakcióban, valamint a két első eluálási frakcióban található, ez utóbbi csak nyomokiban tartalmaz eefaloszporin C-t. A biológiailag aktív eluáítuin-írakciók össztérfogata 12 liter és ezek a fenmientlében jelenlevő cefaloszpoirin C 95%-át, valamint a fermentlé szennyeződésének 20—25%-át tartalmazzák. Az aktív eluátumfrakciók szervetlen ionoktól mentesek. 2. példa: 4 liter 1. példa szerinti eljánással kapott és literenként 2,i2 g eefaloszporin C-t tartalmazó fermentlevet kénsav helyett óxálsawal savanyítunk. A savanyított fermentlevet 12 liter/óra áramlási sebességgel az 1. példa szerinti „Amberlite" XAD—2-vel töltött oszlopon parkoláljuk. A perkolátumot 3 liter ionmentes vízzel szorítjuk ki az oszlopból, majd az oszlopot öszszesen 12 liter 10%-os vizes izapropilalkohollal eluáljuk. Az „Amberlite" XAD—2 regenerálására 3% aktív klórtartalmú nátriumhipokloritöldatot, majd 4 liter 0,2%-os nátriumhidrogénszulfi t-oldatot folyatunk át az oszlopon. Ezután ismét megkezdjük az adszorpciós ciklust 4 liter szűrt fanmentié felhasználásával. Több egymást követő ciklus átlagos eefaloszporin tartalma 85,2 % az aktív eluátumfiraikciókiban, ezek szervetlen anionoktól mentesek. A eefaloszporin C 9,2%-a a még szervetlen anionokat tartalmazó első eluátumfrakciókiban található, ezeket ismételt adszorpcióval kinyerhetjük. A biológiailag aktív eluátum-frakciók a szűrt fermentlében jelenlevő össz-szennyezés 30—35%«át tartalmazzák. 3. példa: 30 liter 1. példa szerinti eljárással kapott és literenként 2,10 g eefaloszporin C-t tartalmazó szűrt fermentlevet 30 liter/óra sebességgel 30 liter „Amberlite" XAD—i2-vel töltött oszlopon perkolálunk. Az oszlop belső átmérője 15 cm. A szűrt fermentlevet 15 liter ionmentes vízzel az oszlopról kiszorítjuk és az oszlopot 60 liter 10%-os vizes izopropilalkohollal eluáljuk. Az 5 eluálási sebesség 60 liter/óra. A eefaloszporin C főtömege 45 .liter eluátumiban gyűjthető össze. Az „Amiberlite" XAD—2-t egymást követően 15 liter 1 n nátriumhidroxid, 10 liter 0,2 n kénsav és 10 liter víz perkolálásával regene-10 ráljuk. Ezután 30 liter szűrt fermentlével ismét megkezdjük az adszorpció ciklust. Több egymást követő ciklus eredményeként a biológiai. lag aktív eluátum-frakeiókban jelenlevő és szervetlen anionoktól mentes eefaloszporin C menynyisége 95%-nak felel meg. A eefaloszporin C kb. 3%-a a még klór- és szulfát-ionokat tartalmazó frakciókban van jelen. Az utóbbi frakciókból az antibiotikumot ismételt adszorpcióival nyerhetjük ki. Az aktív eluátum-főfrakciók a' 20 szűrt fermentlében jelenlevő szárazanyag 28%

r át tartalmazzák. „Amberlite" IRA—n68-at 10%os vizes izopropanolban szuszpendálunk, majd azt 5 om belső átmérőjű ü/vegoszlopba betöltjük. A töltet térfogat 1 liter. Az oszlopon ke,. resztül 45 liter fentiekben kapott eluátumot perkolálunk. Az adszorpciós oldat literenként 0,684% szilárdanyagrész mellett 1367 mg eefaloszporin C-t tartalmaz. Az adszorpciós sebesség 10 liter/óra. Az adszorpciós oldatot 1 liter víz-0 zel az oszlopról kiszorítjuk. Az adszorpciós és mosásra használt perkolátum a bevitt eefaloszporin C 3%-át és az adszorpciós oldatban jelenlevő szennyezések kb. 35—40%r-át tartalmazzák. . A eefaloszporin C-t 5,5 pH-értékű piridinacetátos puftferrel eluáljuk. A pudJferoldat 0,44 mólos piridinre és 0^2 mólos ecetsavra van számítva. Az eluálási sebesség 1 liter/óra. A bevitt eefaloszporin C mennyiségének 92,3%-a az elu.. átum 3 liter össztérfogatú főifrakciójában található, ez 18,5 g eefaloszporin C-t tartalmaz literenként. További 3% hatóanyag található 1,25 liter mellékfrakcióban. A 4,9 pH-értékű főfrakcióhoz 185 g cinkaoetátot adunk. Az átlátszó oldathoz keverés köziben 20 perc leforgása alatt 3 liter izopropanolt adagolunk. Az. adagolás vége felé megkezdődik a eefaloszporin C-cinkkomplex kikristályosodása. A keveréket 2°-ra lehűtjük és 4 óra 56 hosszat

ezien a hőmérsékleten tartjuk. A kivált csapadékot lenuccsoljuk, kétszer 300—300 ml vízzel, egyszer 300 ml acetonnal mossuk, végül 40°-on vákuumban szárítjuk. A hozam fehér por alakjában 36,6 g eefaloszporin C-cinkkompsh lex, amelynek hatóanyag-tartalma ibolyántúli abszorpciós mérés alapján 91,6%. 4. példa: 60 A 3. példában leírt „Amberlite" IRA—68 oszlopon végzett adszorpciós-eluálási műveleteket analóg módon elvégezzük „Amberlite" XE—265 65 felhasználásával, a 3. példa szerint kapott 3