160823. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a negamicin antibiotikum előállítására

160823 ták meg és különítették el 1964 augusztusában Myogisanban (Gunma megye) gyűjtött talajmintákból. Az antibiotikumnak az M890—C2 laboratóriumi számot adták. A feltalálók a negamicint két más törzsből is elkülönítették, melynek MA91—Ml és MA—104—Ml laboratóriumi számot adták. Az MA91—Ml számú törzset 1965 januárjában Nojirikoban (Nagano megye), az MA—104—Ml számú törzset 1965 februárjában Sakomachiban (Toikushima város) gyűjtött talajmintákból különítették el. Ezek a törzsek számos közös tulajdonságot mutatnak az M890—C2 számú törzzsel és a Streptornyces purpeofuscus-al is. Bár ezek közörtlt némi különbség van, a törzseket mint Streptomyces purpeofuscust sorolták be. A feltalálók •bebizonyították, hogy ezen túlmenően a Str. purpeofuscus típusú kultúra negamicint termel (Str. purpeofuscus Yamaguchi és Sabuii, I. S. P. 5283, I. S. P. a nemzetközi 'kutatásban alkalmazott rövidítés). Az M890—C2 számú törzset 1969 május 6-án Kogyogijutsuin Hakko Kenikyujo-nál, 306 szám alaitt letétbe helyezték. Ugyancsak letétbe helyezték az American Type Culture Collection-nél is ATCC 21470 szám alatt. Az M890—C2 számú törzs — mikroszkóppal vizsgálva — a következő tulajdonságokat mutatja: jól elágazó mioéliumtömeget képez, egyenes vagy kígyózó légmicéliummial, göndörödő és spirális forma nélkül. A spóra felülete sima. A törzs tulajdonságai különböző táptalajon: (a szín megjelölését [ ] zárójelbe tettük a Container Corporation of America „Színegyeztetési skála" meghatározása szerint.) 1. Glioerin-Czapek agár táptalajon 27 C°-on inkubálva: halvány sárgától sötét sárgásbarnáig [Spice brown 4 ni] micélium fejlődik, világosszürke dús légmicéliummal, barnától halvány vörösbarnáig oldható pigment képződésével. 2. Krainsky glükóz-aszparagin-agár táptalajon 27 C°-on inkubálva: sárgás tornától [Luggage Tan 4 ne] sötét sárgásbarnáig [Clove Brown 3 ni] fejlődik, sárgásfehértől világos barnásszürkéig légmicélium képződésével halványbarna oldható pigmenttel. 3. Tej savas-kalcium-agár táptalajon 27 C°-on inkubálva; szürkésbarna [Fawn 4 ig] színnel fejlődik, csekély szürkésfehértől világosszürke színű légmicéliummal. Oldható pigment nem kéoződik. Három.' naoig tartó inkubálás után a tejsavas-kalcium körül erősen oldódik. 4. 1% nitrátot tartalmazó pepton oldatban 27 C°-on inkubálva: színtelentől halvány sárgásbarnáig, légmicélium nélkül fejlődik. Oldható pigment nem, vagy gyengén barna színű pigment képződik. Nitrát enyhe redukciója figyelhető meg. 5. Burgonya táptalajon 27 C°-on inkubálva: halvány sárgásbarnától [Lt Gold 2 ic] sárgásbarnáig [Yellow Maple 3 ng], később sötét sárgásbarnától [Clove Brown 3 pl] fekete színűig, ráncosán fejlődik. Légmicélium nem képződik. Gyengén barnás oldható pigment. 6. Keményítő-agár lemezen 27 C°-om inkubálva: halvány sárgásbarnától sárgásbarnáig [Spice Brown 4 ni] fejlődik, sárgás fehértől világosszürke színű légmicélium képződik. Barnától 5 halvány vörösesbarna színű oldható pigment. Keményítőt hidrolizál. 7. Tápagáron 37 C°-on inkubálva: 14 napig tartó inkubálással sem fejlődik. 8. Tápagáron 27 C°-on inkubálva: halvány vö-10 rösesbarna [Brick Red 6 V2 ng] színnel fejlődik, légmicéliumot nem képez. Sápadt vörösesbarna oldható pigmentet termel. 9. Löffler féle koagulált szérum-táptalajon 37 C°-on inkubálva: 14 napig tartó inkubálással 15 sem fejlődik. 10. Zselatin szúrótenyészet 20 C'-on: színtelentől halvány sárgásbarnáig fejlődik, légmicélium nélkül, barnától sötétbarna színű pigment képződésével. A zselatin erősen elfolyósodik. 20 11. Lefölözött tejen 37 C°-on inkubálva: színtelen, légmicélium és oldható pigment képződése nélkül. A tej teljes koagulálása után a negyedik napon inkubálva lassú peptonizálás figyelhető meg. 25 12. Tirozin-agár táptalajon 27 C-on inkubálva: színtelen vagy szürkétől sötétbarnáig fejlődik, fehértől szürkésfehérig gyér légmicélium képződésével. A tirozináz-aktivitás meghatározása az oldható pigment feketés elszíneződése 35 miatt nehézkes. 13. Cellulózon (szűrőpapír) 27 C°-on inkubálva: gyenge fejlődés, a cellulóz elbontása nélkül. 14. Széníhidrát^hasznosítás Pridham-Gottlieb 35 alapú táptalajon, 27 C°-on inkubálva: pozitív fejlődés keményítővel, dextrinnel, glicerinnel, galaktózzal, glükózzal, szacharózzal, maltózzal és mannózzal. Fejlődés nincs: inozitollal, laktózzal, mannitollal, raffinózzal, ramnózzal, inuiin-40 nal, szorbitollal, fruktózzal, xilózzal, arabinózzal, szalicinnel és dulcitollal. Az M890—C2 számú törzs jellegzetességeit a következőkben foglalhatjuk össze: a Streptomy-45 ces faj légmicéliuma sem spirális, sem kanyargós formát nem vesz fel; a spóra felülete sima; különböző táptalajon sötét sárgásbarna színnel fejlődik, szürke vagy világosszürkétől világos barnásszürke színű légmicéliummal; oldható -o0

pigmentet nem képez, vagy csak jelentéktelen mértékben vörösesbarna színnel; több napos inkubáció alatt a micélium megváltozik és fekete lesz; 27 C°-on tápagáron vörösesbarna színnel fejlődik és vörösesbarna oldható pigmentet képez; melamin pigmentet képez, a keményítőt hidrolizálja és viszonylag erős proteolitikus aktivitással rendelkezik, Ezek a tulajdonságok megegyeznek a Streptomyces purpeofuscus Yamaguchi és Saburi tulajdonságaival, melyet az International Yournial of Systematic Microbiology. 18, 364, 1968 helyén írtak le. Az M890—C2 számú törzs a laktózt és a xilózt nem hasznosítja, míg ezeket a Str. purpeofuscus hasznosítja. Az MA104—Ml számú törzs viszont a xilózt hasz-65 nosítja. Bár az általunk elkülönített negamicint 60 9.