160550. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (-) (cisz- 1,2-epoxipropil)-foszfonsav és sói előállítására
7 160550 8 NRRL Y 1056-ot alkalmazzuk hidrolizáló mikroorgainizimuskéiit és 2 ml 200 yfxrú. racém nátriummonoetil-!(cÍ!Sz>l ,2-epoxipriopil)-ifos2Sfonát oldatát hidrolizálandó anyagként, a felülúszó folyadékot Proteus vulgaris próbával vizsgálva, 17 mm átmérőjű gátlási zónáit kapunk. 7. példa Teljesen a 6. példa szerinti eljárást követve, osak azzal a különbséggel, hogy naoém monoetilészter nátriumsó helyett nacém monoallü-észitier nétriumsójával dolgozunk, a felülúszó folyadékot Proteus vulgaris próbával meghatározva, 24 mim átmérőjű gátMsi zónát kapunk. 8. példa Teljesen aiz 1. példa szerint járva el, ugyanazokat az anyagokat, mennyiségieket és reakciókörülményeket, de Aspergillus niger NRRL—67 helyett Nocardila ooraíüina ATCC 4273-t alkalmazva, a felülMszó folyadékot Proteus vulgaris próbával meghatározva 12 mm átmérőjű gátlási zónát kapunk. 9. példa Teljesen a 8. példa szerinti eljárást követve, csiak azzal a külöbséggel, hogy a monometil-észter nátriumsója helyett a monoetil-észter nátriumsóját alkalmazzuk, a felülúszó folyadékot Proteus vulgaris próbával meghatározva 13 mm átmérőjű gátlási zónát kapunk. 10. példa Teljesen a 8. példa szerinti eljárást követve, csak azzal & különbséggel, hogy a monometilészter .nátriumsója helyett a monopropil-észtter nátriumsóját alkalmazzuk, a felülúszó folyadékot Proteus vulgaris próbával meghatározva 11 min átmérőjű gátlási zónát kapunk. 11. példa Teljesen a 8 példa szerinti eljárást követve, csak azzal a különbséggel, hogy a monometilészter nátriumsója helyett a monoallil-észter nátriumsó ját alkalmazzuk, a felülúszó folyadékot Proteus vulgaris próbával meghatározva 19 mm átmérőjű gátlási zónát kapunk. 12. példa Az 1. példa szerinti eljárással Penicillium frequentens NRRL 1915 tenyésztésével és a sejtek elkülönítésével a sejteket tömöríttett formában kapjuk. Az így topott nyugvó sejteket racém mo'niometil-észiter-'(ciiffi-l,i2Hepoxiproipil>-foszfonsiav nátrium-isójávai inkubáljuk, majd a kapott folyadékot Proteus vulgaris próbával vizsgáljuk. A vizsgálat 21 mm átmérőjű gátlásd zónát 3 mutat. 13. példa 10 40 ml steril táptalajhoz — mely 250 ml-es Erlenmeyer lombikban pH 7,0-ire beállított 0,8% tápfőzetet, 0,2% élesztőextoaiktot, 3% cellulózt és 0,3% malátaextraktot tartalmaz desztillált vízben — Aspergillus nigier NRRL—67 ferdete-15 nyészet oltóanyagát adjuk. A beoltott lombikot rázógépen 220 fordulat/perc és kb. 5 cm lökethossz mellett 28 C°-on négy napon keresztül inkubáljuk. Az így kapott fenmentié 10 ml-ét csírarmiemtesien betöltjük egy oanrifugaHOSőbe és a sej-20 tekét 25 000 g-n tömörítjük. A felülúszó folyadékot elöntjük és a tömörített sejteket 4 ml 0,05 m trisz-pufferben pH 8,0-on falszuszpendáljuk. Az így kapott sejt-szuszpenzió 2 ml-ét csíramentesen betöltjük egy 20X200 mm-es steril tenyész-25 csőbe, mely 200 y racém N,N,N'N'-tetriaetil-(cisz~ l,2-epoxipropil)-foszfonamidot tartalmaz pH 8,0-n 2 ml 0,05 m trisz-pufferben. A tenyészcsövet rázógépen 220 fordulat/perc ós kb 5 cm lökethossz mellett 28 Cp -on 48 óra hosszat inku-30 báljuk. Inkubálás után a sejteket centrifugálással eltávolítjuk és a felülúszó folyadék biológiai aktivitását Proteus vulgaris MB—838 próbával vizsgáljuk. Az oldat 38 mm átmérőjű gátlási zónát mutat. 35 14. példa Teljesen a 13. példa szerinti eljárásit követve, csak azzal a különbséggel, hogy Héliíoostylüm pi-40 riforme ATCC 8992-t alkalmazunk hidrolizáló mikroorganizmusként és 'racém N,N,N'N'-tetrametil-(cisz^l ,2^epoxipropil)-foszfoniamidöt hidrolizálandó vegyületként, a felülúszó folyadékot Proteus vulgaris MB—.838 próbával vizsgálva, 45 35 mm átmérőjű gátlási zónát kapunk. 15. példa Teljesen a 13. példa szerinti eljárást követve, 50 csak azzal a különbséggel, hogy Penicillium frequentans NRRL 1915-4: alkalmazunk hidrolizáló mikroorganizmusként és racém N,N,N,N2 -tetrametil-(cisz-l ,2-epoxipropil)-foszfonarnidot hidroliizálandó vegyületként, iá Mülúszó folyadékot 55 Proteus vulgaris próbával vizsgálva, 39 mm átmérőjű gátlási zónát kapunk. 16. példa _. Teljesen a 13. példa szerinti eljárást követve, azzal a különbséggel, hogy Aspergillus niger helyett Aspergillus fumigaitus NRRL 165-t álkjalmázunk, a felülúszó folyadékot Proteus vulgaris NB—838 próbával vizsgálva, 44 mm átmé-65 rőjű gátlási zónát kapunk. 4
