160550. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (-) (cisz- 1,2-epoxipropil)-foszfonsav és sói előállítására
16Ö5S0 10 17. példa Teljesen a 13. példa szerinti eljárást követve, csak azzal a különbséggel, hogy a Natiok Conn. Quatenmiaister gyűjteményben letétbe helyezett 5 54B-jelű PenniCillliuim vermieulaitum-ot alkalmazunk az Aspergillus niger helyett, a felülúszó folyadékot Proteus vulgaris MB—838 próbával vizsgáival, 32 mim átmérőjű gátlása zónát kapunk. 10 18. példa 4 uteres Erlenimeyer lombikban levő 400 ml csapvízben 1,2 g KH2PCM, 2,4 g Na2HPO/ i -t, IS 0,4 g {NH4 Cl-t, 0,002 g ZnSO4-H 2 0-t, 0,004 g FeS04 -t, 2 g CaC0 3 -t és 2 g étiI4afctátot oldunk, a pH-t 7,0-ra beállítjuk és a lombikot autoklávban 121 C°-om kb 1 att nyomáson 15 percig sterilizáljuk. Az így kapott steril tápoldat- 20 hoz Aspergillus niger NRRL 67 vegetatív tenyészetét adjuk és a beoltott lombikot 4 napon át rázógépen 220 fordülat/perc és kb. 5 cm lökéthossz mellett 28 C°-on inkubáljuk. A fermentált tápoildatihoz 20 g racém nátrium-monoetil-(cisz- 25 l,2napoxipröpil)-foszfonátöt tartákniazó 40 ml vizes oldatot adunk, melyet előzőleg pH 7-re semlegésítettüinik és szűréssel sterilizáltunk. Az inkubációt ezután még további 24 óra hosszat folytatjuk. á0 A fermentált tápoldatot szűrjük és a szűrletet vákuumban ismételt metanol hozzáadásával bepároljuk, míg 90% metanöios oldatot nlem kapunik. A mietandtos oldatot a kivált szervetlen 35 sóktól leszűrjük, ós a maradékot metanollal mossuk, melyet a szűrlethez hozzáadunk. Az így kapott koncentrált nietanolas oldatot, az előzőleg metanollal mosott 2000 g alumíniumoxidot tartalmazó ikolonnán kromaitografáljuk. A kolon- 40 nát ezután metanollal kezeljük ós így 200 ml-es eluátumfrakciókat kapunk. Az egyes frakciókat Proteus vulgaris próbával vizsgáljuk, az aintibiotilkus aktivitású frakcióklat egyeisítjük, majd a metanolt csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. 45 A maradék (—)(cisz-l,2^epoxiprapil)-tfoszfonisiav szeszkvi^átriumsóját tartalmazza, melyet vizes metanolból áitkriistáftyosítunk, így a iszaszkvi-nátriumsót tiszta kristályos formáiban kapjuk. A termék 2% -os vizes oldiaft áriak pH-ja 6,8 és §Q M 405 m,« ^14 ' 9 °-55 A taláümány szerinti eljárásban a (ciisz~l,2-epoxipropil)jfoszfonsav enantiomér észtereit és amidjiait alkalmazzuk, melyeket a ciszHpropenilfosizfonsav megfelelő származékainak epoxidálásával kapunk. A monoésizteraket tehát a megfelelő eisz-mofin nopropanil-foszfomsav monoészterek epoxidálásával, vagy a (cisz-l,2-epoxipröipia)-foszfíonsavdiészter savas hidrolizisével állítjuk elő. Például a monoészterek előállíthatok dii-t-butil-foszforossav-kloridból kiindulva, a következő módon: 65 2 literes Ihároimnyakú lombikba — mely keverővel, hőmérővel, csepegtető tölcsérrel és kalciuimkloridos csővel van .ellátva — bemérünk 68,7 g foszfor-itriikilorlidot (0,5 imól) és 750 ml vízmentes benzolt. Az oldatot lehűtjük 5 C°-ra és 20 perc alatt, 5-HLO C°-Jon, 50,6 g trietilamint (0,5 mól) adagolunk hozzá. A benzdlos oldatot 20 percig keverjük. Ezután 50,6 g triletdlamin (0,5 mól) és 37,06 g t^bufenol (0,5 mól) oldatát adagoljuk be 20 perc alatt 5—10 C°-on és a riaalkcióelegyet 20 percig utánkeverjük. A második részlet 37,06 g t-butanolt (0,5 mól) 5—10 C°on 20 perc alatt becsepegtetjük és a di-t-butüfoszforossav-tkloridot tartalmazó reakcióelegyet 5—10 C°-on 90 percig keverjük. 50,(6 g trietilaiminit (0,5 mól) és 28,03 g propargilalkoholt (0,5 mól) 40 ml vízmentes benzolban oldunk és az oldatot keverés közben 25 perc alatt a diMt^butilfo'Szforosisav-Tkloridot tartalmazó raafccióelegyhez adjuk, miíközíben a reakció hőmérsékletét külső hűtéssel 5—10 C°-on tartjuk. A di-it-butil-2-tpropinilfoszfitot tartalmazó reakcióelegyet 5—<10 C°-on/ iegy óm hosszat utánkeverjük. A di-t-"butil-2-propinilfoszfitot tartalmazó reakcióelegyet ezután vissziafolyaMsi hőmérsékletre melegítjük és ezen a hőmérsékleten tartjuk egy óra hosszait. Az oldatot ezután vízfürdővel Bzolbahőmiérsékletre hűtjük és részletekben 185 ml vizet adagolunk hozzá. A triietilaminhidrokltarid a vizes rétegben feloldódik, mely vizes réteget a szerves oldószeres rétegtől elválasztunk. A benzoics oldatot normál nyomáson felmelegítjük és a vizet azeotrópos deisztillációvial eltávolítjuk. A visszamaradó benzofos oldat a di-t~butil^propadienil-foszfonátot tartalmazza. Amennyiben szükséges, a tiszta észtert megkaphatjük úgy is, hogy iaz oldóiszer eltávolítása után az észtert nagy vákuumban ledesztilláljuk. A tiszta észtert IR és NMR spektrummal vizsgáljuk. A diJt^butil-propadieniil-foisizfonát szárított benzoics oldatát 20—25 C°-on 5% palládiumcsontszén katalizátorral (5,0g) hidrogénezzük, míg a hidrogén félvétele meg nein szűnik. A katalizátort szűréssel eltávolítjuk és 2X50 ml benzollal mossuk. Az oldószert vákuuimíban ledaszti'lláljuk és a kapott di-t^bütiljcisz-propenil-foszfenát ÍR és NMiR spektrumát vizsgáljuk. A nyers észter nagyvákuumban végzett desatillációval tisztítható. Di-t-butil-cisz-propenil-foszfoinátot {1,0 mól) és p-toluolszulfanisavat {0,005 mól) 235 ml benzolban oldunk és az oldatot visszafolyiatáisá hőmérsékleten melegítjük mindaddig, amíg számított mennyiségű izobutén nem keletkezik. A fejlődött izobutén mérésére gázórát használunk. A reakcióelegyet ezután 'szobahőmérsékletre hűtjük, és laiz oldószert vákuumban eltávolítjuk, így a desztillációs maradékban a oisz-propeinilfoszfonsiavat kapjuk. A ci'SiZipropenil-foszfonsiav diészterét előbb a szabad sav cisz-propenil-foszfonsav-dikloriddá történő átalakításával, majd az így kapott diklo-5
