160532. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szőlő és bogyós gyümölcsök léhozamának növelésére alkalmas poligalakturonáz enzimkészítmények előállítására

3 160533 4 a léhozam enzimes növeléséhez. A növényi szövetekben előforduló polifenolök esetleg csökkenthetik az enzim aktivitását. Ez esetleg a zúzalék 80—85 C°-os előzetes hőkezelésével kiküszöbölhető. A Szovjetunióban Nigrin OP néven kerül forgalomba olyan pektolitikus enzimkomplexumot, tartalmazó készítmény, amelyet gyümölcslésűrítmények gyártásánál, illetve a borászatban a zúzott szőlő léhozamának fokozására használnak. Ez a készítmény tulajdonképpen a citromsavgyártás melléktermékeként keletkezik az Aspergillus niger fermentléből elkülönített mycéliumából. A kiindulási száraz mycéliumra számítva ily módon 2,5%-os tisztított enziin nyerhető ki (Jarovenko V. L. et. al. Proizdvosztvo fermentnüh prepáratov is gribov i bakterij, Izd. Piscs. Prom. Moszkva, [1970] 283—284. oldal). Az eljárás hátránya, hogy gazdaságosan csak ott valósítható meg, ahol nagy volumenű citromsavgyártás folyik fermentációs úton Aspergillus niger törzzsel. További hátránya, hogy a kinyerési technológia bonyolult és az eljárás hatékonysága alacsony, 40—60%. A készítmény felhasználási módjával és hatékonyságával kapcsolatban nem közölnek adatokat. Ismeretes olyan pektolitikus enzim-készítmény, amelyet az Aspergillus Awamori 16 jelzésű törzs fermentlevéből nyernek (Jarovenko V. L. et. al. Proizdvosztvo fermentnüh preparatov iz gribor i bakterij. Izd. Piscs. Prom., Moszkva, [1970.] 443. oldal). A száraz készítmény pektolitikus aktivitása 1000 PKSZ E/g. (1 PKSZ egység az az enzámmennyiség, amely 1 mg répapektin bontását képes katalizálni 1 óra alatt 37—38 C°-on. A bontást jodometriáson ellenőrzik). Az eljárás hátránya, hogy a fermentációs technika rendkívül bonyolult és a készítmény aktivitása alacsony. A szerzők itt sem közlik, hogy a készítmény milyen eredménnyel használható léhozam növelésére. A találmány szerinti eljárással szőlő és bogyós gyümölcsök lényeredékének növelésére alkalmas, nagy aktivitású folyékony enzim-preparátumot állítottunk elő szubmersz fermentációs úton. Találmányunk alapja az a felismerés, hogy az Aspergillus awamori P 1925 törzs protopektináz és poligalakturonáz aktivitása meglepő mértékben fokozható indukált mutációs hatással, például ultraibolya besugárzással, valamint a táptalajhoz nyomóikban adott nyomóelemmel, előnyösen kobalttal. A találmány szerinti eljárást úgy valósítjuk meg, hogy az Aspergillus awamori törzs 282. jelzésű UV. variánsát 0,1—7% nitrogénforrást és 1—10% szénforrást tartalmazó táptalajon levegőztetett, süllyesztett körülmények között 1,5— 6,0 pH-tarfományban tenyésztjük. Előnyösen úgy járunk el, hogy a táptalajhoz adott esetben 0,1—1,0% magnézium-vegyületet és/vagy 0,01—0,001% nyomelemet, előnyösen kobalt-vegyületet adunk. Szénforrásként előnyösen valamely szénhidrátot, így poliszahandot, szervetlen N-forrásként 5 célszerűen (NH^SC^-et és szerves N-forrásként előnyösen kukoricalekvárt adagolunk. A fermentlevet kétféleképpen dolgozhatjuk fel. Eljárhatunk úgy, hogy a fermentlevet szűrjük, majd 4-es pH-értéken, 40—45 C°-on a kí-10 vánt mértékben betöményítjük vagy szilárd enzim-preparátumot állítunk elő oldószeres kicsapással. Kicsapó oldószerként előnyösen metanolt, etanolt vagy izopropanolt, valamint szervetlen sókat alkalmazunk. A folyékony enzim-készítményt kívánt esetben tartósítószerekkel, például benzoesavval vagy nátrium-benzoáttal tartósíthatjuk. A találmány szerinti 'eljárásban, a P 1925 As-20 pergillus awamori törzs ultraibolya besugárzással előállított 282 számú mutánsát alkalmazzuk, amelyet az Országos Közegészségügyi Intézetben 1970. október 15-én 59. szám alatt deponáltunk. A spórafejek szürkésbarnák, átmérőjük 2— 25 250 /Mn. A színtelen .spóratartók hossza 1— 1,5 fim, átmérőjük 10—15 fim.. A vesiculum 35—45 jum átmérőjű. A primer szterigmák 7—12 /«m/3, a szekunder szterigmák 7—8 //m/2,5—3,0 ^m nagyságúak. 30 A spórák gömbalakúak, átmérőjük 3,5 /ím (Thom és Baper, The Manual of Aspergilli, Williams and Wilkins, Co., [1945] Baltimore, 216. oldal). 33 A találmány szerinti eljárással előállítható fermentlé előnyösen folyékony enzim-készítményként alkalmazható a gyakorlatban. A találmány szerinti enzim-készítményt 0,01— 0,03% mennyiségben szőlő léhozamának növelé-40 sere alkalmazva kísérleteink szerint a léhozam 7—10%-kal nő. A találmány szerinti eljárás előnye továbbá, hogy fermentációs technikája egyszerű és a fermentációs idő az ismert eljárásokhoz viszonyítva 45 rövid

A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. 1. példa 50 Á 100 liter csapvízben 7% szaharózból, 4% ammóniumszulfátból, 0,2% káliumdihidrogénfoszfátból, 1% kukoricalekvárból elkészített tápközeget (pH: 3,5) 0,5 att nyomáson 50 percen 55 át sterilizáljuk, majd a 28 C°-ra lehűtött táptalajt Aspergillus awamori gomba 24 órás tenyészetével beoltjuk. A fermentlevet szűrőpréssel tükrösre szűrjük, 60 pH-ját 30%-os NaOH adagolásával 4,0 értékre állítjuk be és hozzáadunk 0,1% benzoesavat. Szobahőmérsékleten történt 40-hetes tárolás után a minták afctivitásosökkenése mindössze 65 10—12%. £