160416. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az YL 704 antibiotikumok előállítására
5 160416 6 ment színe szempontjából. Az ilyen eltérések ellenére is azonban a Streptomyces platensis és Streptomyees sp. NIRRL 3761 törzsek más tulajdonságaik szempontjából hasonlatának egymásra, így elsősorban a morfológiai és fiziológiai tulajdonságok, valamint a szénforrások hasznosítására irányuló képesség szempontjából is. Ezért az YL 704 antibiotikumokat termelő Streptomyees sp. NRRL 3761 törzset a Streptoniyces platensis egy variáns törzseként határoztuk meg. Megjegyzendő azonban, hogy a jelen találmány körne nem korlátozódik a Streptomyces platensis var. s;p. NRRL 3761 törzsnek az YL 704 antibiotikumok termelésére való felhasználására. Kiterjed a találmány az e törzsiből létrehozott természetes vagy mesterséges mutánsok felhasználására is. A mesterséges mutánsok vagy variánsok előállítása ismert módszerekkel történhet, pl. röntgen- vagy ibolyántúli besugárzás, vagy nitrogén^mustáranyagokkal való kezelés útján. Kiterjed továbbá a találmány a fent említett új törzzsel azonos fajtájú és a fentebb részletesen megadott jellemzésnek megfelelő további YL 704-termelő törzseknek az YL 704 antibiotikumok előállítására való felhaszrnálására is. A találmány értelmében az új YL 704 antibiotikumok élőállítása oly módon történik, hogy egy YL 704-termelő mikroorganizmus-törzset, mint a Streptomyces platensis var. sp. NRRL 3761 törzset vagy ennek valamely mutánsát aerob körülmények között erre alkalmas vizes tápfcözegben tenyésztjük, majd az így kapott fermentléből a termelt antibiotikumot elkülönítjük. A fermentáció vagy rázott kultúrába vagy alámerülő kultúrában, az utóbbi esetben szellőztetés és keverés köziben történhet. A tápközeg összetétele széles határok között változhat. Lényegileg szénforrás, nitrogénfarrás és szervetlen nyomelemek jelenléte szükséges a tápközegben. Szénforrásként pl. glükóz, laktóz, maltóz, keményítő, glicerin, inozit vagy szójaolaj alkalmazható. Nitrogénifonrásként peptoin, húskivonat, élesztőkivoinat, kukoricalekvár, gyapotmagliszit, szójaliszt, mogyoróliszt, fehérjehidrolizátumok, szervetlen nitrátok vagy ammóniumszulfát kerülhet felhasználásra. Szervetlen elemeket pl. inátriumklorid, kalciumklorid, magnéziumszulfát, kalciumkarbonát, kalciumifoszfát, nehézfém-, mint vas-, óink-, réz- és/ /vagy mangánsók hozzáadásával vihetünk a tápközegbe. Ha a fermentáció során túlságos habzás lép fel, habzásgátlószerek, mint szilikonolaj, növényi olajok vagy felületaktív anyagok adhatók a fermentációs közeghez. A fermentációt semleges közegben, 25 °C és 35 °C közötti, előnyösen 27 °C körüli hőmérsékletein folytatjuk le. A fermentleben felgyülemlő antiíbiotikus aktivitás a. fermentáció folyamán könnyen meghatározható, ha a fermentációs közegből vett mintákat az ismert csészelemezes módszerrel, Bacillus subtilis mikroorganizmussal vizsgáljuk. A fermentációs közeg 5 . pH-értéke a fermentáció korai szakaszában inkább csökkenésre mutat hajlamot, 24—30 órai fermentáció után azonban a pH-érték fokozatosan emelkedik. Az YL 704 antibiotikum maximális hozamát kb. 48—60 órai fermentáció után 10 érjük el, amikor a fermentációs közeg pH-értéke eléri a kb. 7,4—8,0 értéket. Az YL 704 antibiotikum főként a fermentlében gyülemlik fel; a mikroorganizmusok 15 szaporítása után a micéliumokat és egyéb szilárd anyagokat a szokásos módon, pl. szűrőprés vagy centrifuga segítségéivel, szűrési segédanyagként szükség esetén diatomaföldet alkalmazva, eltávolítjuk. A fermentlé így kapott 20 szűrletéből az YL 704 antibiotikum a szokásos módszerékkel nyerhető ki. Pl. a fermentlé szűrletét valamely vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel, pl. halogénezett szénhidrogénnel, zsírsavészterrel, 4—(8 szénatomos ketonnal vagy al-25 kanoUal semleges pHnerteken extraháljuk és az így kapott kivonatból az oldószert eltávolítjuk, akkor színtelen, gyengén bázisos por alakjában kapjuk az YL 704 antibiotikumot. Eljárhatunk azonban oly módon is, hogy a fermentlé szűr-30 le;tét valamely erre alkalmas adszorbens anyaggal, pl. aktívszénnel, bentonittal, alumíniumoxiddal vagy szilikagéllel kezeljük, az adszorbenst vizes savas aoetonnal vagy rövidszénláncú alkanoUal extraháljuk és az így kapott 35 vizes-szerves kivonatból az YL 704 antibiotikumot kinyerjük. A fent említett módszerek előnyösen kombinálhatók is az YL 704 antibiotikum elkülönítése és tisztítása során. 40 A fenti módon előállított és elkülönített YL 704 antibiotikum nagymórtékben oldódik metanolban, etanolban, butanolban, metilacetátban, etilacetátban, butilacetátban, kloroformban, acet ónban, dietilétenben és benzolban. Kevéssé ol-45 dódik vízben, oldhatatlan ciklohexánban, nhexánhan és petroléterben. Az YL 704 antibiotikumok negatív Tollens-, Fehling-, Molisch-, ninihidrin-, biuret- és vasi(IH)nklorid-reakciót mutatnak, vasi(ni)-thidroxamát-reak'CÍójuk pozi-50 tiv. A vizes brómoldat és a vizes káliumpermanganátoldat színét elhalványítják. Tömény kénsavban vörösesibolya színt, tömény sósavban halvány vöröses színt mutatnak szobahőmérsékleten. Ezek a színeződések kloroform vagy 55 in-ibutanol hozzáadására nem változnak. Az YL 704 antibiotikumokként a fent leírt módon kapott termék legalább kétféle antiíbiotikus hatóanyagot tartalmaz, amelyek egyikét YL 50 704 A elnevezéssel jelöltünk meg; ez a termék tovább bontiható legalább két, YL 704 A4 és YL 704 A2 elnevezésű alkotórészre. A másik anyagot YL 704 B elnevezéssel jelöltük meg, ez szintén tovább bontható legalább két, YL 704 Bt S5 és YL 704 B2 összetevőre. 3
