160173. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pasztillázott analitikai és immunológiai reagensek előállítására
160173 1. példa HCG-antiszérum-pasztillák előállítása összetétel: 8 Szukróz 10,2 g Nátriumkloríd 0,765 g Nátriumhidrogénfoszfát heptahidrát (Na2 H0 4 -7H 2 0) 2,462 g Káliumdihidrogénfoszfát (KH2 Ö 4 ) 0,489 g Desztillált víz q. s. ad 170,0 ml Anti-emberi chorionikus gonadotiopin q. s. 650—800 N. E. HCG/liter érzékenységet biztosító, vizelettel 0, 500, 750, ill. 1000 N. E./l vizelet mennyiségben 5, 5, 3—1, ül. 2—0 reakciót adó mennyiség (Az 5-ös jelzésű reakció teljes agglutinációt, a 0 jelzésű reakció teljes gátlást jelent) A sókat kb. 150 ml vízben 'oldjuk. A kapott oldat pH-ját 0,1 n sósavoldattal vagy 0,1 n nátriumhidroxid-oldattal 7,2 (+0,05) értékre állítjuk, majd az elegy térfogatát vízzel 170 ml-re egészítjük ki. Az elegyet jégfürdőn hűtjük, és a fenti aktivitás eléréséhez szükséges, előre meghatározott mennyiségű anti-HCG-szérumot adunk hozzá. Ezután az oldatot állandóan jeges hűtés közben tároljuk. A hígított antiszérumot Auto-analyzer adagoló szivattyún keresztül tiszta, 0,05 ml-es mikrocseppentőbe vezetjük, és a mikrocseppentőt átöblítjük. A szivattyúból 1—2 ml oldatot vezetünk át a mikrocseppentőn, ügyelve arra, hogy az összekötő csőben ne maradjon buborék. Ezután a szivattyút leállítjuk, és a mikrocseppentőt a fagyasztó oszlop fölé szereljük. A szivatytyút megindítjuk, és fagyasztott pasztillákat állítunk elő. A pasztillákat a fagyasztó oszlopból történő eltávolítás ; után zárt tartályban, hexán alatt tartjuk, és szárazjég-köpennyel, vagy mechanikai hűtőberendezésben —50 — —60 C°-on tároljuk. 2. példa Szenzibilizált eritrocita-^pasztilla előállítása Juh-eritrocita-szuszpenziót szokásos módon formalinnal és tanninnal kezelünk, majd centrifugáljuk, 6,4 pH-értékű foszfát-nátriumklorid pufferoldattal mossuk, végül a pufferoldattal elegyítjük. Az elegyhez azonos térfogatú, 50 N. E/ml koncentrációjú pH = 6,4 értékű pufferoldattal készített HCG-oldatot adunk. Az elegyet 48 órán át 37 C°-on tartjuk, majd az elegy formaldehid-koncentrációját formaldehid adagolásával 0,25 vegyes %-ra állítjuk be. A kapott elegyet 15 órán át 37 C°-on tartjuk, az eritrocitákat centrifugálással elkülönítjük, fiziológiás konyhasó-oldattal mossuk, 0,1% marha-szérumalbumint tartalmazó fiziológiás konyhasó-oldatban szuszpendáljuk, és a 10 térf. %-os szuszpenziót 0—4 C°-on tároljuk. Ezután az eritrocitákat centrifugálással elkülönítjük, fiziológiás konyhasóoldattal mossuk, és szokásos módon fagyasztva szárítjuk. Egy másik el járás változat szerint a formalinnal és tanninnal kezelt sejteket pH = 7,6 értékű foszfát — nátriumklorid pufferoldattal mossuk, majd a pufferoldatban szuszpendáljuk, és a szuszpenzióhoz azonos térfogatú, 50 N. E./ml HCG-t tartalmazó oldatot adunk. Az elegyet 18 órán át 56 C°-on tartjuk, majd mossuk, 0,9%-os nátriumklorid-oldatban szuszpendáljuk, és azonos térfogatú 1,5% formaldehidet és 0,9% konyhasót tartalmazó oldattal elegyítjük. Az elegyet kb. egy hétig 2—8 C°on tároljuk, majd az eritrocitákat ismét 0,9%-os nátriumklorid-oldattal mossuk, és 6% szukrózt és 1,5% marha-szérumalbumint tartalmazó, 7,2 pH-értékű foszfátpuffer-oldatban szuszpendáljuk. A 6,6%-os szuszpenziót fagyasztva szárítjuk, és felhasználásig szárazon tároljuk. Az így szenzibilizált juh-eritrocitát, amely felületén kémiailag HCG-t kötött meg, puffer és hígítószer, pl. szukróz vagy marha-szérumalbumin elegyében szuszpendáljuk. A szuszpenzió 0,05 ml-enként egy HCG-meghatározáshoz elegendő mennyiségű reagenst tartalmaz. Az eritrocita-pasztillákat a következőképpen 30 állítjuk elő: a fagyasztva szárított, szenzibilizált eritrocitát eredeti térfogatának 5 /o-ára hígítjuk, azaz a fagyasztva szárítás előtt kapott, 6,67%-os szuszpenzió térfogatának 5 /6-részének megfelelő mennyiségű desztillált vízzel elegyítjük. A szusz-35 penziót mikrocseppentőbe szivaítyúzuk. Az eritrocita kiülepedésének megakadályoása céljából összekötő vezetékként kis belső átmérőjű (0,023) polietilén-csövet használunk, és az eljárás alatt a szivattyút legföljebb csak pillanata kre állítjuk le. A szuszpenziót a korábbiakban ismert módon kalibrált cseppekre oszlatjuk, és szárazjég-metilcellosziolv eleggyel hűtött hexán-oszlopon ve*zetjük át a cseppeket. A hexán hőmérséklete az oszlop felszínén kb. szobahőmérsékletnek megfelelő érték, míg az oszlop aljának környezetében —70 C°. A pasztillákat összegyűjtjük, és az 1. példában leírt körülmények között tároljuk. 10 15 20 25 40 45 50 55 60 65 3. példa Pufferanyag-pasztillák előállítása összetétel: Szukróz 10,2 g Nátriumklorid 0,765 g Nátriumhidrogénfoszfát heptahidrát (Na2 HP0 4 -7H 2 0 2,462 g Káliumdihidrogénfoszfát (KH2 P0 4 ) 0,489 g Dinátrium-etiléndiamin-tetraecetsav 2,720 g Desztillált víz q. s. ad 170,0 ml Anilinkék-fekete (savfekete 1.) 0,2 ml Stockoldat 4
