160173. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pasztillázott analitikai és immunológiai reagensek előállítására

160173 10 A szukrózt és a felsorolt sókat kb. 150 ml vízben oldjuk. Az oldat pH-ját 5,0 n nátriumhidroxid-oldattal 7,2 értékre állítjuk, majd az elegy térfogatát vízzel 170 ml-re egészítjük ki. Ezután az elegyhez 0,2 ml Stock-színezékoldatot adunk (a színezékoldat koncentrációja 1,0 mg/ ml; hűtőszekrényben tároljuk). Ezt az oldatot a pasztillák előállítása előtt nem kell hűtőszekrényben tartani. A pufferanyag-pasztillákat az antiszérumpasztillákhoz hasonlóan állítjuk elő, és a korábban leírt módon kezeljük és tároljuk a kész pasztillákat. 4. példa Terhesség megállapítása A 2. ábrán feltüntetett tartály aljába egy-egy antiszérum-, HCG-nal szenzibilizált eritrocita-és puffer-pasztillát helyezünk. A tartályba bürettából vizsgálandó vizeletmintát csepegtetünk, majd négyszeres térfogatú vizet adunk az elegyhez. Ezután a tartályt lezárjuk, 30 másodpercig . rázzuk, majd 2 órán át állni hagyjuk. Ezután megnézzük, hogy képződtek-e a tartály alján agglomerátumok. A pozitív terhességi reakciót gyűrűképződés jelzi. 5. példa A pasztillás készítmények felhasználása diagnosztikai enzimvizsgálatban A szérum glutamin-piruvát-transzamináz aktivitásának (S. G. P. T.) ultraibolya fénnyel végzett kinetikai meghatározása a* következő lépésekből áll: 1. Elemzési reakció L-anilin +a-keto-glutársav G. P. T. piroszőlősav+L-glutaminsav 2. Indikátor-reakció: Piroszőlősav+NADH2

L. D. H. L-tejsav+ +NAD A rövidítések jelentése a következő: G. P. T.=glutamin-piruvát transzamináz NADH2=nikotinsayamid-adenin-dinukleotid, redukált forma NAD=nikotinsavamid-adenin-dinukleotid, oxidált forma L. D. H.=tejsav-dehidrogenáz Egy molekula, az (1) reakcióban képződő piroszőlősav egy molekula NADH2

-t oxidál NAD-vá. Az optikai sűrűség csökkenését ultraibolya fényben. 334 nm hullámhosszon, 25 C°-on, fotometriás küvettában határozzuk meg. a) Puffer-enzim-pasztillák előállítása A következő reagens-oldatokat állítjuk elő: 1. oldat: 250 ml 3 mólos vizes redukált nikotinamid-adenin-dinukleotid-oldat. A friss oldatot felhasználásig 0—4 C°-on tároljuk. 2. oldat: 500 ml, legalább 180 000 N. E. LDH/1 5 aktivitású vizes tejsav-dehidrogenáz oldat. A friss oldatot felhasználásig 0—4 C°-on tároljuk. 3. oldat: 1250 ml 0,2 mólos vizes L-alanin-ol* dat. 4. oldat: 3000 ml vizes, 5 millimólos etilén-10 diamin-tetraecetsav és 50 millimólos trietinolamin-oldat. Az oldat pH-ját 7,5 értékre állítjuk be. A 3. és 4. oldatot gondosan elegyítjük, és 0—4 C°-ra hűtjük. Ezután hozzáadjuk az 1. és 15 2. oldatot, és az elegyet gondosan keverjük. A fenti oldatból az 1. példában leírt módon puffer-enzim-pasztillákat állítunk elő. A pasztillákat a 2. ábrán vázolt kis polietilén tartályokba töltjük. Egy-egy tartály 0,5 ml pufferolt 20 oldatnak megfelelő mennyiségű pasztillát tartalmaz. Liofilizálás után a tartályokat vörös csavaros kupakkal zárjuk le. 25 b) Puffer-szubsztrátum pasztillák előállítása A következő reagens-oldatokat állítjuk elő: 5. oldat: 200 ml 0,2 mólos vizes nátrium-ct-keto-glutarát-oldat. A friss oldatot felhasználásig 0^4 C°-on tároljuk. 30 6. oldat: 800 ml, a 4. oldatnak megfelelő összetételű vizes oldat. A 6. oldatot 0—4 C°-ra hűtjük, majd gondosan elegyítjük az 5. oldattal. Az 1. példában leírt eljárás szerint a fenti ol-3g datelegyből 0,1—0,1 ml oldatnak megfelelő anyagot tartalmazó pasztillákat állítunk elő. A pasztillákat a 2. ábrán bemutatott kis polietilén tartályokba töltjük. Egy tartály egy pasztillát tartalmaz. Liofilizálás után a tartályokat kék 40 csavaros kupakkal zárjuk le. c) Ultraibolya fénnyel végzett kinetikai meghatározás Egy, az a) pontban leírt készítményt tartalma-45 zó tartályba Marburg-pipettával 0,5 ml desztillált vizet, és 0,2 ml vizsgálandó szérumot töltünk. Az elegyet összerázzuk, és a kapott oldatot kvantitatíve áttöltjük egy Eppendorf spektrofotométer küvettájába. A küvettát 25 C°-on 50 tartjuk. A reakció előszakasza kb. 10 percig tart, ezalatt a minta endogén szubsztrátuma átalakul. Az elegy optikai sűrűségét állandó érték beállásáig leolvassuk. Ezután felnyitunk egy kék kupakos tartályt, és a tartályba Marburg-pipettá-55 val 0,1 ml desztillált vizet töltünk. Az átlátszó oldatot ezután kvantitatíve a küvettába töltjük, és a küvette tartalmát gondosan összekeverjük. Az elegy optikai sűrűségét 30 másodpercenként megmérjük, az optikai sűrűség csökkenését 60 legalább 2 percig észleljük. A kapott értékekből átlagot számítunk, és az alábbi képlet alapján kiszámítjuk a vizsgálandó anyag S. G. P. T. aktivitását: Aktivitás (N. E.)=optikai sűrűségváltozás/ 65 percX667J

ttmól/perc. liter, &