159996. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 11 béta, 17 alfa - dihidroxi - A - norprogeszteron és származékai előállítására

}P986 olaj, lenmagolaj, gyapotmagolaj, földimogyoróolaj, kókuszzsír, kukoricaolaj, ricinusolaj, szezámolaj, nyers pálmaolaj, birkafaggyú, spermaolaj, olívaolaj, trisztearin, tripalmitin, triolein és trilaurin. A találmány céljára használható zsírsavak például a sztearinsav, palmitinsav, olajsav, linoleinsav és mirisztinsav. A találmány céljára használható nitrogénforrások lehetnek szervesek (pl. szójababliszt, kukoricalekvár, élesztőkivonat, húskivonat és szeszmoslék) vagy szintetikusak (pl. egyszerű szerves vagy szervetlen vegyületek, mint az ammóniumsók, alkálifémnitrátok, aminosavak és karbamid). Fermentáció közben kellő steril levegő betáplálásáról kell gondoskodni, például hagyományos módon a közeg nagy felületét levegőnek téve lei vagy süllyesztett levegőztetett tenyésztést alkalmazva. Az átalakítani kívánt vegyület a tenyészethez adható az inkubálás közben, vagy bevihető a közegbe sterilizálás vagy beoltás előtt. Ä vegyület koncentrációja a tenyészetben előnyösen 0,01—0,1 s%, de lehet több, vagy kevesebb is. A tenyésztés időtartama (vagy inkább a vegyületnek az enzim hatásának történő kitétele) jetentősen változhat, 24—96 óra lehet, de ennél több, vagy kevesebb is. A fermentáció után az A vegyületet B -'v vegyületté acilozzuk egy savanhidriddel, például ecetsavanhidriddel perklórsav jelenlétében, és így a ir/?,17a-diaciloxi-származékot kapjuk. Az utóbbi vegyületet azután egy gyenge bázissal, például alkálifémkarbonáttal (pl. káliumkarbonáttal vagy nátriumkarbonáttal) kezelve előállítjuk a li;/?-aciloxi-17:Cfr-ol-származékot, a találmány szerinti eljárás egy másik végtermékét. A találmány szerinti eljárást a következő példák szemléltetik. 1. példa: ll/?,17a-Dihidroxi-A--norprogeszteron 1. Fermentáció Curvularia lunata (NRRL 2380) mikroorganiz'must tenyésztünk ferde agáron, amelynek az összetétele a következő (A): glukóz 10 g élesztőkivonat 2,5 g dikáliumhidrogénfoszfát 1 g agar 20 g desztillált vízzel kiegészítve 1 literre. Kéthetes tenyészet felületéről vett telepet 5 ml 0,01 %-os vizes nátriumlaurilszulfát-oldatban szuszpendáltunk. Ebből a szuszpenzióból 1—1 ml-rel beoltottunk nyolc 250 db ml-es Erlenmeyer-lomibkban levő 50—50 ml következő összetételű steril táptalajt (B): 15 20 20 35 40 45 50 60 glukóz 30 g ezójababliszt 20 g szójabábolaj 2,2 g kalciumkarbonát 2,5 g desztillált vízzel kiegészítve 1 literre. Állandó rázó keverés (280 fordulat percenként, 5 cm löket) közben 25 °C-on végzett kb. 48 órai inkubálás után 10 tf.%-os adagokat át-10 vittünk harmincnégy db 250 ml-es Erlenmeyer-lomfoikban levő következő összetételű 50—50 ml sterilizált táptalajba (C): kukorioalekvár 6 g ammóniumdihidrogénfoszfát 3 g élesztőkivonat 2,5 g glukóz 10 g kalciumkarbonát 2,5 g desztillált vízzel kiegészítve 1 literre. Ezután 300 /xg/ml szteroidot adtunk hozzá, minden lombikhoz 0,25 ml 60 mg/ml koncentrációjú N,N-dimetilformamidos 17a-hidroxi-A-norprogeszteron oldatot adva. Összesen 510 25 mg-ot fermentáltunk. Mintegy 5 napos további inkubálás után a fent leírttal azonos körülmények között a lombikok tartalmát egyesítettük, és a fermentlevet átszűrtük egy Seitz-szűrőn. A lombikokat, a micéliumot és a szűrőt 100—100 ml meleg vízzel többször mostuk. Az egyesített szűredék és mosófolyadékok térfogata 1800 ml volt. 2. Elválasztás Az így kapott szűredéket 3 ízben 600—600 ml kloroformmal extraháltuk. A kloroformos kivonatodat 3 ízben 600—600 ml vízzel mostuk, nátriumszulfáton megszárítottuk, és szárazra be^ pároltuk. A maradékot semleges alumíniumoxidon (V aktivitás) kromatogratfáltuk, 3% metanolt tartalmazó kloroformot használva kifejlesztő oldószerként.. A fő ultraibolya fényben látható sávot etilacetáttal extrahálva termékek keverékét kaptuk; ezt tovább tisztítottuk kovasavgélen kromatografalva, etilacetátot használva kifejlesztő oldószerként. A fő ultraibolya fényben látható sávot 20% metanolt tartalmazó etilacetáttal extrahálva, az oldatot bepárolva és a maradékot metanol és izopropiléter elegyéből kikristályosítva 4 mg ll'/?,17<7-dihidroxi-A-norprogesizteront kaptunk 208—209° olvadásponttal. Hozam 8%. A metanol és izo-55 propiléter elegyéből átkristályosított analitikai minta 210—211 °C-on olvadt. TMS iKBr 2,87, 5,88, 5,99 és 6,20 /t; tCDCl3

8,97 (e, 18—Me), 8,59 (e, 19—Me), 7,72 (e, 21—CH3), 5,64 (k, 11«—H) és 4,28 (e, 3—H); (e = erős, k = közepes). Összetétel: C20H28O4: számított: C 72,26, H 8,49% *> talált: C 72,27, H 8,49% 2