159995. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-aszparagináz kinyerésére

MAGTAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI 'JIVÁTAL SZABADALMI LEÍRÁS 159995 Nemzetközi osztályozás: C 07 g 7/028 Bejelentés napja: 1969. III. 12. (SU—419) Közzététel napja: 1971. VII. 29. Megjelent: 1972. XII. 30. X. /(/(äldn^ Feltalálók: Laskin Allen I., Princeton, Riobison Robert S., North Brunswick, New Jersey, Amerikai Egyesült Államok Tulajdonos: E. R. Squibb and Sons, Inc., New York, Amerikai Egyesült Államok Eljárás L-aszparagináz kinyerésére A találmány tárgya új eljárás az L-aszparagináz enzimnek Escherichia coli sejtekből való kinyerésére. Közelebbről a találmány az E. coli sejtek elroncsolásával felszabadított ki vonatnak kis mennyiségű ribonukleázzal, dezoxi- 5 ribonukleázzal vagy keverékével való kezelésére vonatkozik. L-aszparagináznak a találmány szerinti eljárással való előállítása során bármilyen E. coli 10 sejtek felhasználhatók, bár előnyösebb, ha a sejteket előzetesen megszárítjuk liofilizálással vagy aoetonos kezeléssel. Az acetonos szárítás előnyösebb, és célszerűen úgy hajtható végre, hogy a centrifugálással kapott nedves E. coli í5 sejtekből álló pépet desztillált vagy ionmentesített vízben szuszpendáljuk, a szuszpenziót hideg acetonba öntjük, és összekeverés után az aceton által kicsapott sejteket szűrőn elválasztjuk, és megszárítjuk. 20 Ezután a sejtek az enzimet tartalmazó sejtmentes kivonat előállítására ismert bármilyen módon szétroncsolhatok. Sejtek elroncsolására különféle módszerek ismeretesek, például az ultrahangos kapcsolás vagy más mechanikus 25 eljárások, mint például a kolloidmalomban való őrlés. A találmány szerinti eljárás előnyös kiviteli módja szerint sejtlízist végzünk oly módon, hogy az E. coli sejteket lizozimmel keverjük puffer jelenlétében, hogy a pH kb. 5 és 9 30 között legyen, és a sejtroncsokat centrifugálással vagy szűréssel eltávolítva sejtmentes kivonatot kapunk. Ügy is eljárhatunk, hogy az E. coli sejtek vizes szuszpenzióját nátriumhidroxiddal 7,5—8,0-ra beállított pH-val lizozimmel keverve idézzük elő a sejtlízist. Sejtmentes kivonat úgy is előállítható E. coli sejtekből, noha sókkal kevésbé tisztán és roszszabb hozammal, hogy a nedves sejteket a fentemlített módon őröljük, ultrahanggal roncsoljuk vagy lizozim hatásának tesszük ki. Mindeddig azonban az ilyen sejtmentes kivonat előállítása és az enzimnek ezt követő kinyerése szűréssel és centrifugálással nagy nehézségekkel járt a sejtlízisből származó kivonat rendkívül nagy viszkozitása miatt. A nagy viszkozitás okozta szűrési nehézségeket megkísérelték a szuszpenziónak 50% vízmentes alkohollal való hígításával elkerülni fJ. Bact. 95, 2118 (1968)]. Az eljárás nyilvánvaló hátránya a hígítószer és a berendezés többletköltsége és az, hogy sokkal nagyobb térfogatot kell kezelni. Más ismert módszer a szuszpenziónak adalékkal való megtörése. Olykor sikerül a szuszpenziót nátriumkloriddal vagy oktanol habzásgátló szerrel megtörni. Találmányunk célja a kivonatok tisztítása során az említett nagy viszkozitás okozta nehézségek leküzdése. Ezt meglepetésünkre és vi-159995