159730. lajstromszámú szabadalom • Eljárás száraz eznzim készítmények előállítására
5 159730 szűrfet pH-érrtjékét nátriuimkatriboMtoMattal 7,0-re beállítjuk. A szűrlet hőmérséklete 22 C\ Ezt követően a szűrlethez egy Syntan típusú szintetikus cserzőanyag oldatát adjuk. A szintetikus cserzőanyag ebben az esetben krezolok és aceton polikondenzácios terméke, a kondenzálási termék szulfonálva van. (1.1 a típus: \ X= C(CH3 ) 2 , Y = — OH, n = l, o = l, p = / = 0, m íl 3). A szánítetíkuis cserzőanyag koncönitrtáciióijia aiz efegylban kb. 2! % termék, illetve 0,8% aktív esemzőanyag. A szintetikus cserzőamyagöit haisznáüiat előitt kíevés vízzel hígítjuk és pH érttékét oátakmikaribcmátolidatM 7-re beállítjuk. A sízinitótikus cserzőanyag bevitele után a íszűiflletlből kiviáló esapladéfooit cenitriiugálással elkülönítjük és 100—1O0 iml acetonnal; 0 (-5 C°-oin mossuk. Az így tiiiszítítatt iterirruéket 30 C°~ on és 2i0 (torr nyomáson számítva 3,70 g szárazkészibniényt kapuink. A tenyészet szűrletének összakitivitása 2,140.500 amiliáBegység, a szárazkészítanény íöisszakitivttása 1,7)615.000 eimiMzegység. Az akltiMtások alapján számított kitermelés 82,5.%. 2. példa Proteázkészítmény Proteáz kicsapására Bacillus subtilis tenyészet szik-létét használjuk. 1000 ml, 16.7&0 prtoteázegység összaktivitású szűrlethez 7,0 pH értéken ammóniával ugyancsak 7,0 pH értékre beállított szintetikus cserzőanyagoldatot adunk. A cserzőanyag koncentrációja kb. 1,5% termék ill. 0,6% aktív cserző anyag. Az alkalmazott szintetikus cserzőanyag többértékű fenolok, formaldehid és naftolszulfonsavak polikondenzácios terméke (1,1 típus: X = —CH2—, Y = — OH, m = 0", o=;2i, p = 0 és m 3). Az elegyet 2 'órán át 30 C°-on keverjük, imagid a képződött csapadékot centrifiulgiálljxik, 1100—100 ml aoationtíal kétszer extraháljuk és vákuumban szárítjuk. 2J2: g 13.200 proteázegység összaktivitású szárazkészítményt kapunk. Az aktivitások aliapján a kitermelés 78,9%. 3. példa Proteáz-készítmény Bacillus subtilis tenyészetének proteáztartalmiú, 1000 ml szűrletéhez, melynek összaktivitása 29 800 piröteázegység, pH = 6 értéken hígított nátriumhidroxidoldattal ugyancsak 6,0 pH értékre beállított szintetikus cserzőanyagoldatot adunk (koncentráció = 2% a termékre). Az alkalmazott szintetikus cserzőanyag szénhidakkal rendelkező fenolkarbonsavaknak ligninszulfonsavakkal alkotott polikondenzácios terméke) 1.1 típus: X = —CH2 — Y =—OH,n = 0, o = 1, p = l és m^?l3; 6 gyűrűhöz 1 ligninszulfonsav tartozik). Az elegyet 40 C°-on 1 órán át keverjük, a csapadékot elkülönítjük és azt először 5Q ml vízzel jól elkeverjük, majd 0—10 C°-on 30 ml izopropilalkohol hozzáadásával feloldjuk. Az jük, ekkor a proteáz a rendszerből kiválik és 5 centrifugálással izoláljuk. A centrifugálás során kapott szűrlet tartalmazza a tenyésztőoldatban izqpnoipilalikoihol koncentrációt 65%-ra növellevő sók és a cserzőanyag legnagyobb részét. A csapadék súlya vákaiuimlbain szárítva 1,60 g 10 aktivitása 22.250 egység. Az aktivitásokból számolt kitermelés 74,8%. 4. példa: Lichenáz-készítmény Lichenáz kicsapásához Bacillus subtilis tenyészetének szűrletét haisznélguk. 1000 ml, 43.000 lichenázegység összaktivitású. 5,5 pH értékű szűrlethez ugyancsak 5,5 pH értékre beállított 20 szintetikus cserzőanyagoldatot adunk. A cserrendszerben 2% terméknek ill. 0,7% aktív cserzőanyag koncentrációja a kiosapáisirai kerülő zőanyagnak felel meg. A rendszer hőmérséklete 15—20 C°. A jelen esetben használt szintetikus 25 cserzőanyag fenolszulfonsav polikondenzácios terméke (1.2 típus: X =—S02, Y =— OH, n = = 0, o = 1, p = 0 és m = 4). Az elegyet 1 órán át keverjük, majd a kivált csapadékot centrifugáljuk, 50 ml vízzel jól elkeverjük és 30 ml etanol 30 hozzáadásával 0—1|0 C°^om feloldjuk. Az eta- : nol-koncentrációt 70 térf.%-ra növelve az enzimtartalmú csapadék kiválik és ezt centrifugálással elkülönítjük. A csapadékot 22 C-on vákuumban szárítjuk. 4,5 g szárazkészítményt ka-35 punk, melynek összaktivitása 36 000 lichenázegység. Az aktivitásokból számolt kitermelés 83,7%. 5. példa Glukanáz-készítmény 40 Bacillus subtilis tenyészetének 8000 ml, árpa-/?-glukánt lebontani képes enzimkomplexet tartalmazó, 187.000 glukanázegység összaktivitású szűrletéhez 6,5 pH értéken ugyanerre a pH , értékre beállított szintetikus cserzőanyagoldatot adunk. A cserzőanyag koncentrációja 0,5% termék, ill. 0,2% aktív oserzőainyag. Az enzim kicsapásához aiminiolenoszulfoinsaiviak polkondenzációs termékét használjuk (1.4 típus: X = 50 = — S02 NH— , Y = — NH2 , n = 0, p = 0, o = 1 és m >_6). Míg az 1—4. példákban anionos, a jelen esetben amfotér jellegű szintetikus cserzőanyagot használunk. Az elegyet 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük, a csapadékot elkülönítjük és egyszer 300 ml 80 térf.%-os, egyszer pedig 200 ml 65 térf.%-os acetonnal extraháljuk. 11,5 g száraz készítményt kapunk, melynek összaktivitása 149.000 glukanázegység. A kitermelés 79,6%. 6. példa Karboxime tilcelluláz-készítm ény Aspergillus niger tenyészetének 2000 nil, ösz-65 szesen 3260 egység karboximetilcelluláz-aktivi-3
