159633. lajstromszámú szabadalom • Fermentációs eljárás citromsav előállítására
17 159633 18 B. Az oltóanyag elkészítése, második lépés: Az alábbiakban felsorolt komponenseket 17,7—22,8 cm átmérőjű hengeres fermentációs edénybe helyezzük, amelynek térfogata Ikb. 4 liter. Ezt központos elhelyezésű keverővel szereljük fel, amely 3 db 22,2 mm széles lapáttal van ellátva és mindegyik 22—25 mm hosszúságban nyúlik ki a tengelyről és a vízszinteshez képest 20°-os szöget zár be. A fermentációs közeg komponensei a következőik: kukoricalekvár 10 g ammóniumszulfát 8 g víz 2 liter. Az oldatot 5 pH-értékre állítjuk be, majd d következő komponenseket adagoljuk: kalciumkarbonát 30 g n-hexadekán 154 g Az anyagokat 30 percig gőzzel fűtött autoklávban 121 C°-on sterilezzük. A közeget lehűtés után kb. 100 ml A lépés szerint előállított élesztő-sejtszuszpenzióval oltjuk be. A keverő tengely alatti részébe közvetlenül levegőt vezetünk be, a keverőt pedig 1725 fordulatszámmal működtetjük. A levegőztetési arány V2 térfogat levegő/közegtérfogat/perc és a fermentációt 48 óra hosszat 25—25 C°-on végezzük. C. Fermentáció: Az alábbiakban felsorolt komponenseket a B műveletben ismertetett fermentációs reaktorba adagoljuk: ammóniumszulfát 12 g kiáliumdihidrogénfoszfát 4 g víz (5,0 pH-értékre beállítva) 2 liter A megfelelő pH-érték beállítása után következő komponenseket adjuk hozzá: kalciumkanbonát 40 g n-hexadekán 231 g A közeget a B lépés szerint sterilezzük, lehűtjük, majd a B lépés szerint előállított 100 ml élesztősejt szuszpenzióval beoltjuk. A fermentációs közeget a B lépés Szerint levegőztetjük és keverjük, a fermentációt 138 óra hoszszat 25—26 C°-on végezzük. A termelt citromsav-^monohidrát mennyisége piridin-ecetsavanhddrides módszerrel meghatározva 218 g (a szénhidrogénre számított hozam 89%). 7. példa: A 6. példa szerinti műveleteket megismételjük, azzal az eltéréssel, hogy a 6. példa G lépésében káliumdiihidrogénfoszfát helyett 16,0 g kukoricalekvárt alkalmazunk. 138 órás fermentációs idő után a citromsav monohidrát menynyisége 238,5 g (a bevitt szénhidrogénre számított hozam: 97,5%). 8. példa: A 7. példa szerinti műveleteket megismételjük, azzal az eltéréssel, hogy a C lépésben 10 n-hexadekán helyett C14 —C i6 n-paraffinok keverékét használjuk (Continental Oil Company, Petrochemical- Department, New York, gyártmánya). 138 órás fermentáció után a termelt citromsav-monahidrát mennyisége 221,0 g (a !5 bevitt szénhidrogénre számított hozam 90,4%). 9. példa: 20 A 7. példa szerinti műveleteket megismételjük, azzal az eltéréssel, hogy a C lépésben C12 —C 14 n-paraffinok keverékét használjuk (Continental Oil Company, Petrochemical, Department, New York, gyártmánya). 138 órás 25 fermentáció után a termelt citromsav mennyisége 188,7 g (a bevitt szénhidrogénre számított hozam 77%). 10. példa: A 7. példa szerinti műveleteket megismételjük, azzal az eltéréssel, hogy a C lépésben C10 —C 16 n-paraiffinok keverékét használjuk (Continental Oil Company, Petrochemical Department, New York, gyártmánya). 138 órás fermentáció után a termelt eitromsav-monohidrát mennyisége 196,0 g (a bevitt szénhidrogénre számított hozam: 80%). 11. példa: A 7. példa szerinti műveleteiket megismételjük, azzal az eltéréssel, hogy a C lépésben n-hexadekán helyett NT—200 elnevezésű szénhidrogénkeveréket alkalmazunk (Union Carbide Company, New York, gyártmánya, a termék analízise a 4. példában van ismertetve). 138 órás fermentáció után a termelt citromsav menynyisége 219 g (a bevitt szénhidrogénre számított hozam 89,4%) 1:2. példa: 55 A 7. példa szerinti műveleteiket megismételjük, azzal az eltéréssel, hogy a fermentációnál nnhexadekán helyett 28,9 g mennyiségben a következő szénihidrogéneket használjuk: n-defcán, n-nonán, n-undekán, n-tridekán, n-pentadekán, n-hexadekán és n-oktadekán. 1:38 órás fermentáció után a termelt citromsav mennyisége 198,5 g (a bevitt szénihidrogénre számított hozam: 6R 81,0%). 9
