159366. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szubsztituált pregna-4,16-dién-3,20-dionok előállítására
5 159366 6 1. példa: 14a,2il-Dihidrqxipregna-4,16-dién-3,20-dion Thamnidium elegáns (ATCC 18191) mikro- 5 organizmust tenyésztettünk a következő táptalajt (A) tartalmazó ferde agáron. glukóz 10 g élesztőkivonat 2,5 g dikáliumhidrogénfoszfát 1 g agar 20 g desztillált vízzel kiegészítve 1 literre. Két kéthetes felületi tenyészetet szuszpendáltunk 5 ml 0,01% nátriumlaurilszulfátot tartalmazó vízben. Ebből a szuszpenzióból 1—1 mlrel beoltottunk nyolc 250 ml-es Erlenmeyer-lombikban 50—50 ml következő összetételű steril táptalajt (B): kukoricalekvár 6 g ammóniumdihidrogénfoszfát 3 g élesztőkivonat 2,5 g glukóz 10 g kaljciumkarbonát 2,5 g desztillált vízzel kiegészítve 1 literre. 25°-on állandó rázás közben (percenként 280 fordulat, 5 cm löket) végzett 24 órai inkubálás után 10 tf%, fermentlevet átvittünk negyven 250 ml-es Erlenmeyer-lombikban levő 50—50 ml frissen sterilizált B táptalajba. Ezután hozzáadtuk ía szteroidot (200 i/Ag/ml), minden lombikba 0,25 ml 40 mg/ml koncentrációjú steril 21-acetoxipregna-4,16~dién-3,20-diont öntve. N,N-dimetilforrnamidos oldatban. Összesen 400 mgot fermentáltunk. 10 15 20 25 30 35 40 Mintegy 28 órai, a fent leírttal azonos körülmények között végzett inkubálás után a lombikok tartalmát egyesítettük, és a fermentlevet Seitz-féle derítőszűrőn átszűrtük. A lombikokat, a micéliumot és a szűrőt több 100 rnl-ü.s adag meleg vízzel mostuk. Az egyesített szűredék és mosáfolyadékok térfogata 2000 ml volt. Ezeket 3 ízben 400—400 ml kloroformmal extraháltuk, a kivonatokat egyesítettük, vízzel mostuk, és csökkentett nyomás alatt bepároltuk. A .267 mg maradékot vékonyréteges kromatografálással tisztítottuk HF254 kovasavgélt alkalmazva: abszorbensként, és 1:1 térfogatarányú etilacetát-kloroform elegyet kifejlesztő oldószerként. Az Rf kb. 0,4 sávot 20% metanolt tartalmazó etilacetáttal eluálva, és az oldatot bepárolva, majd a maradékot aceton és hexán elegyéből kikristályosítva 134 mg 14a,:21--dihidroxipregna-4,16-dién-3,'20-diont kaptunk 184—185° olvadásponttal; [a]2S D = +112° (kloroformban). 50 55 60 X^x 240 ro/t (s, 24,000), 1^2,88, 2,90, 6,00, aiMe 6,06, 6,20, 6,31 /x, TC DCI 4 8,86 (e, 18—CH3 ), 8,76 65 (e, 19—-CH3), 5,48 (k, 21—CH2 ), 4,25 (e, 4—H), 3,25 (t, 16—H) :(e = erős, 'k = közepes). Összetétel: C21 H 28 0 4 (344,44): számított: C 73,2:2, H 8,19% talált: C 73,15, H 8,18% 2. példa: 14«,: 21-Dihidroxipregna-4,16-dién-3,20-dion-21-acetát 31 mg 14a,21-dihidroxipregna-4,16-dién-3,20--dionnak 0,5 ml száraz piridinnel és 0,25 ml ecetsavanhidriddel készült oldatát szobahőmérsékleten 16 óra hosszat állni hagytuk. Ezután csökkentett nyomás alatt bepároltuk, a maradékot kloroformban oldottuk, és az oldatot vízzel mostuk. A kloroformot csökkentett nyomás alatt ledesztilláltuk, és a maradékot aceton és hexán elegyéből kikristályosítva 17,1 mg 14cc,21--dihidro'XÍpregna-4,Í6-dién-3,20-dion-l 2U -acetátot kaptunk 215—217° olvadásponttal; [a]25 D — = +102° (kloroformban). Aaik 240 mu (e, 2:4,600); X Nujoi 2,98, 5,72, 5,97, 6,08, 6,20, 6,30 p,; tcríci! 8,89 (e, 18—CH3 ), 8,78 (e, 19—CH3 ), 7,83 (e, 21—OAc), 5,04 (e, 21—CH 2 ), 4,30 (e, 4—H), 3,27 (t, 16—H). Összetétel: C23 H S0 O 5 (386,47): számított: C 71,48, H 7,82% talált: C 70,51, H 7,66% 3. példa: 15^,21 -Dihidr oxipr egna-4,16-dién-3,20-dion Syncephalastrum racemosurn (ATCC 18192) mikroorganizmust tenyésztettünk a következő ferde agar táptalajon (A): glukóz 10 g élesztőkivonat 2,5 g dikáliumhidrogénfoszfát 1 g agar 20 g desztillált vízzel kiegészítve 1 literre. Két kéthetes felületi tenyészetet szuszpendáltunk 5 ml 0,01%. nátriumlaurilszulfátot tartalmazó vízben. Ebből a szuszpenzióból 1—1 mlrel beoltottunk nyolc í250 ml-es Erlenmeyer-lombikban 50—50 ml következő összetételű steril táptalajt (B): kukoricalekvár 6 g ammóniumdihidrogénfoszfát 3 g élesztőkivonat 2,5 g glukóz 10 g kalciumkarbonát 2,5 g, desztillált vízzel kiegészítve 1 literre. 3
