159277. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a cefalosporin C nehezen oldható fémkomplexeinek előállítására
159277 6 Kiindulási anyagként szolgáló cefalosporin C tartalmú oldatok előállításához felhasználjuk a savas hidrofil természetes anyagok, pl. antibiotikumok, növekedést-elősegítő anyagok, vitaminok fermentációs, folyadékokból való izolálására ismert módszeréket. Ilyen 'módszerként említjük az alábbiakat: 1. Adszorpció, ill. abszorpció pl. aktívszénen, mint amilyen a „Norit" (Moesch und Comp. Zürich terméke); bázikus adszorbenseken pl alumíniumoxidon; nem-ionos derítő- és/Vagy adszorpciós gyantákon, pl. „Asmit"-on (feníléndiamin-formaldehid^kondenzációs termék, az Imacti-Maatsich gyár terméke), „Amberlite" XAD—1-en, XAD—2-n XAD—4-en, vagy XAD—5-ön (polistirol-polimeiizátum, Rohm és Haas gyár terméke), „Amberlite" XAD—7-en vagy XAD—8-on (aki ilsav-polimerizátum); bázikus ioncserélőn, pl. „Amiberu'te" IR—<4B-n (fenol- és primer ill. szekunder, gyengén bázikus aminocsoportofcat tartalmazó poliaimin kondenzációs terméke), „Amberlite" IR—45-ön, IRA— —93-on (stirol-divinilibenzol-polimerizátiumok, amelyéken primer, szekunder és tercier gyengén bázikus aminocsoportok vannak), „Amberlite" XE—265-ön (gyengén bázikus poliamin), „Amberlite" 68-on (metakrilsav-polimerizátum, gyengén bázikus), „Amberlite" IRA—400-on, IRA—401-en, IRA—402nn, IRA—410-en (stiroldivinilbenzol polimérizátumok, gyengén bázikus kvaterner amlnocsoportokkal), „Amberlite'' LA—1-en, LA—2-n, vagy LA—3-on (magas molekulasúlyú, folyékony szekunder vagy primer amin-komponensek); vagy más cégek megfelelő ioncserélő gyantáin, mint amilyen pl. a „Dowex 1—4" (Dow Chemical Co.), „De-Acidit" FF (The Permutit Co.). „Imac" A 13, A 17, A 20, S. 5—40 (Imaoti Maatseh); 2. Oldószerek-közti megoszlás, pl. víz és fenil vagy alkilszubsztituárt fenolok között, savas vagy gyengén bázikus pH mellett; 3. A melléktermékek kémiai vagy biológiai elbontása, pl. savak segítségével, így kénsavval vagy oxálsavval; vagy savas ioncserélőkkel, pl. „Amberlite" IR—il20-al (szulfonsav csoportokat tartalmazó stirol-diviniibenzol-polimerizátum); vagy enzimek segítségével, pl. penicillinázzal. Az eljárást az alábbi példák szemléltetik. A hőmérséklet-értékeket C°-ofcban adjuk meg. 1. példa: 156 ml-nyi oldathoz, amely k|b. 7,7% cefalosporint és ennek 3-—4-szeres mennyiségét kitevő, a kultúrák szűrletéből származó szennyeződéseket tartalmaz, keverés és jégfürdős hűtés közben hozzáadjuk 44 g kristályos cinkacetát [Zn(OOaOH3 ) 2 -2H 2 0] 88 ml vizes oldatát, miközben a keverék még tiszta marad. Ezután erélyes keverés és további jéghűtés közben csepegtető töltcsérfoől finom sugárban hozzáfolyatunk 10—15 perc leforgása alatt 260 ml száraz etanolt, majd beoltjuk a cefalosporin C^cinkkomplex (előállítva desztillált vízben oldott cefalosporin C cinkkloriddal történő kicsapásával) egy kristályával (a 3. példa szerinti rézkomplexhez hasonlóan) és tovább keverjük egy és 1/4 órát. A keletkező zavarosodás kb. 5 1/4 óra múlva igen erőssé válik és finom kristályos csapadék kezd kiválni. A csapadékot leszívatjuk, kevés etanol/víz (6:4 arányú) keverékkel, majd 95%-os alkohollal mossuk és a maradékot nagyvákuumban szárítjuk. 6,2 g 10 88% tisztaságú cefalosporin C-cinkkomplexet kapunk. UV-spektrum: lmax 202 m^ (s = 7300); IR-spektrum nujolbán: lásd az 1. ábrán. A papírelektroforézisnél) a komplex kálium-nátrium-15 -foszfátpufiferben (1/15 mólos; pH 5,5; másfél óra; 2000 Volt) egységes anyagfoltként 10 cm-t vándorol az anód felé. Az anyag összetétele UV^spektrummal vagy ninhidrin-Hkollidiin-nel való reakcióival igazolható. 20 A kiindulási oldatot az alábbiak szerint állíthatjuk elő: A 968 3i24 sz. angol szabadalmi leírásban szereplő módszer szerint a cefalosporin C-tartalimú kultúrák oldatát a szűrést elősegítő se-25 gédanyag hozzáadása után szűrjük, a szűrletot egy, a savas alakiban levő erősen savanyú ioncserélő segítségével pH 3-ra állítjuk be és egy acetát alakban levő bázikus ioncserélőn átengedjük a célból, hogy a szervetlen anionokat 30 acetátra cseréljük, majd a cefalosporin C-t Amberlite IR—4B-n adszorbeáltatjuk és piridinacetátpufferrel eluáljuk, a betöményített eluátumból aoetonnal lecsapjuk a cefalosporin C-^t, amit szűrünk és szárítunk. A csapadék 43,5 g-35 ját (27,6% cefalosporin C tartalmú) 156 ml vízben oldjuk. 2. példa: 40 Az 1. példa szerinti eljárással kapott nyers .cefalosporin C csapadék (23%MOS tisztaságú) 1,3 g-ját 3,8 ml víziben oldjuk. Hozzáadjuk 1,1 g cinkacétát 2,4 ml térfogatú vizes oldatát, majd hozzácsepegtetünk 8,2 ml izopropilalko-45 holt és 5 órát kevertetjük 0°-on. Leszívatás és szárítás után 208,5 mg megközelítőleg színtelen kristályt kapunk. 50 60 3. példa: Az 1. példa szerinti eljárással kapott nyers cefalosporin C csapadék (40%-os tisztaságú) 4 gját 14,5 ml vízben oldjuk. Az Oldathoz hozzáadunk 0,6 ml trietáliamint és 1,8 g rézacetát^) 55 hidrát 40 ml vizes oldatát. A tiszta, mély sötétzöld oldatot beoltjuk a cefalosporin C kristályos rézkomplexével és éjszakán át a hűtőszekrényben állni hagyjuk. Leszív'atjuk a mikrokristályos csapadékot, amelyet egymás után 100 ml jegesvízzel, 100 ml 95%-os alkohollal és 100 ml éterrel mosunk, majd vákuumban szárítunk, és így 1298 g 88%-os cefalosporin C-rézkomplexet kapunk. Az UV^abszorpciós spektrum 266—.267 imi-nál maximumot (s = 10 000), 65 232 m/i-nál pedig minimumot mutat. 3
