159228. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 11,16a, 17a-trihidroxiszteroidok előállítására
1Ö9S28 alkalmazása esetén a sejtek vagy a micélium eltávolítása után — megsavanyítjuk legalább 4,5, előnyösen kb. 1,5—3,5 pH-ig, egy ásványi savval, például kénsavval, hagy hidrolizáljuk n 16,17-dklofootóbéSziteresoportot, és így megkapjuk a szabad 16« 17«-diíhidraxiHzáümiazékot. A kereset*- sateroád ezután szokásos módon, például szűréssel vagy centrifugálásisai (ha szilárd) vagy ellenáramú extraháiáissial elkülöníthető. A következő példák szemléltetik a találmány szerinti eljárásit. A hőmérisékletefaet Celsius-fofcokiban adjuk meg. 10 6 re. 0,40 ml szteroid oldatot öntünk, a lombikba beoltáskor. A beoltás ufcáin 48,;,illetve 7.2 órával további 18«MhidroxiJ koritexoltQin : rlí6',J7K;iklo i b(>rat^ -kaUumisót adunk a ferjnentáeiós. közeghez.'Az 1. táblázatban összefoglaltuk, az.- adagolások sorrendjét és mennyiségét. 1. táblázat Tenyészet óra Szteroid adalék Összes szteroid adalék 1. példa: 11«, 16«-iDihidroxÍMkont]exolion Aspergillus ochraceust (ÍNRRL 405) tenyésztünk 7 niapig 26°-on a következő összetételű ferde agar táptalajon: agar 10 g glukóz 10 g élesztőkivanart 2,5 g agar 20 g desztillált vízzel kiiegészítve 1 literire. A táptalajt 30 percig 121Cj on sterilizáljuk. A ferde tenyészet felületének 5,0 ml steril vízzel való mosásával kapott szuszpenzióból 1 ml-rel beoltunk egy valtával bedugott 250 ml-es Erlerameyer-iloimbäkban levő következő összístótelű 50 ml táptalajt: kukoricalekvár glukóz desztillált vízzel kiegészítve 40 g 20 g 1 literre. A pH 6,5-re beállítva 2 n nátronlúggal. A táptalajt 30 percig 121°-on sterilizáljuk. A beoltott lombikcrt egy 5 cm átmérőjű körben percemként 280 fordulattal forgó rázógépre helyezzük. 25°-on való 24 órai imkubálás után 5 tf%-oit áltviszünk egy másik, 50 ml következő összetételű táptalajt tartalmazó 250 ml-es lombikba: kukoriicaleikvár glulkóz desztillált vízzel kiegészítve 10 g 5 g 1 literre. A pH 6,5-re beállítva 2 n nátranlúggal. A táptalajt 30 percig 121°-on sterilizáljuk. A második lomlbikat ugyanúgy inkubáljuk, mint az elsőt, de hozzáadunk a következőképpen készült lO^-hidroxi-kortexolon-oldatot: 112,2 mg 16«-hidroxi-Jkortexolodhoz hazzáadunik 0,23 ml vizes bóriaxoldiaitot (62,5 mig/ml) és 30 ml etanolos kálilúgot (14 mg/ml). Az oldást 40— 50°-rá való miélegítésisel segítjük elő. Ezután 95%-os etanolt adunk hozzá, feltöltve 1,12 mi-15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 0 48 712 800 1250 1430 800 2050 3480 A képződött ll«,16a-diMdroxá4«>rtexG'lon mennyiségiét úgy határozzuk meg, hogy a fermantléből alikvot mennyiséget híg kénsavval 2,5 pH-ra megsavanyítunlk, desztillált vízzel felhígítjuk (a hígítás 1 :3 48 órai, 1 :6 72 órai és 1 : 10 120 órai mintáikra), 5,0 ml hígított fermentievet 2,0 ml matiMzobutilketonnal extrahálunk, és a metilizabutilketonos kivonatokat papírkromaitognafáljuk 2:1:2 arányú benzol-etamol-víz rendszerben. Az elemzési eredményeket a 2: táblázatban közöljük. 2. táblázat 11«, 1 ea-diihiidroxi^kartexolan-mieghatározás 16«-hidroxi-Jkortexoloin Tényé- egyenértékek Átszet , , ,„ összes T< TM k fakulás adaldk »rtnllífc /* /ml /Ag/ml ora adalék /tg/ml % 0 48 48 712 72 120 800 1250 1430 800 21050 3480 5416 67 1152 5,6 2040 59 Hia az elemzés eredménye azt mutatja, hogy az egész szteroid szUbsiatrátum átalakult a termékké, az egész tenyészetet átszávatjuk egy Büahner^töllcsiérben kovaföldrétegen. A szűrőlepényt a tölcsérben 0,1%-os nátriumtetraborátoldiattal mossuk. 100 mi fermentiere kb. 10—20 ml vizes mosóoldatot használunk. Az egyesített szűredékiet és mosófolyadókét sósavval (10%os) 3,0 pH-ra állítjuk be, a hőmérsékletet 5— 10°-oin tartva. A termék kiikristályosodik az oldatból. 2,0 g nyersterméket kapunk összesen 3,48 g szubsztrátumíból. Etamolból átkráisttályosítva 1,4 g tiszta terméket nyerünk. 3
