159228. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 11,16a, 17a-trihidroxiszteroidok előállítására
159228 8 Ezzel szemben az 1. példáiban leírt módon eljárva, de a cMdlolbofátészter helyett szabad 16«-hddroxi-fcortexolonít hasznáivfa, legfeljebb 500 fibg/mL 16«-Jiiidroxi-k!ortexolon tairtalommal indulhatunk ki, és a maximális hozam kb. 40% 120 óra alatt. 5 2. példa: Az 1. példában leírt hét napos ferde agaros Aspergillus oehnaoeus tenyészettel beoltottuk a ló következő összetételű táptalajt egy 500 ml-es Erlenmeyér-lombiteban: kukoricadara 15 g hígított kukoiioatókvár (20 ml 50% 15 szilárd anyag tartalmú kukoricalekvárt csapvízzel 300 ml-re hígítunk) 15 ml A táptalajt 60 percig 121°^on sterilizáljuk 2 20 ízben két egymást követő napon. A beoltott lombikot 5 napig 25°-on inkubáljuk jól szellőzött párás helyiségben rázás nélkül. A spórákat (komdiumok) 50 ml 0,1% nátriumllaurílszuMonát-tartalmú 0,85%-os sólével 25 elkülönítjük, miajd 15 000 G-nél 5°-on kicentrifugáljuk, és 2 ízben 0,05 n faszfátpufferban (7,0 pH) szuszpendálva mossuk. A harmadik centrifugálással kapott spórapépet használatig —20°-on tartjuk. 30 A szteroid átalakítására 0,2 g nedves sejtpépet 100 ml 0,05 n foszfátoldatban 7,0 pH-.nál 3% glukózadalékkal szuszpendálurik egy 500 ml-es Erlenmeyer4ombilkban. Az 1. példában leírt módon elkészítjük a cikloborátésztert, és 35 hozzáadjuk a szuszpenzióhoz. Nem szükséges aszeptikusán dolgozni. A nem-osztódó spórákat a szteroiddal aerób körülmények között inikubáljuk 25°-«n forgó rázógépen, mint az 1. példában. Ha a spórák száma a reakciókeverakben 40 108 ml-eriként, akkor 24 óra alatt kb. 150 /ig/ ml szteroid hidroxilozódik lla-helyzetben. A spórák számláit 109/ml-re növelve, 24 óra alatt kb. 1000 /üg/ml szteroid hidroxilozódik 11«-helyzetben. A spórák a reakció közben nem csíráznak. A hidroxilált szteroid kinyerhető a reakciókeverékből az 1. példában leírt módon. 3. példa: Az 1. példában leírt módon eljárva, de A. Qchraeeuis helyett Rhizsopus arrtózust (ATCC 11 145) alkalmazva a 16<Miidroxi-kortexo!k>n-16,17-cikldborátészter hasonlóképpen átalakítható llaiea-dih'idroxi-kortexolonná. Hasonlóképpen a következő nukroarganiizmusók is átalakítják a 16«-ihdidroxi-kortexolon 16,17-cMabotrátészterének káMuimsóját 11«,16«-dihidroxi-kortexdlonná: Syncephalaistrum raoernqsium, Thaminidium elegáns, Streptornyces fradüae, Sporotrichum epigaeum, Absidia glauoa, Aspergillus náger, Aspergillus nidulans, Dactylium dendioides, Neurosporja sitophilia, Sclerotinia Mlbertilana, Gleosporirum kaki, Polyporus orientals, Bacilluis cereus, Mucor adriaticus, Pseudomonas fluarescenis, Tiichothecium roseum, Phycomyces nitens, Penicillium expansum, Beauvariia bassiana, Blakeslea trispora, Cercospora melonis, Delacroixia urenáta, Fusarium discolor, Glomerella cinguliata és Calonectria decora. 4. példa: 11 a, 16«, 17a -Trihidroxiprogeszteron Az 1. példában leírt módon eljárva, de a 16a-ihidroxÍHkartexol'on 16,17-cilkloborátészter ének káliumsóját a l!6«,17«-dihidroxiproigeszteron 16,17-cikloborátészterének egyenértékű mennyiségű nátriumsó jávai helyettesítve 11«,16^,17«-trihidroxiiprogesZteront kapunk. Hasonlóképpen az 1. példában alkalmazott szteroid szuhsztrátumot az alább megnevezett szteroid szubsztrátumok 16,17-oikloboratészterének káliumsójával helyettesítve és az 1. példa szerint eljárva a megnevezett szteroidtermékeket kapjuk. Példa Szteroid szubsztrátum Szteroid termék 5 16a ,17«,21trihidroxiprogeszteron 6 6«-metil-16«,17«-dihidroxiprogeszteron 7 7«L iklór-l 6«, 17a-dihidroxiprogesztero:n 8 6a-fluor-16«,17«-dihidroxiprogeszteron 9 21-fluor-16«,17«-dihidroxiprogeszteron 10 21nklór-16«,17«-dihidroxiprogeszteron 111 16a,17a-dihidroxi-l-dehidropragesZteron 12 Iß«, 17«-dihddroxi-<6-dehlidroprogeszteron 13 6-fluor-i6-dehidr o-l 6«, 17«-dihidroxiprogeszteron 14 1-dehí dro-16^hidroxi-kortexolon 15 6-dehidro-l 6«-hidroxi-kartexolon 16 l,6-bisz-dehid! ro-li6«-hidroxi-kortexolon 17 6a-imetil-16a-hidroxi-kortexolon 18 6a-klór^l6«-hidroxi-4kortexolon 19 6«-f luor-16a-hidroxi-Jkortexolon lla,l! 6a,17«,21-tetnahidroxiprogeszteron 6«~metil-lil«16«,17Qt-trihidroxiprogeszteron 6^klór-l 1«,16«,17a-trihidroxiprogeszteron 6«-f luor-11«, 16«, 17 ot-tiihidroxiprogeszteron 21~fluor-ll«,16a ,17a-trihidroxiiprogeszteron 21-klór-l 1 a, 16«, 17«-trihidroxiprogeszteron 1 la, 16«, 17«-Mhidroxi-l-dehidraprogeszteron lla,16«,i7«-trihidroxi-6-dehidroprogeszi teron 6-fluor-6-dehidro-lla,16a,17a-'trihidroxiprogieszteron l-dehidro-.ll«,16a-dihidroxi-ikortexolon 6-dehidrcHl 1«, li6«-dihidr oxi-kor texolon 1 ,<6-bisz-dehidrc-l 1«, 16«-dihidroxi-kortexolon 6«-meta.-ll«,16«-dihidroxi-ikprtexo'lon 6a4dár-ll^r6^dihidroxMkartexolon 6«-f luor-11«, 16a-dihidroxi-kortexolon
