158956. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-halogén-7-dexoxi-1'-demetil-linkomicinek előállítására
15 158956 16 átfolyási hányadossal vezetjük át a gyantán. Az oszlopot ezután 3,5 liter metiletilketon-víz (96:5 v/v) eleggyel: eluáljük. 20 mines frakciókat gyűjtünk és ezekiből alikyot részt Sarcina lutea*-val beoltott agairlemezre cseppentünk. Azokat a frakciókat, amelyek gátolják a Sarcina lutea növekedését, egyesítjük, majd az alsó és a felső fáziist elválasztjuk. A felső fázist száraztra pároljuk és ezt A készítménynek jelöljük, az alsó vizes fázist lOÖ ml-enként 20 g nátriumkiairibanáttal pH = 10 értékre beállítjuk. Az így kapott alkalikus oldatot ezután metilénkloriddal extraháljuk és a metilénkloridos oldatot szárazra pároljuk; így kapjuk a B jelű készítményt. Vékonyréteg-kiromatográfiával mind az A, mind a B készítményben ki lehet mutatni a 7(S)-Mór-7-dezoxilinkomicin és a 7(S)-klór-7-dezoxi-ll'-idemetillÍ!nkomilcin jelenlétiét [szilikagél G., metiletilketon; aceton: :víz (140:40:22 v/v)]. Az. A és B készítményt (6 g) egyesítjük, feloldjuk kfo. 10 ml klaraform-metanol (6:1 v/v) elegyben, 24 g szilikagéllel (Merck-Darmstadt No. 7734) keverjük és szárazra pároljuk. Az így kapott száraz anyagot azután egy nedvesen (kloroform-metanol elegy, 6:1 v/v) betöltött oszlop tetejére adagoljuk, az oszlop az előbbi szilikagélből 600 g-t tartalmaz. További szilikagéiit adunk a töltött ágy tetejére, és az oszlopot k|b. 12,8 liter kloroforrnnmetanol (6:1 v/v) eleggyel eluáljük. 20 ml-es frakciókat gyűjtünk és a biológiai aktivitásukat Sarcina lutea-val beoltott agarlemezeken vizsgáljuk. Azokat a frakciókat, amelyek vékonyréteg kromatográfia szerint 7i(S)-klór-7-dezoxi-r-ideme:tillinkom.icint tartalmaznak, egyesítjük és a 7)(S)-klór-7-dezoxi-il'-demetillinkomieint további azonosításnak vetjük alá ugyanezen anyag autentikus mintájával történő összehasonlítással, vékonyréteg kromatográfiát és papírikrormatogríáfiát használva. További módszer a biokonverziós úton kapott termék tömegspektirumának és az autentikus 7(S)-klór-7-dezoxi-!l '-denietillinkomicin minta t'ömegspéktrumának összehasonlítása. Ugyanilyen módon a Streptomyces pumipalus NRRL 3529 helyett az alábbi mikroorganizmusokat használjuk: Streptomyces venezuelae, NRRL 35|2i8; Streptomyces venezuelae, NRRL 3527; Streptomyoes spectabilis, NRRL 2494; Streptomyces spectabilis, NRRL 2792; Aspergillus ornatus, NRRL 22i9;l; Scopulariopsis brevicaulis, ATCC 7903 és Trichoderma viride, NRRL 1762, a 7í(S)-:kló;r-7-dezoxi-jr-demit!Ílliínkomicm vagy savaddiciós sói előállítására. Az 1. példa szerinti elj.árást követjük, de szubsztrátumként á •.. 7(S)-iklórJ7-dezoxilinko:mícin helyett egyéb I képletű 7-1klór-7-dezoxilinkomicineket használunk a megfelelő II képletű 7-klór-7-dezoxi-l '-demetillinkomicinek előállítására. A következő felsorolásban a további felhasznált I .képletű szubsztrátumoknak (szabad bázis vagy savaddiciós só) képviselői találhatók, a megfelelő II képletű l'^demetil-vegyületek 5 ezen találmány szerinti előállításához: Rx 7—X R transz-etil (S)-Cl metil transz-etil (R)-Cl metil cisz-etil (S)-Br metil cisz-etil (R)-Cl metil transz-n-propil (S)-Cl metil transz-n-propil (S)-Br etil tramsz-n-propil (R)-Cl .-> metil cisz-n-propil (S)-Cl metil transz-n-butil (S)-Cl metil cisz-n-butil (S)-Cl metil tranisz-n-butil (S)-Br etil transz-n-butil (R)-Br metil cisz-n-butil (S)-Cl metil transz-n-pentil (S)-Cl metil transz-n-pentil (S)-Cl etil transz-n-pentil (R)-Cl metil cisz-n-ipentil (S)-Br metil tramsz-n-hexil (S)-Cl metil transz-n-hexil (S)nB;r etil transz-n-hexil (R)-Cl metil eisz-n-hexil (S)-J3r metil transz-i-heptil (S)-Cl metil transz-n-heptil (S)-^Cl metil transz-n-heptil (R)-Cl metil cisz-n-heptil (S)-Cl metil cisz-in-heptil (R)-Br metil transz-n-oiktil (S)-Cl metil : transz-n-oktil (S)-Cl etil •'• tra:nsz-ni-oktil (R)-Cl metil trainsz-i-oktil (S)-Br metil cisz-n-oktil (S)-Br metil 2. példa: 4'-Depropil-4'-tratnsz-in-pentil-7-de2oxi-7(S)-klór^l '^demetillinkomicin Az 1. példa szerinti biokonverziós eljárást és a termék kinyerésére irányuló műveleteket ugyanazon mikroorganizmust használva megismételjük, de szuibsztrátumkéint 4'-dep,ropil-4'-transz-n-pen!til-j7-dezoxi-7(S)-klár-l!Ínkomiicm-hidro klór időt használunk. Így 4'-depropiW-tranisz-n-jpentil-7ndezoxi-7!(S)-klór-4r-demetillinkomieint kapunk. 3. példa: 7(iS)-Klóir-J 7Hdezoxi-:l'-demetill!mikomicin 60 Táptalajt készítünk, melynek öisszetéteie: 2 g malátakivonat, 0,(1. g pepton és 2 g Cerelose, 100 ml-re hígítva. Ebből 5X20 ml-t 125 ml-es 65 lombikokba adagolunk, mindegyiket sterilizál-R
