158671. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 0-dezacetil-7-N-acilamino-cefalosporánsav-származékok előállítására
158671 13 14 tot 30 percig 2í5°-on rázzuk, majd vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot 6Q0 ml 10%os vizes foszfátpufferben (pH 6,7) felvesszük, ecetsavetilészter hozzáadása mellett az oldat pH-ját 2,i5-re állítjuk be és 300 ml ecetsavetilészterrel háromszor extraháljuk. Az egyesített szerves kivonatokat vízzel és telített konyhasóoldattal mossuk, nátriumszulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. A bepárlási maradékot 30-szoros mennyiségű (0,05—0,2 mm szemcsenagyságú) szilikagélen kromatografáljuk. Az eluálást benzol és ecetsavetilészter 1:1 arányú elegyével végezzük és így a tiszta O-dezacetil-O^N-metiPkarbamoil)-7-N-i[iN-karbo-terc.-butiloxi-D((—)^a-fenilglicil]-amino-cefalosporánsavat kapjuk, amely a vékonyréteg-kromatogramban szilikagélen ecetsavetilészter :piridin: j égecat :víz (62:2:1:6:11) rendszerben 0,50-es és n-butanol: jégecet.-víz (67:10:23) rendszeriben szintén 0,:50-es Rf értéket mutat. 3. példa: Alapos keverés közben 5°-on feloldunk 0,50 g 0-dezacetil-OH(N-etil-ikai1bamoil)-7-!N-fíN-karbo-terc.-foutiloxi-D(—)Ha-fenilglicil]-amino-eefalosporánsavat 2,0 ml trifluorecetsavban. A gázfejlődés megszűnése után (mintegy 3 perces reakcióidő elteltével) a reakcióelegyet 30 ml hűtött éterre öntjük és a laza, amorf csapadékot centrifugálással elkülönítjük, négyszer friss éterrel mossuk és vákuumban szárítjuk. így az 0-dezacetiPOH(N-etil-karbamoil)-7-N-[D(—)-a-fenilglicilj-amino-cefalosporánsav-trifluoracetátot kapjuk, amely vékanyréteg-íkromatogramban szilikagélen (jódgőzzel kifejlesztve) ecetsavetilészter :piridin :jégecet :víz (62:21:6 :,11) rendszerben 0,07-es, n-butanol: jégecet-víz (67: :10:23) rendszerben pedig 0,18-as Rf értéket mutat. 3,10 g (5,6 mmol) 0-dezacetil-0-(1N-.etil-kai-'bamoil)J7-)N4lD(—)^cf-fenilglicil]-amino-cefalosporánsav-trifluoracetátot 80—00 ml metanolban és vízben oldunk, majd 0,1 n 50%-os metanolos nátronlúggal 4,i3 pH értékre állítjuk be az oldatot, amelyből azután a metanolt vákuumban eltávolítjuk, majd liofilizáljuk. A maradékot négyszer 30 ml etilacetáttal és nyolcszor 15 ml alkohollal digeráljuk, majd 30 ml metanolban és 30 ml vízben felvesszük, 400 mg Norit SX—LF-el kezeljük. „Hyflo"-n való szűrés és a metanol eltávolítása után a vizes oldatot liofilizáljuk. Az 0^dezacetil-0-j(N-etil-!karbamoil)-7-J>HD!(—)^a-fenilgilicil]-amino-cefalosporánsavat (mint az 1. példában) belső sóként kapjuk. A vékonyréteg-kromatogramiban (szilikagélen) a kötött ion eceasavetilészt2r:piridin: :jégecet:víz (62:2:1:6:11) rendszerben 0,07-es, n-butanol:jégecet :víz (67:10:23) rendszerben pedig 0,,18-as Rf-értéket mutat. Ultraibolya-apszorpciós színképe (víziben): Amax 261 m^. (« = = 7800); infravörös abszorpciós színképe (nujolban): jellemző sávok 3,10, 5,63, 5,90, 6,23, 7,98, 9,00, 9,32, 9,08, 12,25 és 14,4 mikronnál vannak. A kiindulóanyágként felhasznált O-dezacetil-5 -OH(:N-etil-karbamQÍl)-7-N-[N-karbo-terc.-butiloxi-D:(—)Hff-fenilglici: l]-amino-cefalosporánsavat a következőképpen állíthatjuk elő: Az 0-dezacetil-7-N-[N-karbo-terc.-butiloxi-D(—)H7^fenilglicil]-amino-cei falosporánsav 10 nátriumsójának nátriumacetátot tartalmazó liofilizátumából 19,8 g (35 mmól)-t 300 ml abszolút és gáztalanított, 49 ml (350 mmól) abszolút trietilamint tartalmazó, dimetilformamidban oldunk és 27,7 ml (350 mmól) etilizócianátot 15 adunk hozzá. 30 perces 25°-oin történő rázás után az oldatot vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot 600 ml 10%-os vizes foszfátpufferben (pH 6,7) felvesszük, ecetsavetilészter hozzáadása mellett az oldat pH-ját 2,5-re állít— 20 juk be és háromszor 300—300 ml ecetsavetiiészterrel extraháljuk. Az egyesített szerves kivonatokat vízzel és telített vizes konyhasó-oldattal mossuk, nátriumszulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. A bepár-25 lási maradékot 30-szoros mennyiségű (0,06—0.2 mm szemcsenagyságú) szilikagélen kromatografáljuk. Az eluálást benzol és ecetsavetilészter 6:4 arányú elegyével végezzük és így a tiszta O-dezacetil-O^(N-0til-karbamoil)-7-N-[N-l karibo-30 -terc^butiloxi-D(—)^a-fenilglicil]-amino-cefalosporánsavat kapjuk, amely vékonyréteg-kromatogramban szilikagélen ecetsavetilészter :piridan: jégecet-víz (62:211:6:11) rendszerben 0,55-ös, n-butanol: jégecet-víz (67:10:23) rendszerben 0,52-es Rf-értéket mutat. 35 45 4. példa: Alapos keverés közben 5°-on feloldunk 0,50 40 g 0-dezacetil-OH(N-acetil-karbamoil)-7-N-[N-karbo-terc.-ibutiloxi-iD^—)^a-fenilglicil]-amino-cefalosporánsavat 2,0 ml trifluorecetsavban. A gázfejlődés megszűnése után (kb. 3 perces reakcióidő elteltével) a reakcióelegyet 30 ml hűtött éterre öntjük és a laza, amorf csapadékot centrifugálással elkülönítjük, négyszer friss éterrel mossuk és vákuumban szárítjuk. Ily módon az 0-dezacetil-0-(N-acetil-kanbamoil)-7--N-[D(—)-:a-fenilglicil]-ami:no-cefalosporánsav^trifluoracetátot kapjuk. •1,5 g 0-dezacetil-0-(N-acetil-karbamoil)-7-N-[Di(—)-a-fenilglicil]-amino-cefalosporánsav-trifluoracetátot 80 ml metanol-víz (1:1) elegyben oldunk és az oldat pH-ját 50%-o.s metanolos 55 nátronlúggal 4,5-re állítjuk be, majd etanol hozzáadása mellett szárazra pároljuk. A maradékot 5 ml alkohollal tízszer digeráljuk, 40 ml metanolban és 40 ml vízben felvesszük és 400 mg Norit SX—LF-el kezeljük. „Hyflo"-n való 60 szűrés és a metanolnak nagyvákuumban történő eltávolítása után a vizes oldatot liofilizáljuk. Az 0-dezacetil-OH(N-aeetál%arbamoil)-7-->N-[D:(—)-Ha-fenilglicil]-amino-oefalosporánsavat 65 (IV) képletű belső sóként kapjuk.
