158671. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 0-dezacetil-7-N-acilamino-cefalosporánsav-származékok előállítására

158671 11 12 ml ecétsavetilészterrel extraháljuk; a szerves kivonatot háromszor 20—20 ml vízzel és egyszer 50 ml telített vizes konyhasóoldattal mossuk, nátriumszulfát felett szárítjuk és bepároljuk. A bepárlási maradékot 500 ml éter és IOOIO ml petroléter elegyével extraháljuk; így eltávolítjuk az N-kar!

bo-terc.-butiloxi-D(—)•-«-fenilglicin feleslegét. A maradékot 10 ml ecetsavetilészterben és 40 ml benzolban oldjuk, majd 250 g szilikagélen kromatografáljük. Az oszlopot (5,1 cm átmérőjű) benzol és ecetsavetilésztier 8 : 2 arányú elegyében állítjuk elő és azonos oldószerek 7:3 arányú elegyével kimossuk. Az így kapott 7-JM-(N-karbo-terc.-butiloxi-Di(—)-akfenilglicil)-amino-cefalosporánsav vékony rétegkromatogramban 0,59-es .Rf értéket mutat, ha a rendszer ecetsavetilészter : piridin : : jégecet: víz (62:21:6:111); és 0,47-es Rf értéket, ha a rendszer n-ibutanol:jégecet :víz (67:10: :23). 1 g (2 mmol) 7-N-(N-karbo-terc.^butiloxi-DÍ(—)wa~fenil,glicil)-arnino-cefalosporansa'vat 80 ml desztillált vízzel feliszapolun'k és 20 ml (2 mmól) 0,1 n vizes nátriumhidroxid hozzáadása útján feloldjuk. Az oldathoz hozzáadunk 0,05 g mennyiséget a Bacillus subtilis ATCC 6633-ból (lásd 1 080 904 számú angol szabadalom) és a pH-nak 7,3-as értéken való tartása mellett két órán keresztül 37°-on keverjük. Az enzimes bontásnál felszabaduló ecetsavat 20 ml 0,1 n vizes nátriumhidroxid-oldattal semlegesítjük, az oldatot az elszappanosítás befejezése után diatomaföld-készítményen át megszűrjük és a szűrletet liofilizáljuk. Az O-dezacetil-7-N^(N-karbo-terc.-bu;tiloxi-Di(—)^a-fenilglicil)-amino-oefalosporánsav nátriumsója a vékonyrétegkromatogramban szilikagélen (jódgőzzel kifejlesztve) 0,37-es Rf-értéket mutat ecetsavetilésztier:piridin:jiégeoet:,

víz (62:21:6:11) rendszer esetén; és 0y38-as Rf értéket, n-butarnokjégecet: :víz (67:10:213) rendszer esetén. Az 0-dez;acetil-7-iN-((N-.karbo-terc.-butiloxi-D{—)Ha-;fenilglicil)-amino-cefalosporánsav-nátriumsó nátriumacetátot tartalmazó nyers-liofilizátumából 2,27 g (4 mmól)-ot feloldunk 20 ml abszolút és gázmentesítétt, 5,6 ml (40 mmól) abszolút trietilamint tartalmazó dimetilforrnamidban és 3,36 ml (40 mmól) /?-klóretil-izocianátot adunik hozzá. 30 percig 25°+o.n való rázás után az oldatot vákuumban szárazra pároljuk és a bepárlási maradékot háromszor 100—100 ml éterrel digeráljuk. Az éterben nem oldódó részt 50 ml 10%-os vizes foszfátpuffeírben (pH 6,7) felvesszük;, ecetsavetilészter hozzáadása mellett a pH-t 2,5-re állítjuk be és 200—200 ml ecétsavetilészterrel háromszor extraháljük. Az egyesített vizes kivonatokat vízzel és telített vizes konyhasó-oldattal mossuk, nátriumszulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. A bepárlási maradékot 30-szoros menynyiségű (0,05—0,2 mm szemcgenagyságú) szilikagélen kromatografáljuk. Az eluálást benzol és ecetsavetilészter 6:4 arányú elegyével végezzük és így a tiszta 0-dezaoetil-0-i(N-/J-ldóretil-4:arbamail)-<7-N-<N4carbo-terc.-butiloxi-D,(—)-cf-fenilglicil)^amino-cefalosporánsavat kapjuk, amely a vékonyréteg-kromatagramfoan szilikagélen ecetsavészter:piridi,

n:jégeoet :viíz (62:21:6: :11) rendszer esetén 0,63-as, n-^butanol:jégecet: :víz (67:110:23) rendszer esetén pedig 0,50-es Rí értéket mutat. 2. példa: Alapos keverés közben 5°-on feloldunk 0,50 g 0-dezaoetil-iOH(N-metiykaribamoil)-7-N-'(N-karbo-terc.-bu'tiloxi-DÍ—)-«-fenilglicil)-amino-cefalosporánsavat 2,0 ml trifluorecetsavban. A gázfejlődés megszűnése után (mintegy 3 perces reakcióidő elteltével) a reakciókeveréket 30 ml hűtött éterre öntjük és a laza, amorf csapadékot centrlfugálás után elkülönítjük, négyszer mossuk friss éterrel és vákuumban szárítjuk. Ily módon az 0-dezacetil-0-(N-metil-karbamo-Í!)-7HN-[D(—)-a^finilglicil]-namino-cefalosporánsav-trifluoracetátot kapjuk, amely a vékonyréteg-kromatogramban szilikagélen (jódgőzzel kifejlesztve) ecetsavetilészter :piridin: jégecet: víz (62:21:6:11) rendszerben 0,O5-^ös, a n-butanol: :jégecet:víz (67:10:23) rendszerben pedig 0,13-as Rf-értéket mutat. 1,66 g (3,1 mmól) 0-dezacetiil-0(N-metil-karbam'oil)-7-;N-(Dí(—)-iaHfenilglicil)Ham.in!0-cefalosporánsav-trifluoracetátot 10—10 ml metanolban és vízben oldunk és az oldat pH-ját 0,1 n 50%-os metanalos nátronlúggal 4,5-ös értékre állítjuk be. Etanol hozzáadása közben az oldatot szárazra pároljuk. A maradékot tízszer 5 ml alkohollal digeráljuk, 40 ml etanolban és 40 ml vízben felvesszük és 400 g Norit SX—LF-el kezeljük. ,,Hyflo"n való szűrés és a metanolnak nagyvákuumon való eltávolítása után a vizes oldatot liofilizáljuk. Az 0-dezacetil-0-(N-metil-karbamoil)-7-N-[!D>(—)-a-fenilglicil]-aminocefalosporánsavat az 1. példához hasonló belső sóként kapjuk. A vékonyréteg-kromatogramban (szililkagélen) a kötött ion ecetsavetilészter :piridin: jégecet: víz (62:21:6:11) rendszerben 0,Ö5^ös és n-butanol :jégeeet:víz (67:10:23) rendszerben 0,13-as Rf-értéket mutat; ultraibolya^abszorpciós színiképe (vízben): /-max

260 m/i (s = 7990); infravörös abszorpciós színképe (nujolibam): jellemző sávok 3,08, 5,65, 5,91, 6,24. 6,42, 7,93, 8,85, 9,36, 9,72, 10,33 és 12,26 mikronnál vannak. A kiindulóanyagként alkalmazott O-dezacetil-OH(N-metil-karbamoil)-7HNj[!N-ikarbo-terc.-butilloxi-D(—)-a-fenil:glicil]^amino-cefalosporán-Siavat a következőképpen állítjuk elő: Az 0-dezacetil-7^N-[:N-karbo-terc.-butiloxi-D(—)^a-fenilglicil]-amino-cefalosporánsav-nátriumsójának nátriumacetátot tartalmazó nyers liofilizátumábóll 1.1,3 g (20 mmól)-t (lásd 1. példa) feloldunk 200 ml abszolút és gáztalanított dimetilformamidbarn, amely 28 ml (200 mmól) abszolút trietilamint tartalmaz és 11,8 ml (200 mmól) metilizocianátot adunk hozzá. Az olda-10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6