158198. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gelbecidin antibiotikum előállítására
3 15819a 4 Az antibiotikum termelésére felhasználható szénforrások igen változatosak, alkalmasak pl. cukrok (pl. glukóz, laktóz, maltóz, szacharóz), dextrin, különféle keményítők, glicerin és más polialkohólok, inozit és állati és növényi zsírok. A mikroorganizmus tenyésztését és a gelbecidintermelést elősegítő szerves nitrogénforrások például a szójababliszt, gyapotmagliszt és más növényi lisztek (teljesen vagy részben zsírtalanítva), húslisztek vagy állati belsőségek, peptonoik, kazeinhidrolizátum, szójababhidrolizátum, éleszitőhidrolizátuim, laktalbumin, búzasikér, szeszmoslék, kukoricalekvár, karbamid és aminosavak. Ásványi sók, például kloridok, nitrátok, szulfátok, karbonátok és foszfátok nátrium, ammónium és kalcium kationnal a megfelelő koncentrációban alkalmazandók. A táptalajnak nyomokban magnéziumot, vasat; rezet, mangánt, cinket és kobaltot is kell tartalmaznia. A pH szabályozására fermentálás közben előnyös a táptalajhoz pufferolószereket, például kalciuimkarbonátot hozzáadni. Szükség esetén habzásgátlószer is adható hozzá. A leírt körülmények között kb. 25 C°-on 25 maximális gelbecidin-Jtermelést érünk el tartályokban 1—5 nap alatt. Az oltóanyag spórák szuszpenziójából vagy iners szubsztrátumon liofilizált micéliumból eredhet. Ezt rendszerint egyszer vagy többször átvisszük folyékony táptalajon a végső fermentáció előtt. A gelbecidin elkülönítése A gelbecidin kémiai és fizikai-kémiai tulajdonságai A gelbecidin sárga amorf anyag. 161 C°-on zsugorodik, és bomlás közben 169—-170 C°-on olvad. A gelbecidin semleges vegyület- Nem extrahálható lúgos vagy savas vízzel szerves oldószeres oldataiból, Pozitív a Fehling-próbában. és negatív fenolcsoportokra 1%-os vizes vas(Hl)klorid-oldattal. Oldható kloroformban, eitilaoetátban, etanolban, metanolban és aoetonban, oldhatatlan vízben és hexánban. 10 15 20 30 35 . A gelbecidin jó hozammal nyerhető ki 5 és 8 pH között a nyers vagy centrifugált ferment-léből. Ebből a célból a fermentlevet különféle oldószerekkel, például kloroformmal, etilacetáttál vagy butanollal extraháljuk. Ezután a 40 kivonatot szárazra bepároljuk, és a kapott gyantás anyagot előbb hexánnal, majd éterrel kezeljük. Utána a hexánban vagy éterben oldhatatlan anyagot etilacetáttal extraháljuk, és az etilacetátos oldatot n nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, n sósavval és végül desztillált vízzel extraháljuk. Az etilacetátos oldatot szárazra bepárolva sárgásbarna port kapunk. További tisztítás céljából ezt a port aktivált alumíniumoxidon kromatografáljuk, és ismételten feloldjuk és kicsapjuk. 45 50 55 60 65 Elemi összetétele a következő: C 56,98, H 6,93 és O 36,09% (a különbségből). A gelbecidin készítmények nem tartalmaznak ként, halogént és nitrogént. [«]26 D = +140° (kloroformban, 1%). A gelbecidin ultraibolya színképén (1. ábra) abszorpció látható 228, . 283, 316, 416 és 432 m/i-nál a megfelelő E i°cm értékek 203, 412, 66, 84, illetve 84. A gelbecidin infravörös színképe (2. ábra) hidroxil, CH, karbonil és aromás csoportok jelenlétére mutat- Jellemző abszorpciós vonalak vannak 2,95, 3,43, 3,5, 5,75, 6,13, 6,3, 6,92, 7,3, 7,95, 8,12, 8,92, 9,62, 10,6 és 11,6 m^-hál. A gelbecidin egyetlen foltként vándorol különféle kromatográfiai rendszerekben, mint az ultraibolya és látható fényben és bioautográfiailag azonosítható. Papírkromatográfiai adatok Whatman 1. papíron: 4:1:5 arányú butilalkohol^eeetsav-víz rendszerrel: R/ = 0,94; 4:6 arányú metilalkohol-benzol rendszerrel: R/ =; = 0,8. Vélkonyrétegkromatográfiai adatok: Eastman Chromagram fólián metilalikohollal: R/ = 0,6; 1:9 arányú metilalkohol-kloroform elegy oldószerrel: R/ — 0,45. Antibiotikus tulajdonságok In vitro a gelíbecidin — és összehasonlításul a penicillin-G és ampicillin — a következő hatásspektrumot mutatja: Közepes gátló ikoncenit-Mikroráció, ^g/ml organizmus gelbepeniampicidin cillin-G cillin S. aureus. (SC 1276) 0,39 0,007 0,03 S. pyogenes (SC 3862) 0,47 0,002 0,006 P. vulgaris (SC 3855) >5,0 15,6 2,0 Ps. aeruginosa (SC 3840) >20,0 — — E. coli (SC 2975) >100,0 18,7 0,6 S. schottemuelleri 5,0 C. albicans 5,0 F. bulbigenum 5,0 T. mentagrophytes 5,0 T. vaginalis 5,0 Eszerint a gelbecidin sikeresen . alkalmazható baktericid szerként a fent felsorolt Gram-pozitív .mikroorganizmusok ellen-A gelbicidin alkalmazható felületi fertőtlenítőszerként. Erre a célra kb. 0 Ä1—10,0, előnyösen 0,5—1,0 s%-os oldatban használható, előnyösen egy detergenssel vagy más tisztítószerrel együtt. Az ilyen oldatok felhasználhatók padló, falak, asztalok stb- fertőtlenítő mosására, valamint tej- és élelmiszeripari berendezések tisztítására. 2
