158198. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gelbecidin antibiotikum előállítására

5 158198 A következő példa szemlélteti a gelbicidin előállítását és kinyerését. Példa: , A Parmában (Idaho, Amerikai Egyesült Államok) vett talajmintából elkülönített Streptomyces ATCC 21 309 mikroorganizmust a következő összetételű ferde agar táptalajon tenyésztettük: 20 g paradicsompép, 20 g zabliszt és 500 ml forró víz. A keverékből főzéssel híg pépet készítettünk, megszűrtük, majd 500 ml vízben duzzasztott agárhoz adtuk, és 121 C°-on és 1 att gőznyomás alatt 20 percig sterilizáltuk. Ezen a közegen a légmicélium sárgásbarna, és világosbarna oldható pigment képződik-A ferde agáron keletkezett dúsan spórázott telep egy részét 0,01 %-os Dupanol oldatban szuszpendáltuk, és ezzel beoltottunk 50 ml sterilizált táptalajt egy 250 ml-es lombikban. A talaj összetétele a következő volt: szójababliszt 1,5 % szárított, forrázott burgonya 1.5 % glükóz 5,0 % kobaltklorid-dihidrát 0,0005% kalciumkarbonát 1,0 % desztillált vízzel kiegészítve 1000 ml-re. Forgó rázógépen 25 C°-on való 48 órai,inkubálás után a lombik tartalmát átvittük 1000 ml fenti összetételű steril táptalajba egy 4000 ml-es lombikba. Forgó rázógépen 25 C°-on való 48 órai inkubálás után a lombik teljes tartalmával beoltottunk 30 liter fenti összetételű steril táptalajt egy 40 literes fermentorban. A fermentálást 25 C°-on 118 óra hosszat folytattuk. A felületi légáram sebessége 0,6 m/perc volt, és a keverés energiaszükséglete 0,2 LE 400 literenként. 118 órai fermentálás után a fermentlevet szűrést elősegítő anyag jelenlétében megszűrtük. Minthogy az antibiotikum zöme a szűredékbe került, a szűrőlepényt kidobtuk. A szűredéket kloroformmal extraháltuk, és a szerves fázist szárazra bepároltuk. A visszamaradt gyantás anyagot hexánnal, majd éterrel kezeltük. A hexánban és éterben oldhatatlan anyagot — kb. 1 g 35 liter fermentlében — 200 ml etilacetátban oldottuk. Ezt az etilacetátos oldatot 5 ízben 100—100 ml n nátriumhidrogénkarbonát-oldattal extraháltuk. Ezután az etilacetátos oldatot 3 ízben 100—100 ml desztillált vízzel extraháltuk. A szerves fázist vízmentes nát-10 15 20 25 S0 35 40 45 50 55 riumszulfáton megszárítottuk, és szárazra bepároltuk. A visszamaradt sárgásbarna port — kb. 0,5 g 35 liter fermentléből •— 5 ml metilalkoholban oldottuk, és semleges alumíniumoxidon kromatografáltuk (200 g alumíniumoxid 1 g anyagra). A biológiailag aktív frakciókat egyesítettük, és megszárítottuk. A kapott sárga port kloroformban oldottuk, és 0,1—0,8 mm szemcsenagyságú' kovasavgéloszlopon kromatografáltuk. A sárga sávot 10% metilalkoholt tartalmazó kloroformmal eluáltuk. Az eluált frakciót szárazra bepároltuk. A visszamaradt port a lehető legkisebb mennyiségű kloroformban oldottuk, és 5-szörös térfogatú hexánnal kicsaptuk. A szilárd anyagot centrifugálással elválasztottuk, és vákuumban 35 C°-on megszárítottuk. A végtermék élénksárga amorf por. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás gelbecidin antibotikum előállítására azzal jellemezve, hogy Streptomyces sp. ATCC 21309 jelű mikroorganizmus törzset aerób körülmények között asszimilálható, fermentálható szénhidrátot és asszimilálható nitrogénforrást tartalmazó vizes táptalajban tenyésztünk, a gelbecidint a fermentléből kiválasztjuk, majd adott esetben tisztítjuk-2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a tenyésztést olyan táptalajban végezzük, amelynek a kezdeti pH-ja 5,5 és 8,5, előnyösen 6,5 és 7,5 közé esik. 3. Az 1. vagy % igénypontok szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve,.. hogy a tenyésztést 22 és 28 C° között, előnyösen 25 C°-on végezzük. 4. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a tenyésztést 1—5 napon át folytatjuk. 5. Az 1—4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a gelbecidint a fermentléből 5" és 8 pH között oldószeres extrakcióval választjuk ki-6. Az 1—5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a fermentléből kiválasztott gelbecidint aktivált alumíniumoxidon végzett abszorpciós kroimatografálással tisztítjuk. 2 rajz, 2 ábra A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 7107236. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 3