158137. lajstromszámú szabadalom • Eljárás N-karboxi-anhidridek és azok származékainak előállítására
25 158137 26 eióelegyet szobahőmérsékletre hagyjuk melegedni, majd szűrjük. A szüredéket betöményítjük, és a maradékot 50 ml éterben felvesszük. Az elegyet 20 órán át kb. 10 CD -on tároljuk, majd a felülúszót eltávolítjuk és csökkentett nyomáson betöményítjük. így a kívánt termék kicsapódik ; tisztítását hexános kezeléssel végezzük, majd a terméket szűréssel nyerjük ki. Hasonló módon állítjuk elő az O-trimetilszilil- Ő-hidroxileucin-iN-'k arboxianhidridet, az O-trietilszilil-/í-hidroxivalin-N-karboxianhidridet és az O-tri-n-butilszilil-a-hidroxinorvalin-N-karboxianhidridet olyan eljárásban, ahol kiindulási vegyületként a megfelelő tri-rövidszénláncú-alkil-klórszilánt használjuk /3-hidroxileucinnal, ß-hidroxivalinnal, a-hidroxivalinnal, ill. ct-hidroxinorvalinnal együtt. Ugyanezeket a termékeket hasonló módon állíthatjuk elő azonos kiindulási anyagokból, azonban a piridint ekvivalens mennyiségű trietilaminnal helyettesítve. 10. példa Treonil-fenilalanin előállítása 145 mg fenilalanin 10 ml vízzel készített oldatát 10 ml 0,9 mólos bórsav-oldattal elegyítjük, az oldat pH-ját 50%-os vizes nátriumhidroxidoldattal keverőben 10,5-re állítjuk be, majd gyors keverés közben, nitrogén-atmoszférában kb. 3 perc alatt részletekben hozzáadunk 326 mg O-trimetilszilil-treonin-N-karboxianhidridet. A reakcióelegyet kb. 5 C°-on tartjuk, és a pH-t összesen 0,75 ml 2,5 n vizes nátriumhidroxid-oldatnak a reakció alatt való hozzácsepegtetésével állandó értéken tartjuk. Ezután kénsav hozzáadásával a pH-t 3-ra csökkentjük. A hőmérsékletet kb. 30 C°-ra hagyjuk növekedni, majd a reakcióelegyet 5 percen át dekarboxileztetjük. A reakcióelegyből kis mintát papír-elektroforézisnek vetünk alá 9,5-ös pH, 0,1 mólos nát-riurhtetraborát-oldatban 600 volt feszültségen, 3 órán át. így treonil-fenilalanint azonosítottunk olyan módon, hogy mozgékonyságát azonos körülmények között összehasonlítottuk hiteles mintával. A reakcióelegy fennmaradó részének p-H-ját 2,5 n vizes sósavval 6,5-re állítjuk be, majd az elegyet fagyasztva szárítjuk. A maradékot metanollal extraháljuk, szűrjük, és a szüredéket szárazra pároljuk. A maradékot kis mennyiségű vízben felvesszük, majd szűrjük. A szüredéket szárazra pároljuk, és a maradékot metanollal kezeljük. A metanolos oldatot dezaktivált csontszénen kromatografáljuk, és először vízzel (tizenkilenc 2 ml~es frakció), majd 5%-os ecetsav: aceton:víz rendszerrel eluáljük (47,5 ml aceton: 47,5 ml víz:5 ml ecetsav). A terméket úgy kapjuk, hogy egyesítjük a 20—26. frakciókat, amelyek mindegyike kb. 2 ml-t tartalmaz, és a kapott oldatot fagyasztva szárítjuk. 11. példa Szeril-fenilalanin előállítása 330 mg fenilalanint 10 ml vízben tartalmazó oldat és 10 ml 0,9 mólos bórsav elegyét keverőben 50%-os vizes nátriumhidroxid-oldattal 10,5-ös pH-ra állítjuk be, majd részletekben, erős keverés közben, három perc alatt, nitrogén-atmoszférában 406,6 mg trimetilszilil-szerin-N-karboxi-anhidridet adunk hozzá, miközben a hőmérsékletet 3 C°-on tartjuk. A pH-t összesen 0,85 ml 2,5 n vizes nátriumhidroxid-oldat cseppenkénti hozzáadásával állandó értéken tartjuk. Aliquot részt oldunk 10:1:3 butanol-ecetsav-víz elegyben, majd szilikagélen vékonyréteg-kromatografálásnak vetjük alá. A terméket úgy azonosítjuk, hogy mozgékonyságát hiteles mintáéval hasonlítjuk össze azonos körülmények között. 12. példa Treonil-metionil-O-benzilszeril-izoleucil-treonin előállítása 10 ml víz és 10 ml 0,9 mólos bórsav elegyének pH-ját 50%-os vizes nátriumhidroxid-oldattal keverőben 10-re állítjuk be, majd 1,081 g metionil-O-benzilszeril-izoleucil-treonint adunk hozzá. A pH-t további vizes nátriumhidroxid-oldattal 10,3-ra állítjuk be, majd gyors keverés közben, kb. 2 perc alatt részletekben 478 mg trimetilszilil-treonin-N-karboxi-anhidridet adunk hozzá, miközben a hőmérsékletet kb. 3 C°-on tartjuk. A hozzáadás alatt összesen 1 ml 2,5 n vizes nátriumhidroxid-oldattal a pH-t állandó értéken tartjuk. A reakcióelegyet vízzel ötszörös térfogatra hígítjuk, szűrjük, a szüredéket mossuk, és az egyesített szűrlet és mosóvizek pH-ját 50%-os kénsavval 6,7-re állítjuk be. Szilárd, amorf csapadékot kapunk, amelyet papír-elektroforézissel 600 volton 9,5-ös pH mellett 6,5 órán át 0,1 mólos nátriumtetraborát-oldattal a kívánt termékként azonosítottunk. 13. példa Glicil-tirozil-leucil-fenilalanin előállítása 3 millimól fenilalanin és 30 ml vizes káliumborátpuffer 10,5-ös pH-jú elegyét 3 C°-ra hűtjük, majd gyors keverés közben 3,2 millimól szilárd Ieucin-N-karboxi-anhidridet adunk hozzá. A reakciót 30 másodpercen át folytatjuk, és a pH-t tömény kénsavval 0 C°-on 3-as értékre állítjuk be, miközben nitrogénáramot vezetünk át az elegyen. A terméket nem különítjük el. A reakcióelegy pH-ját tömény káliumhidroxid hozzáadásával 10,0-ra állítjuk be, majd gyors keverés mellett 3,4-millimóí-trietilszilil-tirozin-N-karboxi-anhidrídet adunk hozzá közelítőleg 0 C° hőmérsékleten. A reakciót egy percen át 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 13
